- 年份
- 2024(4915)
- 2023(7191)
- 2022(6064)
- 2021(5519)
- 2020(4414)
- 2019(9954)
- 2018(9893)
- 2017(17811)
- 2016(10123)
- 2015(11476)
- 2014(11607)
- 2013(11275)
- 2012(11295)
- 2011(10443)
- 2010(10891)
- 2009(9975)
- 2008(10142)
- 2007(9446)
- 2006(8654)
- 2005(8176)
- 学科
- 济(45933)
- 经济(45883)
- 管理(24964)
- 业(23904)
- 企(17512)
- 企业(17512)
- 地方(17088)
- 中国(16663)
- 农(13855)
- 方法(11940)
- 学(11500)
- 业经(11498)
- 地方经济(9766)
- 农业(9567)
- 数学(9558)
- 发(9410)
- 数学方法(9295)
- 银(9257)
- 银行(9230)
- 行(9012)
- 融(9000)
- 金融(8999)
- 制(8837)
- 财(8003)
- 贸(7952)
- 贸易(7941)
- 易(7577)
- 环境(7381)
- 技术(7113)
- 理论(7084)
- 机构
- 学院(148604)
- 大学(145909)
- 研究(60249)
- 济(55151)
- 经济(53648)
- 管理(47968)
- 中国(46211)
- 科学(40465)
- 理学(39019)
- 理学院(38403)
- 管理学(37441)
- 管理学院(37171)
- 京(34312)
- 农(33577)
- 所(33543)
- 研究所(30225)
- 中心(27455)
- 农业(26574)
- 江(25742)
- 财(25727)
- 业大(24363)
- 范(22433)
- 北京(22380)
- 师范(22106)
- 省(21921)
- 院(21296)
- 州(21253)
- 技术(20227)
- 科学院(19493)
- 财经(18771)
- 基金
- 项目(90627)
- 科学(69068)
- 研究(64941)
- 基金(61362)
- 家(55112)
- 国家(54567)
- 科学基金(44596)
- 省(38338)
- 社会(37643)
- 社会科(35506)
- 社会科学(35498)
- 划(31968)
- 基金项目(31392)
- 教育(29209)
- 自然(28999)
- 自然科(28330)
- 自然科学(28322)
- 自然科学基金(27753)
- 编号(26917)
- 发(26058)
- 资助(25694)
- 成果(23418)
- 重点(21229)
- 课题(20591)
- 发展(20500)
- 展(20131)
- 创(18625)
- 计划(18164)
- 部(17997)
- 创新(17493)
共检索到253780条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
甄军波 迟吉娜 张建宏 杜海英 李伟明 刘琳琳 张香云
构建cDNA文库是发掘基因和研究基因功能的重要工具,也是基因组学研究的重要技术手段。棉花作为世界上重要的经济作物之一,研究人员已经构建了大量的棉花cDNA文库,为棉花基因发掘和功能研究积累了丰富的Expressed Sequence Tags(ESTs)资源。本文对近几年来cDNA文库在棉花基因发掘中的应用进行了总结。
关键词：
棉花 cDNA文库 基因发掘
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马建辉 刘记 范术丽 宋美珍 庞朝友 魏恒玲 喻树迅
【目的】深入了解棉花花药发育的分子机制,并为其不育机理的研究提供参考序列。【方法】构建棉花花药全生育期的均一化全长cDNA文库并测序获得9 896条高质量的EST,利用生物信息学和荧光定量相结合法对所得数据进行系统分析。【结果】该cDNA文库库容为1.2×107,插入片段分布在1—3 kb。将所测得的高质量EST进行拼接得到6 643条unigenes,平均长度为779 bp。经过序列比对注释和生物信息学分析,得到一系列在棉花花药发育过程中起重要作用的基因,并获得28条参与花粉壁合成的基因。荧光定量结果表明,这些基因均在花药发育前期优势表达,尤其是在四分体时期表达量最高。【结论】获得大量的棉花...
关键词：
陆地棉 cDNA文库 花药 花粉壁
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李斌 郑杰 孔祥军 李敏 廖小芳 周步进 李枝玲 周瑞阳
为发掘棉花细胞质雄性不育相关基因,采用RFLP分子标记、Northern blot、同源克隆及RT-qPCR的方法,对离核木棉细胞质雄性不育系‘07-113A’及其保持系‘07-113B’进行线粒体差异基因发掘和表达分析。结果表明:1)以12个线粒体基因为探针,结合EcoRⅠ和HindⅢ2种限制性内切酶对不育系和保持系进行RFLP分析,发现atpA/EcoRⅠ及ccmB/EcoRⅠ2个基因/酶组合存在RFLP多态性;2)以atpA和ccmB为探针,对‘07-113A’和‘07-113B’进行Northern blot分析,检测到atpA、ccmB在不育系和保持系中转录本大小均相同;3)获得atpA的CDS全长及其部分侧翼序列,比对结果表明,不育系和保持系的atpA编码序列相同;与保持系相比,不育系5′端侧翼序列有2个碱基的变异,3′端侧翼序列有4个碱基的变异;4)RT-qPCR分析发现,不育系中atpA在败育后的表达量是保持系的0.44倍,极显著低于保持系。推测‘07-113A’花粉败育可能与atpA的异常表达相关。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王文生 王省芬 马峙英 张桂寅
以黄萎病菌诱导下差异表达的棉花抗病相关基因片段PR8为探针,利用杂交方法,对优质、抗病海岛棉品种Pima90-53 BAC文库进行筛选。从30 336个BAC克隆中筛选到含有PR8基因片段的4个阳性克隆,分别为127K13,128D14,169J3和178C5。用Sau3AI对其中的169J3克隆进行酶切,回收2~4 kb的DNA片段并连接到载体pUC118BamHI-BAP上,构建了含有该基因片段的亚克隆文库,共含有4 224个克隆。经电泳检测,插入片段在1~3 kb,平均为2 kb。该亚克隆文库的构建为克隆PR8基因奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李俊兰 张寒霜 高鹏 王海波
以棉花无菌苗下胚轴为外植体 ,通过愈伤组织培养 ,使供试的 2 0个棉花新品种 (系 )中 19个培养出体细胞胚或再生植株。在此基础上 ,选用易获得再生植株的邯 93- 2、邯无 2 0 31、衡无89- 30、C2 0 1、C312 ,利用农杆菌介导转化Bt基因 ,抗卡那霉素愈伤组织诱导率约为 5 0 % ,其中约 4 0 %表现GUS阳性。从邯 93- 2GUS阳性愈伤中获得再生植株 ,其 5 0 %呈GUS阳性 ,且Bt基因的导入经Southern杂交验证。
关键词：
农杆菌介导 棉花 基因转化
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王志成 蒋建雄 钟军 易自力 刘清波
建立了一种利用PCR-96孔板法快速筛选棉纤维cDNA噬菌体文库,分离全长基因序列的技术体系.首先根据已知EST片段设计一至两对特异PCR引物,通过在96孔滴定板上逐级稀释cDNA文库,利用特异引物以及特异引物与通用引物组合逐级从cDNA文库中筛选目标克隆,最终可获得目标全长cDNA.
关键词：
聚合酶链式反应 cDNA文库 筛选
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张军科 杜敬 李爽 朱自果 王跃进
【目的】从环化的中国华东葡萄白河35-1经白粉菌接种诱导后的叶片所构建的cDNA文库中,筛选抗病相关基因序列。【方法】根据植物抗病基因在氨基酸水平上的保守结构域NBS的P-loop区和LRR设计特异引物,采用三维文库筛选法,对环化的葡萄白粉菌接种诱导后的叶片cDNA文库进行PCR筛选。【结果】共建组池24个,每个组池中含有单菌落768个,包含18432个克隆。从中筛选出具有抗病基因保守序列的阳性克隆585个,其中具有NBS保守序列引物筛选出330个,LRR保守序列引物筛选出255个。对获得的阳性克隆中的插入片段进行了测序,经生物信息学分析去除重复序列后,获得422条具有抗病基因保守结构域的基因...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张军科 王静 王跃进 张朝红 徐炎
【目的】从中国野生华东葡萄白河35-1经白粉菌接种诱导后叶片所构建的cDNA文库中,筛选抗病相关基因。【方法】根据植物抗病基因保守序列NBS位点设计特异引物,对葡萄白粉病接种诱导后的环化cDNA文库进行菌落PCR筛选,从随机挑选的大量菌落中筛选出82个PCR阳性菌落,提取阳性菌落的质粒进一步进行PCR检测确认,对确认的36个阳性质粒插入片段进行了测序。【结果】测序结果和序列生物信息学分析结果均表明,有3个基因序列与Genbank中的已知序列有较高的同源性,其中1个基因序列与葡萄抗白粉病基因(DT661587.1)序列同源性达99%,另外2个基因序列与水分胁迫下葡萄特异表达基因(DT031657...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陆许可 王德龙 阴祖军 王俊娟 樊伟丽 王帅 赵小洁 张天豹 叶武威
【目的】探究不同盐胁迫后的棉花基因组DNA甲基化变化情况,并比较分析叶片和根部DNA甲基化变化差异,进而探究DNA甲基化与棉花耐盐性之间的关系。【方法】以陆地棉耐盐品种中9806和盐敏感品种中S9612为试验材料,分别用NaCl和Na2CO3(浓度均为0.4%)处理。提取对照和处理材料的DNA,进行双酶切、连接、预扩增和选择性扩增,然后采用MSAP技术(甲基化敏感扩增多态性)分析棉花幼苗在盐胁迫前后的DNA甲基化情况。从聚丙烯酰胺凝胶中回收纯化多态性片段并进行测序,通过NCBI进行比对分析;设计引物,用实时荧光定量PCR对多态性片段在棉花幼苗中的表达量进行验证。【结果】盐胁迫分析表明不同类型盐...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
黄晋玲 胡建斌 张锐 郭三堆
【目的】构建棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系的线粒体BAC文库,为研究棉花线粒体基因组结构以及棉花细胞质雄性不育的形成机理提供基础。【方法】在借鉴其它作物的线粒体基因组BAC文库构建方法的基础上,对棉花线粒体DNA的提取及其BAC文库的构建进行探索和优化,构建了棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系的线粒体BAC文库,并采用同源克隆的方法克隆棉花线粒体的功能基因。【结果】构建的不育系和保持系的线粒体基因组文库分别包括2600个克隆,插入DNA片段大小在10.3kb和37.5kb之间,平均分别为22.29kb和21.36kb。重组子的覆盖率分别达到棉花线粒体基因组的79倍和76倍。获得了3个棉花线...
[期刊] 教育研究
[作者]
罗伯托·卡乃罗
联合国教科文组织在1996年出版了一本书,名为《学习:财富蕴藏其中》(Learning:The Treasure Within)。书中,有一段谈到宝藏,这个宝藏就是每个人的记忆力、推理能力、想象力、运动能力、美感、沟通能力和领导能力,等等,这些都是宝藏。现在我们面临一个挑战,就是探求这些宝藏。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李杰 张霞 郭巍 刘小民 李新娜 赵丹
昆虫围食膜是保护其中肠的一道物理屏障,破坏围食膜就可能使其中肠处于不正常的生理状态而最终导致死亡。本研究提取棉铃虫Helicoverpa armigera(Hbner)围食膜蛋白,成功制备棉铃虫围食膜蛋白多克隆抗体,并对棉铃虫中肠cDNA表达文库进行免疫筛选,共得到385个阳性克隆。对其中26个克隆进行鉴定并测序分析,结果表明19个克隆为肠粘蛋白。过碘酸-希夫试剂(PAS)显色法检测棉铃虫围食膜蛋白组成,发现围食膜蛋白大部分为糖蛋白。通过对棉铃虫中肠围食膜蛋白的分离鉴定,为进一步分析棉铃虫围食膜蛋白的生理功能,寻找生物防治新靶标,开发新型高效生物杀虫剂提供理论依据。
[期刊] 宏观经济管理
[作者]
方言
2009年,全球棉花减产,市场供给不足,国际市场棉花价格节节攀升。我国由于黄淮海地区棉花面积减少,加上2010年部分产区受灾,棉花产量减少了100多万吨,棉花价格上涨,引起各方高度关注。
[期刊] 华北农学报
[作者]
尹国 路正营 李世云 韩永亮 张朝军 李付广
为了进一步研究棉花体细胞胚胎发生的分子机制,采用RNAi技术,利用棉花生物学国家重点实验室在表达载体p BI121的基础上成功改造的双元表达载体pCRI1210,构建了针对棉花胚性愈伤组织抑制性消减文库中上调表达的4个ESTs干涉载体pCRI210-EST(EST-418、EST-447、EST-496和EST-653)。以从中棉所24中筛选出的体细胞胚胎分化率较高的株系W10的无菌苗下胚轴切段为受体,利用农杆菌介导法转化pCRI1210-EST干涉载体,浸染后的下胚轴切段在愈伤组织诱导培养基上进行分化。
关键词：
RNAi SSH EST 愈伤组织
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭三堆 王远 孙国清 金石桥 周焘 孟志刚 张锐
转基因技术是指利用重组DNA原理,将优良目的基因整合到靶标生物基因组中,并使靶标生物得以表达目的性状的技术。这一技术克服了生物有性杂交的限制,使物种间基因交流的范围无限扩大,既可以从原核生物到真核生物,也可以从单细胞生物到多细胞生物,还可以从低等生物到高等生物,反之亦然。因此,这项技术自发明以来,即广泛应用于农业、林业、医学等领域,为其研究开辟了一个全新的时代。转基因植物是以农杆菌等为媒介,将来源于动物、植物或微生物等其他生物甚至人工合成的外源基因转入基因组中,使之稳定遗传并赋予其靶标性状,如抗病、抗虫、抗逆、高产、优质等的植物。以1972年构建第一个重组DNA分子为契机,1983年首次获得转...
关键词：
抗虫棉 转基因 安全评价 品种 产业化
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
