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[期刊] 中国农业科学
[作者]
徐蕾 于嘉霖 刘莉 邓光存 吴晓玲
【目的】探究lincRNA Cox2对BCG(Bacillus Calmette-Guérin)感染的RAW264.7巨噬细胞糖酵解进程的调控作用，阐明Mtb与巨噬细胞之间的相互作用，为结核病的诊断和治疗提供新的靶点。【方法】利用小干扰RNA敲减lincRNA Cox2的表达，以及使用miR-129-5p mimics过表达载体，结合BCG感染，通过实时荧光定量PCR检测lincRNA Cox2、miR-129-5p和促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6的表达量；乳酸含量检测试剂盒检测乳酸（LD）的分泌情况；平板涂布法检测巨噬细胞菌载量情况；双荧光素酶报告基因系统验证lincRNA Cox2与miR-129-5p以及miR-129-5p与AMPK的互作关系；蛋白免疫印迹检测AMPK(AMP依赖蛋白激酶)及糖酵解途径中关键基因HK1（己糖激酶1）、PKM2（丙酮酸激酶2）和LDHA（乳酸脱氢酶）的表达变化。【结果】BCG感染12 h能够极显著上调RAW264.7巨噬细胞中lincRNA Cox2的表达（P=0.000013），与BCG组相比，siRNA+BCG组中AMPK(P=0.000771)、HK1(P=0.00323)、PKM2(P=0.000135)和LDHA(P=0.002532)的表达量以及乳酸的分泌量（P=0.020802）发生显著上调，而促炎因子IL-1β(P=0.000451)、TNF-α(P=0.000147)、IL-6(P=0.0001)的表达发生显著下调，菌载量试验表明siRNA+BCG组中的巨噬细胞菌载量显著下调（P=0.000127）。双荧光素酶报告基因系统表明lincRNA Cox2和miR-129-5p存在相互作用关系并以AMPK为靶基因。BCG感染RAW264.7巨噬细胞12 h后极显著下调miR-129-5p的表达（P=0.000156），与BCG组相比，miR-129-5p mimics+BCG组中AMPK(P=0.000262)、HK1(P=0.019524)、PKM2(P=0.001658)和LDHA(P=0.000887)表达量以及乳酸分泌量（P=0.044952）发生显著下调。【结论】lincRNA Cox2通过海绵吸附miR-129-5p并靶向AMPK，促进BCG感染的RAW264.7巨噬细胞糖酵解进程。
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