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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
王琪 车金远 鲍宝龙
omd基因编码骨调蛋白，可以调控人类骨骼的矿化。目前关于omd基因对鱼类骨骼矿化的作用尚不清楚。为了探究omd基因对鱼类骨骼的影响，调查了omd基因在斑马鱼不同发育阶段和不同组织的表达，并利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，成功构建斑马鱼omd基因突变体（omd-/-）。结果表明：omd基因在斑马鱼体内随着发育表达量逐渐增加，在脊柱和肌肉中表达较高；相比野生型斑马鱼，omd-/-品系斑马鱼的骨骼形态和尾部肌肉结构未发现明显变化，脊柱的钙含量下调59.81%；与野生型相比，omd-/-纯合敲除品系斑马鱼平均游泳距离下降33.93%，平均游泳速度下降39.44%，相对静止的时间增加88.26%，游泳能力下降。这些结果表明，omd基因缺失影响斑马鱼脊柱的矿化，并在一定程度上影响了斑马鱼的活动能力。
关键词：
omd 斑马鱼 骨骼 骨骼矿化 游泳
[期刊] 中国水产科学
[作者]
曹晓颖 赵金良 陈晓武 周昊天 郝月月 赵岩
采用软骨―硬骨双染色技术,描述了鳜(Siniperca chuatsi)仔稚鱼(1～35日龄)头骨、脊柱、附肢骨骼的骨化发育特征。结果显示:(1)头骨前鳃盖骨于14日龄最先骨化, 15日龄上下颌骨骨化,且上下颌骨相对长度呈现连续变化过程。17日龄后,颌齿、关节骨、舌颌骨骨化;19日龄,隅骨、间鳃盖骨、鳃盖骨、鳃条骨、额骨骨化。20日龄后,方骨、下鳃盖骨、辅上颌骨等骨化; 35日龄,头骨骨化基本完成。(2)脊柱于15日龄由前向后骨化, 20日龄背肋与腹肋由基部向末端骨化, 29日龄骨化完成。脉弓与脉棘、髓弓与髓棘均由前向后、由基部向末端骨化,脉棘与髓棘骨化时间晚于相应的椎体。(3)附肢骨骼骨化顺序依次为胸鳍、背鳍、臀鳍、腹鳍、尾鳍。胸鳍匙骨于16日龄骨化,乌喙骨与肩胛骨于25日龄骨化;背鳍、臀鳍分别于18日龄、20日龄骨化,骨化方式相似;腹鳍于23日龄骨化,骨化方式与胸鳍相反;尾杆骨、尾下骨于25日龄骨化,附肢骨骼于35日龄基本骨化完成。结果表明,鳜骨骼骨化发育与其早期运动、摄食与御敌等行为密切相关。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
杨笑星 佟广香 闫婷 董乐 孙志鹏 徐欢 唐国盘 匡友谊
为阐明cilp基因在斑马鱼椎骨和肌间骨发育中的作用，利用CRISPR/Cas9建立了斑马鱼cilp基因敲除纯合突变系（cilp~(-/-)），对其进行了骨骼表型的观察，并进一步采用qRT-PCR分析了14个骨骼发育相关基因在突变体胚胎发育阶段和成鱼骨骼中的表达水平变化。结果显示，与野生型斑马鱼相比，90 dph（days post hatched）cilp~(-/-)斑马鱼的肌间骨数量显著减少了10.27%（P<0.05），而肌间骨的长度无明显变化；同时突变体斑马鱼中椎骨发生异常融合及髓棘缺失。qRT-PCR结果显示，与野生型相比，col1a1a、sp7、smad4a和smad5基因在胚胎发育的整个时期都存在显著的差异（P<0.01）；在突变体成鱼尾部骨骼组织中bmp2a、bmp2b、smad5、sp7、runx2a、runx2b和bglap基因的表达量均显著低于野生型，表明cilp基因敲除导致了BMPs和SMADs家族基因的表达水平下降，并下调了下游的成骨细胞发育相关基因的表达量，推测cilp功能缺失可能通过抑制BMPs信号通路，影响成骨细胞分化和骨形成，从而导致了肌间骨数量的减少和脊椎骨异常融合。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
毛非凡 陈刚 马骞 周启苓 施钢 黄建盛 邝杰华
本研究采用软骨—硬骨双染色技术对常规养殖条件下的军曹鱼(Rachycentron canadum)稚鱼全骨骼进行染色，观察并分析其骨骼畸形发生部位及相应的畸形类型。结果表明，在同一批次繁育的180个军曹鱼稚鱼(25日龄)骨骼标本中，有72个标本存在畸形情况，畸形率为40.00%。骨骼畸形类型共计22种，畸形率由高到低主要表现为米克尔氏软骨畸形、尾上骨缺失、脉棘分叉、基舌骨异位和尾上骨愈合等；所有骨骼畸形均未表现出显著可见的外部形态变化。但正常个体与骨骼畸形个体的全长存在极显著差异(P<0.01)。本研究结果表明，骨骼畸形对军曹鱼生长产生了影响。本研究为研究鱼类骨骼畸形的发生过程和原因、减少畸形率和优化苗种培育养殖条件提供了理论基础。
关键词：
军曹鱼 稚鱼 软骨—硬骨双染色 骨骼畸形
[期刊] 中国水产科学
[作者]
侯艳雯 刘玮 姜蓬垒 张俊芳 韩兵社
低温压力会导致鱼类生理功能失调、机体损伤甚至死亡,鱼类会产生各种适应性变化来应对低温压力,其中涉及的表观遗传学机制越来越受到重视。为了探讨鱼类低温应激压力下的表观遗传学调控机制,本研究对斑马鱼(Daniorerio)胚胎成纤维细胞ZF4进行短期低温胁迫(18℃处理3d、5d和10℃处理3d、5d)和长期低温胁迫(18℃处理30 d),然后用具有不同甲基化敏感性的同裂酶HpaⅡ和MspⅠ对细胞基因组DNA进行酶切以监测细胞基因组DNA甲基化水平变化。结果显示短期低温胁迫下ZF4细胞生长受到抑制甚至死亡,而经过长期低温胁迫的ZF4细胞对低温压力产生了一定适应性。并且低温胁迫下DNA甲基化水平呈现动态变化,短期低温培养细胞的基因组DNA甲基化水平明显增高,但是长期低温培养细胞的DNA甲基化水平反而下降。此外,研究发现抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)或者共济失调–毛细血管扩张突变蛋白(ataxia telangiectasia mutated,ATM)抑制剂KU-55933可以抑制18℃5 d低温处理后的ZF4细胞DNA甲基化水平的增高,说明活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生和ATM的激活介导了DNA甲基化水平的增高。本研究结果显示,短期低温刺激下ZF4细胞ROS的产生导致DNA损伤,激活DNA损伤修复机制,进而导致基因组DNA甲基化水平上升,该研究为后期斑马鱼低温胁迫分子机制的研究奠定基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
郑珂 岳昊 郑攀龙 马振华
骨骼畸形可导致鱼类运动困难、摄食能力降低、生长缓慢、成活率低，因此，畸形鱼苗的出现将增加生产成本、影响养殖的经济效益。在海水鱼类人工育苗阶段，骨骼畸形现象普遍存在，严重制约了海水鱼类养殖产业的可持续发展。本文首先系统总结了卵形鲳鲹、黄尾鰤、尖吻鲈等经济海水鱼类颌骨、脊柱、尾骨的早期发育时序及特点，比较了仔、稚鱼骨骼畸形发生的部位、时间及发生规律。之后针对仔、稚鱼阶段影响骨骼发育的主要因素，从遗传、环境、营养等方面进行了剖析，以期为寻找降低人工养殖条件下海水鱼类仔、稚鱼的骨骼畸形提供启示。
关键词：
海水仔、稚鱼 骨骼发育 骨骼畸形
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马慧 庄志猛 柳淑芳 马骞 王秀利
采用硬骨-软骨双染色技术对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)早期发育阶段仔稚鱼全骨骼进行染色,研究其骨骼畸形发生的时间与部位及相应部位的畸形类型。实验结果表明,1~50日龄半滑舌鳎仔稚鱼的32批次495个骨骼标本中,骨骼畸形类型有14种,主要表现为脊椎骨的融合、增生、局部肥大,髓棘和脉棘的分叉和分离,尾鳍的分叉等。骨骼畸形主要发生于变态后期(25日龄)和变态后(40日龄),2个发育阶段的畸形率分别31.58%和25%。骨骼畸形的部位多见于脊柱的PH、HE和CA区,CE区尚未发现畸形。骨骼畸形会严重影响鱼类的外部形态、减缓生长及降低其市场价值。本研究初步探讨...
关键词：
半滑舌鳎 仔稚鱼 骨骼发育 畸形
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘海平 谢从新 张磊 张惠娟 熊冬梅
采用改进的透明骨骼法,研究了黑斑原(鱼兆)(Glyptosternum maculatum)的脑颅骨骼。其脑颅骨骼由28块膜骨、软骨化骨以及复性骨组成,眼区系列骨骼退化,缺少围框骨系,仅有额骨、副蝶骨、翼蝶骨,同时部分脑颅骨骼发生特化,如出现了颌须骨、基垫骨,这些骨骼在其他鱼类中未有报道。这些退化和特化现象与黑斑原(鱼兆)的生境有着密切的关系。黑斑原(鱼兆)的脑颅骨骼具有大多数底栖鱼类脑颅共有的结构:前囱和后囱。黑斑原(鱼兆)脑颅各骨骼与鱼脑接触面或为隆嵴,或为陷窝,从而最大程度地保护了鱼脑免受外界的冲击和震荡。一些骨骼存在大小不一,位置相对固定的孔眼,为出入大脑的血管及神经的通道。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马海田 韩正康 王国杰 邹思湘
研究 3种异黄酮 (Da、IPF和 7HF) 对雄性大鼠芳香化酶活性及骨骼肌生长的影响。试验选用 20只 28日龄雄性SD大鼠, 随机分成 4组, 每组 5只, 其中 1组为对照组, 另外 3组在每千克日粮中分别添加 5mg的Da、IPF和 7HF。实验结果表明, Da、IPF和 7HF均能升高腿肌中RNA/DNA的比值, 分别较对照组升高了 19 09%、9 09%和 15 45%;同时显著增加血清中睾酮的含量, 降低血清中雌二醇的含量, 抑制睾丸组织中芳香化酶的活性。提示异黄酮 (Da、IPF、7HF) 通过抑制芳香化酶活性而降低睾酮向雌二醇的转化, 使体内睾酮含量升高, 有助于促进动物的...
关键词：
异黄酮 雄性大鼠 芳香化酶 肌肉生长
[期刊] 水产学报
[作者]
戚常乐 卜宪勇 郑佳君 何轶松 石朦雨 孔有琴 丁志丽 陈立侨 叶金云
为了解外骨骼矿化期虾蟹类脂代谢特点及与钙离子的关系，实验选择蜕壳前期和蜕壳后期中华绒螯蟹，比较2个时期不同组织离子和营养物质变化情况，并进一步通过转录组学分析其肝胰腺营养物质代谢特点。结果显示，蜕壳后期肝胰腺和血淋巴钙离子含量显著降低，而蜕壳后期附肢肌肉中钙离子的含量则显著升高，蜕壳后期肝胰腺中钙磷比极显著降低，附肢肌肉钙磷比与之呈相反的趋势。与蜕壳前期相比，肝胰腺中甘油三酯含量极显著降低，肝胰腺甘油三酯和钙离子呈极显著的相关性。通过转录组学分析，发现肝胰腺脂代谢相关差异基因113个，89个为上调基因，24个为下调基因。这些差异基因主要富集在类固醇激素合成、甘油酯代谢、脂肪酸分解代谢、甘油磷脂代谢和亚油酸代谢。研究表明，中华绒螯蟹外骨骼矿化过程中，肝胰腺中储存的钙离子被运送至肌肉组织用于新表皮的矿化，该过程和肝胰腺甘油三酯相关；甘油三酯可能为外骨骼矿化提供了能量或者物质基础，以及参与类固醇类激素的合成并作用于外骨骼的矿化。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
王凡 牛晓莹 刘飞 袁金翠 李聪歌 马雅雯 孟祥杰
为了探讨三氯生(TCS)对硬骨鱼类性腺损伤作用的分子机制,通过半静态水体暴露法对斑马鱼(Danio rerio)进行染毒,将斑马鱼暴露在2种不同TCS浓度(0.034 mg/L和0.068 mg/L)溶液中,同时设置空白对照组,42 d后,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,探究TCS对斑马鱼卵巢抗氧化及凋亡相关基因表达的影响。结果发现:与空白对照相比,SOD、CAT和GPx1a基因在0.068 mg/L TCS处理组表达水平显著下调,GPx1和MT-2基因在0.034 mg/L浓度组表达显著上调;Bcl-2基因在0.068 mg/L浓度组表达显著下调,p53基因在0.034 mg/L浓度组表达极显著上调,Bax在TCS处理组中均显著上调。以上研究结果表明:较高浓度TCS显著影响了斑马鱼卵巢抗氧化和凋亡相关基因的表达,从而产生了氧化损伤和加速细胞凋亡的发生。
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘瑞莉 吴磊 袁玮 柏学进 吕娟娟 董雅娟
旨在基于转录组筛选肉牛骨骼肌差异基因,探究差异基因对骨骼肌转录调控的影响,鉴定其与肌肉生长发育的关系,为研究骨骼肌生长发育的分子机制提供理论依据。采取12月龄的布莱凯特黑牛和鲁西黄牛背最长肌,利用Illumina 2500进行转录组测序,通过综合生物信息学分析(差异基因筛选、GO分类、KEGG富集分析和蛋白互作网络等)筛选骨骼肌差异的调控基因。布莱凯特黑牛和鲁西黄牛2个文库分别存在13 242,13 350个基因,共计13 758个基因。5 500个基因表达量相同,约占总参考基因的39. 98%,8 258个基因表达量有所不同,占比60. 02%。获得554个差异显著的基因作为差异表达基因,其中296个基因表达上调,258个基因表达下调。GO功能注释结果显示,生物学过程、细胞组分和分子功能分别包括22 641,7 720和4 414个基因,其中29个基因与肌细胞的发育和分化有关; KEGG富集到Wnt、CMC、TGF-β、DCM、ROAC、VSMC 6条肌肉生长发育相关通路,筛选骨骼肌候选基因MYL2、MYL3和MYLPF。MYL2、MYL3和MYLPF是Wnt、DMC和TGF-β信号通路中的成员,参与了肌细胞和肌肉组织的形成的过程,推测MYL2、MYL3和MYLPF在骨骼肌生长发育过程中发挥重要作用。
关键词：
布莱凯特黑牛 鲁西黄牛 转录组 骨骼肌
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨昕冉 马鑫浩 杜嘉伟 昝林森
【目的】近年来，RNA m~6A甲基化修饰在肌肉发育中的作用不断被发现，通过探究m~6A甲基化酶相关基因，包括METTL3,METTL14,WTAP,FTO和ALKBH5，在牛肌肉组织以及骨骼肌卫星细胞（skeletal muscle satellite cells, SMSCs）增殖和分化过程中的表达，同时分析体外成肌分化过程中m~6A甲基化水平的变化，为阐明m~6A修饰在骨骼肌发育中的作用及机制提供参考。【方法】使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测m~6A甲基化酶相关基因在新生和成年牛不同部位骨骼肌中的表达。随后在秦川牛肉用新品系背最长肌中分离SMSCs，通过生长曲线、免疫荧光和RT-qPCR技术验证SMSCs的增殖和成肌分化功能，使用RT-qPCR检测m~6A甲基化酶相关基因在SMSCs增殖期24、36、48、60、72 h和分化第0、2、4、6、8天中的时序表达谱。最后利用LC-MS/MS和Dot blot技术检测SMSCs分化过程中m~6A甲基化水平的变化。【结果】METTL3、METTL14和WTAP等m~6A甲基化转移酶基因在成年牛背最长肌、前腿肌和后腿肌中的表达量均显著低于新生牛（P<0.01）。FTO和ALKBH5等m~6A去甲基化酶基因在成年牛后腿肌中的表达更高（P<0.01）,ALKBH5在成年牛背最长肌中的表达也较高（P<0.01）。【结论】m~6A甲基转移酶和去甲基化酶在新生牛和成年牛骨骼肌中的表达变化存在较为明显的差异，表明m~6A修饰可能对秦川牛骨骼肌的发育具有重要作用。同时，这些m~6A相关甲基化酶可能参与调控牛骨骼肌卫星细胞的增殖和分化。这一发现为研究m~6A甲基化修饰调控骨骼肌生成的作用及机制提供理论依据。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘海芳 王凡 姚卫云
为探究三氯生(TCS)对于硬骨鱼类的凋亡相关基因表达的影响,以雄性斑马鱼(Danio Rerio)为试验动物,采用半静态水体接触染毒法,将斑马鱼分别置于质量浓度为17、34和68μg/L的TCS溶液中,并设计空白对照组,42 d后,对鳃组织进行采样,利用普通PCR和RT-qPCR技术分析雄性斑马鱼鳃组织凋亡基因Bcl-2、Bax、MDM2、p53的表达量。研究发现,与空白对照组相比,Bax和p53基因在TCS处理组中的表达量都出现了下调趋势,且在68μg/L的TCS处理组中表达水平显著下调;Bcl-2在各TCS处理组中无显著变化;MDM2基因在34μg/L和68μg/L TCS处理浓度组中表现为极显著上调。研究结果表明:高浓度TCS对雄性斑马鱼鳃组织凋亡相关基因的表达具有一定的影响。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘飞 王凡 郑雅婷 李萌萌 冉娜娜 高晓杨 石亚男 朱娜娜 程惠敏 杨瑞
为了探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对斑马鱼早期生命阶段下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)和下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)相关功能基因表达的影响，将斑马鱼的受精卵暴露于10、30和300μg/L DEHP溶液中，同时设置空白对照，96 h后，利用实时荧光定量PCR技术，测定斑马鱼仔鱼HPG和HPA轴上12个功能基因的表达。结果显示，与对照组相比，30μg/L DEHP处理组的Cyp19b、GnRH3、Era和ERβ基因表达量显著升高，GnRH2、Pomc、Mr、Mc2r、Crh、Gr和Crhbp基因在各DEHP处理组表达量显著降低，FSH-β和Crhbp基因表达量无显著变化。以上研究结果表明：DEHP对斑马鱼胚胎/仔鱼阶段的2个主要内分泌分子通路产生了显著影响，将会导致内分泌功能的改变，从而可能影响斑马鱼的后期生长发育。
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