动物出生后骨骼肌在生长发育和再生过程中,卫星细胞发挥着十分重要的作用,其分化及形成肌纤维的类型与肉品质密切相关,wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路是调节此过程的重要信号通路。近几年,wnt/β-catenin信号通路在骨骼肌生长和再生过程中的作用及机制研究受到人们的重视,已积累了一些相关研究成果。本综述系统阐述了wnt/β-catenin信号通路在卫星细胞自我更新、分化以及肌纤维类型形成中的作用。

【目的】卵泡抑素（Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ）能够调节骨骼肌肥大和脂肪沉积，可促进骨骼肌卫星细胞增殖。拟采用体外重组Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ处理增殖期的鸭骨骼肌卫星细胞，阐明ｔＧＦ－β／ｓｍａｄ信号通路在Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ调节鸭骨骼肌卫星细胞增殖过程中的作用机制。【方法】以孵化１４ ｄ的鸭胚为试验材料，采用差速贴壁的方法分离骨骼肌卫星细胞，待细胞长到７０％—８０％时，将培养基换成含有浓度分别为０、１、１０、１００ ｎＧ·ｍ ｌ－１的Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ培养基，继续培养３６ ｈ后，采用ＣＣＫ－８检测骨骼肌卫星细胞增殖情况；使用抗ｐａｘ７抗体染色，ｄａｐｉ染核，鉴定骨骼肌卫星细胞；采用ｒｅａｌ－ｔ．．．

【目的】卵泡抑素(Follistatin)能够调节骨骼肌肥大和脂肪沉积,可促进骨骼肌卫星细胞增殖。拟采用体外重组Follistatin处理增殖期的鸭骨骼肌卫星细胞,阐明TGF-β/Smad信号通路在Follistatin调节鸭骨骼肌卫星细胞增殖过程中的作用机制。【方法】以孵化14 d的鸭胚为试验材料,采用差速贴壁的方法分离骨骼肌卫星细胞,待细胞长到70%—80%时,将培养基换成含有浓度分别为0、1、10、100 ng·m L-1的Follistatin培养基,继续培养36 h后,采用CCK-8检测骨骼肌卫星细胞增殖情况;使用抗pax7抗体染色,DAPI染核,鉴定骨骼肌卫星细胞;采用real-t...

【目的】在地塞米松(DEX)诱导骨骼肌卫星细胞氧化应激的体外条件下,筛选丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号系统中起关键作用的信号通路。【方法】将体外培养的肉仔鸡胸肌骨骼肌卫星细胞(SCs)分别进行处理:Ⅰ、对照组;Ⅱ、DEX;Ⅲ、p38MAPK抑制剂;Ⅳ、DEX+p38MAPK抑制剂;Ⅴ、JNK抑制剂;Ⅵ、DEX+JNK抑制剂;Ⅶ、ERK5抑制剂;Ⅷ、DEX+ERK5抑制剂;Ⅸ、ERK1/2抑制剂;Ⅹ、DEX+ERK1/2抑制剂。除处理Ⅰ和处理Ⅱ外,其它处理首先用抑制剂预处理30min,弃去培养基后,再按处理设置分别加入含DEX的培养基或者正常培养基继续处理24h。处理结束后,分别测定细胞培...

【背景】肌肉系统是维持动物体生存生长的重要基础，在哺乳动物肌肉中，将近一半的肌肉为骨骼肌，骨骼肌通过细胞繁育增殖到迁移融合，逐步形成了具有收缩能力的附着在骨骼上的成熟肌束。在机体内，骨骼肌不仅参与动物生长，也参与呼吸、代谢等生理活动。目前许多研究表明，lncRNA具有调控肌肉生长发育的作用，是影响骨骼肌功能、疾病的关键因子。但由于lncRNA作用机制复杂，方式多样，在物种间保守型很低，故不同种属动物lncRNA之间作用关系不大，且大多数研究存在于人和小鼠等生物体内，而对牛肌肉生长影响的研究内容极少。近年来，人们发现lncRNA会与某些靶基因相互作用，进而调控肌肉细胞的发生过程。【目的】在前期采集不同月龄不同组织部位的牛肌肉，进行高通量测序，获得高表达差异的lncRNA，在对其调控成肌过程进行机制研究的基础上，探究长链非编码RNA lnc721与其靶基因MMP9的互作关系，以及MMP9对牛骨骼肌细胞生长发育的影响，以期为牛骨骼肌发育调控机制的研究提供参考。【方法】前期试验发现干扰lnc721对牛骨骼肌卫星细胞增殖具有正调控作用，且对其分化具有负调控作用。为了进一步探究lnc721对牛肌肉发育的调控通路。分别在牛骨骼肌卫星细胞的分化期设置了3个干扰lnc721牛骨骼肌卫星细胞组，与3个对照组采用NGS技术进行转录组测序，以期获得lnc721差异靶基因，进一步研究lnc721对牛骨骼肌发育的调控通路。根据筛选结果以及qRT-PCR的验证结果，试验选取MMP9作为lnc721的靶基因，并通过CatRAPID网站对lnc721与MMP9结合能力进行预测。设计并合成lnc721及MMP9干扰序列，转染至牛骨骼肌卫星细胞中，通过qRT-PCR、Western blot技术在mRNA水平与蛋白质水平分析下调lnc721对MMP9表达情况的影响。并且通过下调MMP9，采用qRT-PCR、Western blot与EdU技术检测增殖标志因子Ki67、Pax7以及分化标志因子MyHC与MyOG的表达情况，以反映下调MMP9对牛骨骼肌卫星细胞生长发育的影响。【结果】CatRAPID结果显示，lnc721与MMP9结合倾向为0.75，共有9个结合位点，二者存在互作结合。干扰lnc721之后，采用qRT-PCR分析，结果表明在细胞增殖期下调lnc721可以极显著抑制MMP9表达（P<0.01），而在分化期则极显著促进MMP9的表达（P<0.01），证实了MMP9为lnc721调控牛骨骼肌卫星细胞互作的靶基因。进而下调MMP9，检测对增殖期细胞的影响，发现Ki67的mRNA水平表达极显著上调（P<0.01）,Pax7蛋白表达量显著上调（P<0.05）,EdU观察下调MMP9后的阳性细胞率也明显升高。同样检测下调MMP9之后对细胞分化期的影响，发现下调MMP9后镜下观察发现下调MMP9会抑制肌管形成，同时MyHC的mRNA和蛋白表达量极显著下降(P<0.01), MyoG蛋白表达量显著下调(P<0.05)。【结论】lnc721与MMP9相互结合。在细胞增殖期干扰lnc721极显著抑制MMP9表达，而在分化期促进MMP9的表达，且干扰MMP9可促进细胞增殖并抑制分化。证明lnc721靶向MMP9调控牛骨骼肌卫星细胞的发育。

【目的】在骨骼肌生长或损伤刺激下,骨骼肌卫星细胞被激活、增殖分化形成肌管,促进骨骼肌的生长发育或修复组织创伤。FoxO1负调控骨骼肌的生成,但在骨骼肌卫星细胞分化过程中的作用未见报道。因此,笔者探索FoxO1对猪骨骼肌卫星细胞分化的影响,希望为深入研究FoxO1调控骨骼肌生长发育的作用机理奠定基础。【方法】以1—3日龄健康大白猪为材料,采用单根肌纤维法分离培养猪骨骼肌卫星细胞,接种第2天、第4天和第6天在倒置显微镜下观察细胞形态并拍照。在细胞分化第8天,用免疫荧光染色方法染肌管,DAPI染核,并在荧光倒置显微镜下观察拍照。待细胞汇合至70%—80%时,将培养基换成含50 nmol·L-1渥曼青...

【目的】探讨长链非编码RNA LncRNA-133a对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化过程的影响。【方法】利用测序样品3、6、9月龄胎牛及24月龄成年和牛骨骼肌肌肉组织,qRT-PCR法检测LncRNA-133a的组织时序表达谱。构建牛骨骼肌卫星细胞的体外成肌诱导分化模型,模拟牛骨骼肌的生长发育过程,qRT-PCR法检测LncRNA-133a和肌细胞分化标记因子MyoG、MHC的细胞时序表达谱。利用过表达LncRNA-133载体(pCDNA3.1-EGFP-LncRNA-133a)或LncRNA-133a抑制物(si-LncRNA 133a)转染牛骨骼肌卫星细胞,qRT-PCR法检测转染效率以及各转染处理组LncRNA-133a、MyoD、MyoG及MHC基因mRNA的表达水平,Western blotting检测MHC基因的蛋白表达水平;同时,通过EdU细胞增殖检测、免疫荧光蛋白染色技术检测牛骨骼肌卫星细胞增殖阶段的细胞增殖量和分化阶段的肌管融合程度。【结果】组织表达谱分析发现LncRNA-133a在3月龄胎牛肌肉组织中表达量最高,6月龄胎牛肌肉组织中次之,9月龄胎牛及成年牛肌肉组织中表达量最低,时序表达呈下降趋势;利用成功构建的牛骨骼肌卫星细胞体外诱导分化模型,进行LncRNA-133a、MyoG、MHC的细胞时序表达谱分析,结果发现在牛骨骼肌卫星细胞分化过程中(D0-D3),肌分化标记因子MyoG、MHC的表达水平逐渐升高,LncRNA-133a的表达在分化阶段呈上升趋势,且分化48 h时(D2)表达量最高;成功构建的过表达LncRNA-133a或抑制LncRNA-133a的牛骨骼肌卫星细胞模型,在增殖期(D0):与对照组相比,过表达LncRNA-133a处理组EdU增殖染色检测得到EdU阳性细胞数显著增加(P<0.01),而LncRNA-133a抑制处理组EdU阳性细胞数显著减少(P<0.01),且MHC蛋白的免疫荧光蛋白染色检测观察到融合肌管的体积占比更大;而LncRNA-133a抑制处理组MyoD、MyoG及MHC的mRNA表达水平均降低,其中MyoG显著降低(P<0.01),同时MHC蛋白融合肌管的体积占比也降低。【结论】研究证实LncRNA-133a具有促进牛骨骼肌卫星细胞增殖及分化的作用,为进一步挖掘LncRNA-133a调节牛骨骼肌卫星细胞增殖分化调控网络机制奠定了基础。

为探究副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）引起猪渗出性炎症的过程中血管内皮屏障的变化情况，以HPS感染原代猪血管内皮细胞，通过Western blot和荧光定量PCR检测HPS对Wnt/β-catenin通路及其下游靶基因表达的影响，并通过间接免疫荧光和跨内皮电阻测定检测细胞间粘附连接结构的改变。结果显示：HPS感染激活猪内皮细胞中的Wnt/β-catenin信号通路，促使胞质中的β-catenin蛋白发生核转位，导致胞膜处由β-catenin和血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）构成的粘附连接结构被破坏，细胞通透性增加。抑制Wnt/β-catenin通路下游血管内皮生长因子（VEGF）基因的表达，可以明显抑制β-catenin的核转位，显著恢复内皮细胞间β-catenin和VE-cadherin构成的粘附连接结构，恢复内皮细胞通透性。以上研究结果表明，HPS通过激活猪内皮细胞中Wnt/β-catenin通路，破坏细胞间粘附连接，增加内皮细胞通透性；同时，Wnt/β-catenin通路下游VEGF基因通过正反馈调节效应放大了HPS感染引起的Wnt/β-catenin信号通路的激活效应和细胞结构的损伤。

【目的】探讨体外培养条件下北京油鸡骨骼肌卫星细胞分离、培养及鉴定的方法,建立适于北京油鸡骨骼肌卫星细胞体外扩增的培养体系,为今后进一步研究北京油鸡骨骼肌卫星细胞提供技术平台。【方法】以15日龄的鸡胚胸肌为材料,采用联合酶消化法分离骨骼肌卫星细胞,差速贴壁法纯化细胞,使用Pax7、Desmin、Myod等骨骼肌卫星细胞的特异性标志对所得细胞进行免疫荧光鉴定,随后进行成肌诱导分化,并比较了3种培养体系对骨骼肌卫星细胞增殖的影响。【结果】细胞免疫荧光鉴定结果呈阳性,证实所培养的细胞为北京油鸡骨骼肌卫星细胞;成肌诱导后,细胞相互融合形成多核的肌管,成肌特异性标志MHC表达呈阳性;对不同扩增培养体系比较...

本试验旨在研究不同蛋白水平饲粮对藏羊肉品质及肌纤维组织学特性的影响。选取90只体况良好且体重相近[（15.40±0.81）kg]的2月龄藏羊，随机分为3组，每组30只，分别饲喂蛋白水平为10.20%（L组）、11.58%（M组）和13.03%（H组）的饲粮。预饲期7 d，试验期90 d。结果显示：M组藏羊肌肉抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性显著高于L组（P＜0.05）。M组肌肉弹性（Elasticity）显著高于H组和L组（P＜0.05），M组肌肉咀嚼性（Chewiness）和胶着性（Adhesion）显著低于H组和L组（P＜0.05）；H组Ⅰ、Ⅱa和Ⅱb型肌纤维直径显著大于L组（P＜0.05），M组Ⅰ、Ⅱa和Ⅱb型肌纤维密度显著大于H组（P＜0.05）；M组氧化型肌纤维数量、面积比例显著高于L组（P＜0.05）。M组与H组MyHCⅠ基因表达量均显著高于L组（P＜0.05），M组MyHCⅡa基因表达量显著高于L组（P＜0.05），L组MyHCⅡb基因表达量显著高于M组与H组（P＜0.05）。MyHCⅠ、MyHCⅡa基因表达量与咀嚼性（Chewiness）显著负相关（P＜0.05）。MyHCⅡ基因表达量与总抗氧化能力（T-AOC）显著负相关（P＜0.05），与咀嚼性（Chewiness）与硬度（Hardness）显著正相关（P＜0.05）。综上，在本试验条件下，当饲粮中蛋白水平为11.58%时，可改善藏羊背最长肌肌纤维特性，提高氧化型肌纤维数量和面积比例；增强其肌肉抗氧化性能，并改善肌肉品质。

【目的】肌纤维类型及其转化的调节是改善肉质的重要途径，最新研究表明，m6A RNA甲基化修饰在肌肉的分化中发挥着重要作用。以优良的地方品种——广西麻鸡作为研究对象，研究其性成熟日龄不同部位肌纤维类型的组成差异，探究m6A甲基化转移酶相关基因甲基化转移酶样蛋白3/14 (methyltransferase like 3/14, METTL3/14)、Wilm肿瘤1-相关蛋白（Wilms’ tumor 1-associating protein,WTAP）和病毒样m6A甲基转化酶（vir like m6A methyltransferase associated,VIRMA，也称KIAA1429）在不同部位肌肉组织和成肌细胞分化前后的表达差异，为阐明肌纤维类型组成及转换的调控机理提供参考。【方法】采用ATPase染色法比较广西麻鸡胸部、腿部和背部肌肉群7个部位肌纤维类型、直径和密度等肌纤维性状差异，采用比色法检测成肌细胞分化前后不同时间点内源性m6A甲基化水平，采用实时荧光定量PCR方法检测上述4个基因在广西麻鸡7个部位肌肉以及成肌细胞分化前后的表达差异，并将其与肌纤维性状和m6A甲基化水平进行相关性分析。【结果】广西麻鸡性成熟日龄胸部肌肉群的胸大肌和胸小肌全部由白肌纤维组成，腿部肌肉群的耻坐骨肌内侧头、腓肠肌内侧头和缝匠肌均以红肌纤维为主，而髂胫外侧肌以白肌纤维为主，背部肌肉群的背阔肌则以红肌纤维为主；总体上，红肌纤维比例多的肌肉肌纤维密度显著高于白肌纤维比例多的肌肉。METTL3、METTL14、WTAP和KIAA1429基因表达存在显著的组织和时间特异性，总体上，在红肌纤维为主的肌肉中的表达量高于白肌纤维为主的肌肉，在分化期成肌细胞中的表达量要显著高于增殖期成肌细胞。肌肉中METTL3、METTL14和WTAP具有相似的表达模式，均在背阔肌中表达量最高，显著高于其他肌肉组织；在耻坐骨肌内侧头和腓肠肌内侧头的表达量次之，显著高于缝匠肌、胸大肌、胸小肌和髂胫外侧肌。KIAA1429基因在腓肠肌内侧头的表达量最高，显著高于其他组织；在背阔肌中的表达量次之，显著高于耻坐骨肌内侧头、缝匠肌、胸大肌、胸小肌和髂胫外侧肌；在胸大肌中表达量最低，但与在胸小肌和髂胫外侧肌中的表达量差异不显著。在鸡成肌细胞中，METTL3和METTL14基因表达变化趋势较为一致，均表现出先持续升高后下降的趋势，在刚分离0 h细胞中的表达量最低，在诱导分化后2 d(D2)细胞中的表达量最高，显著的高于增殖期和诱导分化当天（D0）细胞中的表达量。WTAP和KIAA1429基因表达变化趋势也较为一致，均呈现持续上升的趋势，在刚分离细胞中的表达量最低，显著低于其他时间点，至19 h显著上升，D0天略有增加，接着显著上升至D5天达到高峰。同时发现，随着成肌细胞的分化，内源性RNA m6A甲基化水平逐步上升，分化期的水平显著高于增殖期，在D2天甲基化水平最高，显著高于其他各时间点，随后在D5天显著下降，但略高于D0天。肌肉和成肌细胞中，METTL3、METTL14、WTAP和KIAA1429基因的表达两两之间均表现出极显著的正相关关系；肌肉中4个基因的表达与红肌纤维比例存在显著的正相关关系，与白肌纤维比例则呈显著的负相关关系；成肌细胞中4个基因的表达与m6A甲基化水平之间也存在正相关关系。【结论】广西麻鸡不同部位肌肉肌纤维类型组成存在差异，所研究的m6A甲基化转移酶4个基因之间协同表达，并可能对鸡肌纤维类型组成、维持及成肌细胞分化具有一定的调控作用。

wnt/β-catenin信号通路在涡虫等多种生物的再生中发挥重要作用，本研究以环节动物始初小头虫（Capitella teleta）为研究对象，初步探究wnt/β-catenin信号通路对小头虫再生的影响。将截断损伤后的样本持续浸泡于30 μmol/L浓度外源性wnt/β-catenin信号通路小分子化合物抑制剂XAV-939中，发现小头虫的再生受到了抑制，与对照组相比再生速度明显减慢，且不能形成正常的再生芽基组织，通过神经和肌肉标记发现wnt信号通路被抑制后，小头虫再生过程中的神经、肌肉生长也受到了影响。后续通过EdU (5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)标记发现抑制剂处理组样本的增殖细胞数量显著少于正常组样本，表明wnt/β-catenin信号通路被抑制后会影响小头虫再生过程中的增殖细胞产生，从而调控小头虫的再生过程。在几种典型物种中wnt通路调控再生的比较研究表明Wnt信号通路在刺胞动物和冠轮动物全身再生中的功能相对保守。

为探讨ＨＨ信号通路在脂肪细胞分化过程中的作用机制，以猪脂肪间充质干细胞（ＡＤＳＣＳ）为材料，应用油红Ｏ染色法检测ＡＤＳＣＳ成脂分化过程中的形态变化；采用荧光定量ＰＣＲ及ＷｅＳｔｅＲｎ ＢｌＯｔ的方法检测ＨＨ通路Ｇｌｉ１及脂肪细胞分化转录因子的时序表达。通过嘌呤衍生物２，６，９－三元取代嘌呤（ＰｕＲｍＯＲＰＨＡｍｉｎｅ，Ｐｍ）激活猪ＡＤＳＣＳ细胞中ＨＨ信号通路，探讨体外激活ＨＨ信号通路对猪ＡＤＳＣＳ向脂肪细胞分化的作用及其机制。结果显示，在成脂诱导分化的过程中，经５μｍＯｌ／ｍｌ的Ｐｍ持续处理，细胞中Ｇｌｉ１的ｍＲｎＡ及蛋白表达量增加；猪ＡＤＳＣＳ向脂肪细胞分化的数目减少、细胞内甘油三酯含量降低．．．

为探究视黄酸（RA）在鱼类精原干细胞（SSC）增殖与分化中的作用，实验首先以三色荧光报告载体pGRY [延伸因子1α启动子驱动组蛋白H2B-绿色荧光融合蛋白、减数分裂联会复合体蛋白3（Scp3）启动子驱动嘌呤霉素红色荧光融合蛋白、精蛋白启动子驱动黄色荧光蛋白] 转染青鳉精原干细胞系SG3，获得稳转细胞SG3-pGRY，然后分别在2D与3D培养条件下检测RA信号对其增殖与分化的影响。结果显示，稳转细胞SG3-pGRY的红色荧光可监测细胞内源性Scp3的表达，且细胞仍保持干性及分化潜能，表明其可用于监测细胞分化状态。在2D培养条件下，即在细胞培养板中待细胞生长密度约90%就进行传代培养，RA可显著抑制细胞增殖，其受体α、β、γ泛抑制剂BMS493可促进细胞增殖；第48小时，RA处理可下调细胞多能性相关基因pou5f3、klf4表达，上调减数分裂相关基因dazl表达，但对其他减数分裂相关基因如scp3表达无明显影响；第8天，处理组及对照组均未能观察到红色荧光，这与已有报道RA处理体外培养小鼠SSC可显著促进Scp3表达，并进入减数分裂I期偶线期的研究结果明显不同。在3D培养条件下，即用96孔球形低吸附微量培养板进行培养，48小时后细胞成球状体聚集生长，RA、 BMS493处理组、对照组在48 h后均观察到明显红色荧光，减数分裂相关基因表达与2D相比显著上调；第8与第34天，RA处理组减数分裂相关基因表达均显著高于对照组，而BMS493处理组低于对照组。研究表明，RA信号可抑制SG3增殖，促进其分化，但不是诱导细胞发生减数分裂的关键分子。本研究不仅为鱼类SSC分化相关研究提供了良好研究模型，而且促进了对于RA信号在鱼类SSC增殖与分化中作用的深入认识。

【目的】ＩＧＦ－Ｉ－钙调磷酸酶（Ｃａ Ｎ）－ＮＦａＴ信号途径是调节肌肉生长、决定不同肌纤维类型的主要信号途径，本研究选择生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验材料，首次对不同品种鸭胚胎期和出雏早期肌肉中ＩＧＦ－Ｉ－Ｃａ Ｎ－ＮＦａＴ信号通路相关基因的表达规律及其与肌纤维类型的相关性进行了研究。【方法】采用实时荧光定量ＰＣＲ方法研究鸭１３、１７、２１、２５、２７胚龄和出雏后７日龄胰岛素样生长因子（ＩＮｓｕｌＩＮ－ｌＩｋｅ ＧＲｏｗＴｈ ＦａＣＴｏＲｓ，ＩＧＦ－Ｉ），钙调磷酸酶（ＣａｌＣＩＮｅｕＲＩＮ，ＣＮ ａα）和活化Ｔ细胞核因子（ＮｕＣｌｅａＲ ＦａＣＴｏＲ ｏＦ ａＣＴＩｖａＴｅｄ Ｔ Ｃｅｌｌ．．．