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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵鸿昊 李学华 曾聪 王卫民 董在杰 高泽霞
应用荧光定量ＰＣＲ方法检测团头鲂ｌｅＰｔｉｎ及其相关基因—瘦素受体（ｌｅＰｔｉｎ ＲｅＣｅＰｔｏＲ，ｌｅＰｔｉｎ－Ｒ）和瘦素受体重叠转录产物类似物１基因（ｌｅＰｔｉｎ ＲｅＣｅＰｔｏＲ ｏｖｅＲｌａＰＰｉｎｇ ｔＲａｎｓＣＲｉＰｔ ｌｉｋｅ－１，ｌｅＰＲｏｔｌ－１）在胚胎发育早期及成鱼各组织的表达量。结果显示，３个基因在团头鲂成鱼所有检测组织中均有所表达，表明３个基因在团头鲂机体中具有多重生理功能。早期发育过程中的表达量结果显示ｌｅＰｔｉｎ－Ｒ和ｌｅＰＲｏｔｌ－１基因在胚胎阶段的表达水平变化趋势一致，而ｌｅＰｔｉｎ在破膜后５ｄ前一直处于较低并呈波动性变化；出膜后１２ｄ时ｌｅＰｔｉｎ－Ｒ和ｌｅＰ．．．
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
杨绒 陈松林 李伟 王志坚
抗菌肽hepcidin是由hepcidin基因编码产生的小分子多肽,是机体天然免疫的重要因子。本文利用RT-PCR的方法分析表明,抗菌肽hepcidin基因在牙鲆成鱼不同组织和不同发育时期胚胎中普遍表达,但是表达水平存在着明显的差异。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
朱德杰 吴亚明 陈宇龙 高泽霞
为明确鱼类咽齿发生发育的分子机制，以我国特有的经济鱼类团头鲂（Megalobrama amblycephala）为研究对象，通过团头鲂全基因组序列Blast获得团头鲂分泌型钙结合磷蛋白（secretory calciumbinding phosphoprotein,SCPP）家族基因的cDNA序列，采用实时荧光定量的方法比较分析SCPP家族基因在团头鲂咽齿发生发育关键时期第四、第五鳃弓中的表达情况，以及在1龄团头鲂不同组织中的表达情况，筛选调控咽齿发育的关键调控基因。研究结果显示，团头鲂enam、scpp1、ambn、scpp9、odam、spp1与斑马鱼具有较高同源性，进化树中距离较近；通过比对不同脊椎动物enam与odam这2个基因编码的氨基酸序列，发现在鱼类中均存在2段氨基酸序列的缺失。1龄团头鲂不同组织的SCPP家族基因定量表达结果显示，enam、scpp1、ambn、scpp9和spp1在第五鳃弓（有咽齿）和肋骨里面有很高的表达量，与其他组织中的表达水平大多存在显著性差异（P
[期刊] 水产学报
[作者]
吴婷婷 杨弘 董在杰 夏德全 史瀛仙 季肖东 沈玉 孙伟勇
采用显微注射方法，将带有小鼠ＭＴ－１基因启动顺序与人生长激素ｈＧＨ基因顺序重组的线状ＤＮＡ片段，注入团头鲂和鲤的受精卵，获得成活的实验鱼。经斑点、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、放射免疫和酶联等方法检测，表明外源基因在受体鱼中得到整合、转录、翻译和表达，并具促生长效应。转基因雌鱼和雄鱼有性繁殖所获得的子鱼带有外源基因，表明外源基因能通过性细胞传递给子代，并仍具促生长效应。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
王玉青 邬长松 马洁乐 陈会杰 刘小玲
为了探究诱导型一氧化氮合酶(NOS2)在嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染团头鲂(Megalobrama amblycephala)时发挥的作用,克隆并分析了团头鲂NOS2基因。结果显示,NOS2基因的cDNA序列全长4 215 bp,编码1 080个氨基酸。氨基酸序列同源性分析表明,团头鲂NOS2基因与草鱼NOS2基因的相似性最高,达95%。进化关系分析表明,团头鲂NOS2基因与鲤科鱼类NOS2基因聚在一支。实时荧光定量PCR检测的结果表明,在嗜水气单胞菌感染团头鲂后,NOS2基因在肝脏和头肾中被诱导表达;在脾脏中NOS2基因在3 h被诱导表达,其余时间点表达量显著下调;在肠道组织中NOS2基因在3 h下调表达,在6 h有微弱的上调,之后趋于稳定。研究结果为进一步探索NOS2基因在嗜水气单胞菌感染团头鲂后免疫应答中发挥的作用打下基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
詹柒凤 丁祝进 崔蕾 范君 王卫民 刘红
为研究抗菌肽ＮＫ－ＬＹＳＩＮ在团头鲂免疫系统中的可能功能，本实验从团头鲂转录组中钓取到２个ＮＫ－ＬＹＳＩＮ基因（ＮＫＬａ和ＮＫＬｂ），通过ＰＣＲ扩增并测序验证其ＯＲＦ序列。通过荧光定量ＰＣＲ检测其在健康组织和嗜水气单胞菌感染后免疫组织中的表达，并构建其原核表达体系。结果显示，团头鲂ＮＫＬａ和ＮＫＬｂ分别编码１２２和１３６个氨基酸，ＮＫＬａ和ＮＫＬｂ均属于鞘脂激活蛋白样蛋白家族成员，各含有６个高度保守的半胱氨酸及１个ＳａＰ ｂ结构域。在健康团头鲂各组织中，ＮＫＬａ在脾脏中表达量极高，在肌肉和血液中表达量极低；而ＮＫＬｂ则在肠中表达量较高，在头肾中表达量较低，在其他组织均有表达。ＮＫＬａ和ＮＫＬｂ．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈宇龙 张丽红 周佳佳 孟佑廉 高泽霞
为分析肌腱发育相关基因tnmd/xirp2a与团头鲂肌间骨发育之间的相关性,通过克隆获得团头鲂tnmd/xirp2a的cDNA序列,其中tnmd的cDNA全长为1 420bp,开放阅读框为906bp,共编码301个氨基酸;xirp2a的cDNA全长为11 715bp,包括开放阅读框9 522bp,编码3 174个氨基酸。系统进化研究表明,tnmd/xirp2a基因在不同脊椎动物中保守性很低,且相比哺乳类和家禽类,鱼类tnmd基因存在一段氨基酸的缺失。采用荧光定量方法比较分析tnmd/xirp2a在团头鲂成鱼不同组织及肌间骨发生发育4个关键时期的表达情况,结果显示,tnmd/xirp2a在肌肉和肌间骨中的表达量均显著高于其他组织,且肌肉中tnmd基因表达高于肌间骨(P<0.05),而xirp2a在肌间骨中的表达高于肌肉组织(P<0.05)。在肌间骨发育4个关键时期(Ⅰ:尾部尚未出现肌间骨;Ⅱ:尾部出现少量肌间骨;Ⅲ:尾部肌间骨大量出现且长度增加;Ⅳ:肌间骨从尾部到背部全部出现且形态成熟)中,tnmd在第Ⅲ时期的表达水平显著高于另外3个时期;在第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ时期之间,xirp2a的表达水平没有显著性差异。此结果表明,tnmd基因在肌间骨的发育过程中存在潜在作用,而xirp2a基因与肌间骨的发育之间的相关性还需进一步研究。
[期刊] 水产学报
[作者]
刘宁 关素华 王卫民 刘寒
为了研究团头鲂嗅觉器官的发育过程和嗅觉受体基因（ORs）在嗅囊发育不同时期的组织表达模式，实验基于组织学、形态学及实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）的方法进行了探究。组织形态学结果显示，团头鲂嗅觉器官位于后背部和两侧眼睛前方，嗅囊紧贴于嗅腔底部，形状近似椭圆形，嗅基板沿着头尾方向平行排列。嗅囊在团头鲂刚孵化时出现嗅窝外围凹进的痕迹，随后凹进处长出嗅窝，并在中央出现长条形的嗅基板。随着仔鱼的生长发育，单侧嗅囊初级嗅基板由疏松逐渐排列紧密，嗅基板隆起高度、数量及嗅囊总体表面积逐渐增加，在成鱼阶段趋于稳定。qRT-PCR结果显示，代表性ORs在团头鲂发育不同时期的组织中表达模式各异，其中Beta-2、9、10、11在胚胎发育期的囊胚期、胚孔闭合期及嗅板期高表达；Beta-2、9、10、11和Epsilon-7在仔稚鱼期的3～15 dpf中微弱表达，在30～60 dpf时期高表达；Beta-2、10、11及Epsilon-6、7、10、13在幼鱼期至成鱼期嗅囊中高表达，Beta-2、10、9、11及Epsilon-7、10、13在3月龄团头鲂嗅球中高表达；Beta-2、10在幼鱼期至成鱼期脑中低表达。研究表明，团头鲂嗅觉器官的发育进程与ORs表达相关，不同发育时期ORs主要表达部位均在嗅囊中。本研究对进一步探究ORs的功能提供理论支持，也为后续深入研究鱼类嗅觉识别机制奠定了基础。
关键词：
团头鲂 嗅觉器官 嗅觉受体基因 基因表达
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
罗蕾 陈阿琴 吕为群
促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone,CRH)、尾加压素Ⅰ(UrotensinⅠ,UⅠ)和尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)广泛存在于脊椎动物中。在鱼类中,它们在渗透压调节、繁殖、营养代谢以及应激反应中发挥着重要作用。本研究中,通过收集0、1.5、3.7、5.3、8、10、16、24、48、72、96、120和144 hpf(hours post-fertilization)的斑马鱼早期发育样品,运用荧光定量PCR技术进行检测发现CRH、UⅠ、UⅡα和UⅡβmRNA从0 hpf开始存在表达,而且CRH、UⅠ、UⅡα和UⅡβ的表达量随发育...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
庞连慧 罗双双 石林林 陈天圣 刘红 王焕岭
为研究鱼类细胞分裂周期蛋白20基因（cell division cycle 20 homolog,cdc20）的功能，以团头鲂为试验对象，经PCR扩增获得了团头鲂cdc20基因的CDS，基于多序列比对和系统进化树分析该基因的结构和不同物种间的进化关系，采用半定量PCR(semi-quantitative reverse transcription PCR,sqRT-PCR)、荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和切片原位杂交的方法检测了该基因的时空表达模式。结果显示，该基因编码区所包含的序列长度为1 482 bp，编码493 aa。团头鲂Cdc20氨基酸序列在进化上十分保守，具有7个WD40基序形成的稳定7叶β螺旋桨状结构，与鲤和斑马鱼的相似性最高。qRT-PCR结果显示团头鲂cdc20基因在早期胚胎中的表达量最高，随后呈下降趋势。sqRT-PCR检测发现cdc20基因主要在性腺中表达。性腺切片原位杂交结果显示cdc20在团头鲂各时期卵母细胞中均有表达，主要集中在Ⅱ期卵母细胞的胞质和Ⅲ、Ⅵ期卵母细胞的卵黄颗粒中；另外也发现该基因在精巢的精原细胞和生精小管的生殖上皮中表达量最高，在精子中的表达较低。以上结果表明团头鲂cdc20基因是一个母源基因，可能参与生殖细胞的发育。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
韦新兰 张杰 陈丽萍 王卫民 高泽霞 王焕岭
采用RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术从团头鲂精巢中克隆出精子发生相关基因4(sper-matogenesis associated gene 4,SPATA4)。该基因cDNA全长为1 076 bp,包括1个678 bp的完整阅读框架,编码225个氨基酸,预测的氨基酸序列的分子质量为25.72 ku,等电点为9.32。序列分析显示团头鲂SPATA4基因与其他脊椎动物同源性较高。荧光定量PCR结果显示SPATA4基因在受精后1～206 h期间,该基因在受精后4 h和受精后28 h的表达量最高,在受精后50 h表达量最低,而在其他时期的表达水平基本一...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
苏利娜 丁祝进 李鸿 周凤娟 王卫民 刘红
为研究团头鲂Dmrt4基因的可能作用,采用RACE-PCR技术克隆了团头鲂卵巢Dmrt4基因的cDNA全长序列,采用实时荧光定量PCR技术对其胚胎及出膜后30d内各期、成鱼不同组织、雌雄性腺各分期的表达进行研究。结果表明,团头鲂Dmrt4基因至少存在2种不同的剪接形式,分别命名为Dmrt4a和Dmrt4b。其中,Dmrt4acDNA全长1 265bp,编码352个氨基酸,含DM和DMA 2个结构域;Dmrt4b cDNA全长1 081bp,编码281个氨基酸,仅含DMA结构域。氨基酸序列同源性分析显示,团头鲂Dmrt4与牙鲆、奥利亚罗非鱼的同源性最高。实时荧光定量PCR结果表明,Dmrt4基因...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
涂佳鹏 黄春筱 黄岩 王焕岭
以团头鲂为研究对象,扩增获得Junctophilin(Jph)家族4个成员,jph1a、jph1b、jph2和jph3的cDNA编码序列,分别为2 031、2 016、2 358和2361 bp,分别编码676、671、785和786 aa。团头鲂jphs均由5个外显子和4个内含子组成,与大多数物种的JPHs基因结构相似;结构域预测显示出8个MORN和1个TM结构域,且蛋白多序列比对分析显示Jphs在进化上非常保守。基于qRT-PCR(quantitative real-time PCR)分析显示,这4个基因呈现出组织特异性表达,其中jph1a、jph1b和jph2主要在肌肉和心脏中表达,而jph3主要表达于心脏、血液和大脑。在早期发育过程中,jph1a、jph1b、jph2和jph3的mRNA表达模式类似,分别在原肠胚期、心跳期和25 dph(days post hatching)达到高峰。综上研究结果表明,鱼类jphs基因在心脏和肌肉等组织中发挥重要作用,并且其功能可能不同于哺乳动物。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李洁 王虹 周洋 马洁乐 刘小玲 林蠡
为了研究团头鲂(Megalobrama amblycephala)TLR2(ma TLR2)在抗嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染中的作用,本实验克隆了ma TLR2基因的c DNA全长。结果显示:ma TLR2基因c DNA的全长包括2923 bp,编码792个氨基酸。预测得到的ma TLR2的结构域包括一个信号肽、氨基端的亮氨酸重复基序(LRRs)、跨膜结构域(TM)和一个胞内的Toll/白介素(IL)-1受体区(TIR)。在嗜水气单胞菌感染后,团头鲂头肾中,TLR2的表达量
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吴文新 曹赞 王凡 徐佳 王卫民 赵玉华
为阐明团头鲂SREBP-1的功能,采用RT-PCR技术克隆获得SREBP-1基因的cDNA序列,利用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SREBP-1基因在不同发育时期及不同组织中的表达情况。生物信息学分析发现,SREBP-1基因cDNA的编码序列(coding sequence,CDS)为3 426bp(GenBank登录号:MH633449),开放阅读框(ORF)编码1 141个氨基酸,与大西洋鲑、斑马鱼、草鱼、鲤、金线鲃SREBP-1的氨基酸序列相似性较高(74%～99%)。保守结构域分析显示,团头鲂SREBP-1蛋白具有SREBPs家族典型的"碱性螺旋-环-螺旋-亮氨酸拉链"(bHLH-Zip)结构域。表达分析结果显示,SREBP-1基因在团头鲂胚胎发育过程中的表达呈现先下降后增高的趋势,在眼囊期最低,至出膜期达到最高。在团头鲂幼鱼中,SREBP-1在脑组织中的表达量最高,其次是眼、肝脏、心脏、肌肉、脂肪组织、肾脏,鳃中表达量最低。在成鱼中,SREBP-1在脑组织表达量最高,其次是性腺组织、肌肉、肝脏、眼,肾脏、脾脏和心脏中的表达量较低。以上结果表明,SREBP-1基因在团头鲂幼鱼和成鱼的不同组织中的表达模式存在差异。
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