Bcl-2家族蛋白是目前已知的细胞凋亡中最重要的调控因子,在细胞凋亡通路中起着重要的调节作用。本研究通过把外源bcl-2基因转入栗疫病菌中,采用RT-PCR的方法检测bcl-2基因在栗疫病菌株中的表达情况,对表达bcl-2基因的转化子及野生型的菌株进行病毒传递率和致病性测定。结果表明:表达bcl-2基因的转化子表现出病毒传递率提高、致病性增强等一系列特征。由此可知:bcl-2基因对栗疫病菌细胞凋亡起调节作用,并对病菌的生物学特征有一定影响。

用一步法从17 日龄来克亨SPF鸡胚和90 日龄成年鸡的法氏囊、脾脏和胸腺组织中提取总RNA(TRNA),用鸡B-细胞淋巴瘤/白血病-2基因 (bcl-2) cDNA探针进行Northern blot杂交。发现bcl-2 在成年和胚胎鸡的不同免疫器官中表达量不同, 成年鸡bcl-2 的表达量多少依次为胸腺、脾脏、法氏囊, 而胚胎鸡则是胸腺、法氏囊、脾脏。同时用流式细胞法测定这些器官的细胞凋亡情况, 胚胎鸡法氏囊、脾脏和胸腺的细胞凋亡率分别是0.40% , 0.68% 和0.38% ; 成年鸡则是6.98% , 1.17% 和0.61% 。结果表明, 鸡bcl-2 基因通过阻抑细胞凋亡直接调控正...

选用正在产蛋的罗曼鸡 ,取其排序第 3的卵泡分离颗粒层细胞 ,用含血清培养基培养 ,并用含脂质体每孔 0 0 ,0 6,1 2 ,2 4,4 8μL和 bcl 2基因重组质粒每孔 0 2 μg转染卵泡颗粒细胞。用流式细胞术等方法分析转基因后的原代细胞和传代细胞的生长与凋亡情况。结果发现 ,与未转染组相比 ,转染后的传代细胞分裂速度较快 (P

为了验证营养体不亲和性导致细胞凋亡的假说,对栗疫病菌融合细胞基因组DNA的降解物进行了琼脂糖凝胶电泳检测,观察了融合细胞的细胞核变化,测定了融合细胞的活性氧产生、脂肪粒积累以及进行了融合细胞死活鉴定。结果表明:不同亲和群菌株的孢子混合涂板,孵育后经历萌发、细胞融合,融合细胞基因组DNA经琼脂糖凝胶电泳可以检测到DNA梯状条带,这一特征为营养体不亲和性诱导的程序性细胞死亡提供了新的证据;细胞学上可观察到不亲和性菌株融合细胞细胞核降解、活性氧产生减少、脂肪粒积累增多及融合细胞死亡,这些特征与细胞凋亡的特征相似。

为了探讨仅含有BH3结构域的促凋亡蛋白BclGs的促凋亡机理,从人睾丸cDNA文库中克隆BclGs基因编码区,将其与pEGFP-C1载体连接,构建载体pEGFP-BclGs,转染COS7细胞和多种肿瘤细胞(如Hela、HepG2和MCF7等),研究BclGs对肿瘤细胞的促凋亡功能。结果表明,pEGFP-BclGs可以诱导不同的肿瘤细胞凋亡,但凋亡率存在差别;BclGs在不同细胞的线粒体中均呈点状分布。线粒体是诱导肿瘤细胞凋亡的有效细胞器,BclGs在线粒体中呈点状分布。

选用正在产蛋的罗曼鸡,取体积排序第一(F1)和第四(F4)的卵泡,分离颗粒细胞层细胞。采用脂质体介导方法将来源于F1和F4卵泡的颗粒细胞用PBS(对照)、空载体或Bcl2重组质粒处理,然后在不完全无血清培养基(不添加胰岛素)中培养48和96h,用流式细胞术检测Bcl2蛋白表达,用放射免疫测定技术检测IGF1的含量。结果发现,转染Bcl2重组质粒组的Bcl2蛋白表达量和IGF1分泌量均多于其他各组。分析来源于不同卵泡期卵泡颗粒细胞的分泌功能,发现随时间的增加F1细胞IGF1分泌量减少,而F4的IGF1分泌量基本不变。结果表明,在鸡卵泡颗粒细胞中转染的Bcl2基因具有表达功能,表达的蛋白具有调节鸡...

探讨低温胁迫下,干扰生长抑制特异性基因2(Gas2)对罗非鱼肾脏细胞系增殖和凋亡的影响。采用脂质体转染法介导Gas2短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)及阴性对照短发夹RNA处理罗非鱼肾脏细胞,24 h后,以5℃/d降温速率对转染后的罗非鱼肾脏细胞进行低温胁迫,分别在25、20、15、10℃进行细胞采集。随后,利用实时荧光定量PCR检测Gas2基因及P53基因mRNA表达变化,利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并开展WST-1细胞增殖实验检测细胞的增殖情况。结果表明,低温胁迫下,阴性对照组及Gas2干扰组中Gas2和P53基因mRNA的表达在15℃和10℃时均显著升高;Gas2干扰组中Gas2和P53基因mRNA的表达水平在所有温度下均显著低于阴性对照组;随着温度降低,阴性对照组及Gas2干扰组的细胞凋亡率均明显升高,但Gas2干扰组的细胞凋亡率明显低于阴性对照组;低温胁迫下,对照组及Gas2干扰组的细胞增殖率与25℃时相比均显著下降;当温度降至15℃时,Gas2干扰组的细胞增殖率显著高于对照组。罗非鱼肾脏细胞在受低温胁迫时,抑制Gas2基因能够降低P53基因mRNA的表达水平以及细胞的凋亡率,并增加细胞的增殖。

利用不同浓度(0,0.8,1.6,2.4μg/mL)的氯化镉(CdCl2)对处理牛卵母细胞前后对其成熟率、凋亡率、Ca2+分布、线粒体膜电位、Bcl-2与Bax的基因表达的影响,初步为重金属对雌性哺乳动物生殖细胞发育及细胞凋亡机制的进一步研究打下基础。利用0,0.8,1.6,2.4μg/mL的氯化镉(CdCl2)处理牛卵母细胞22 h,统计其凋亡率及死亡率;利用Annexin V-FITC检测牛卵母细胞的早期凋亡;分别用Fluo-3/AM和Rh123检测卵母细胞的Ca2+分布及其线粒体膜电位的变化;利用RT-PCR检测促凋亡基因Bcl-2和抑凋亡基因Bax的相对表达。经过上述处理后,0.8μg...

［目的］本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ，ｄｏｎ）诱导ＰＣ１２细胞凋亡及对相关基因ＢＣｌ－２、Ｂａｘ、Ｂｉｄ ｍＲｎａ和蛋白Ｃｌｅａｖｅｄ－ＣａｓＰａｓｅ ３、Ｃｌｅａｖｅｄ－ＣａｓＰａｓｅ ９表达水平的影响。［方法］用不同质量浓度的ｄｏｎ（０、１２５、２５０、５００、１ ０００和２ ０００ ｎｇ·ｍ ｌ～（－１））对ＰＣ１２细胞染毒２４ ｈ，采用透射电镜观察、流式细胞术、荧光定量ＰＣＲ、ＷｅｓｔｅＲｎ－Ｂｌｏｔ等方法，研究ｄｏｎ对ＰＣ１２细胞的超微结构、凋亡率、凋亡相关基因及蛋白表达的影响。［结果］不同浓度的ｄｏｎ均可诱导细胞凋亡，各试验组细胞凋亡率均极显著高于．．．

【目的】BCL2L11在哺乳动物中能够促进多种细胞凋亡，同时参与繁殖性状相关组织器官的发育及疾病治疗，文章利用分子生物学方法探究miR-221-3p靶向调控BCL2L11对小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡的影响，为进一步研究BCL2L11在卵泡颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁过程中的调控作用提供依据。【方法】在前期课题组卵巢组织全转录组测序分析的基础上，获得了候选基因BCL2L11及其调控元件miR-221-3p，利用半定量和组织荧光定量（RT-qPCR）分析BCL2L11在小尾寒羊不同组织中的表达情况；通过RT-qPCR定量试验在小尾寒羊卵泡期和黄体期卵巢组织中鉴定了BCL2L11及miRNA-221-3p的表达情况；构建BCL2L11 3’UTR野生型和突变型载体，在HEK293T细胞中共转染miR-221-3p mimic和BCL2L11野生型和突变型及阴性对照，采用双荧光素酶报告基因检测系统确定miR-221-3p与BCL2L11靶向性关系；在绵羊卵巢原代颗粒细胞中转染miR-221-3p mimic及阴性对照实现miR-221-3p过表达，使用RT-qPCR技术在mRNA水平上检测miR-221-3p对BCL2L11以及卵巢颗粒细胞凋亡标志基因XIAP和Fas表达水平的影响；同时利用EdU试验分析miR-221-3p过表达和阴性对照组中颗粒细胞的增殖变化。【结果】半定量和组织RT-qPCR分析均表明BCL2L11在卵巢组织中表达量高于其他组织；RT-qPCR定量结果显示miR-221-3p和BCL2L11在小尾寒羊卵泡期和黄体期卵巢组织中差异表达，miR-221-3p在卵泡期卵巢中的表达量高于黄体期，而BCL2L11在卵泡期卵巢中的表达量低于黄体期，表现出负调控的现象；双荧光素酶报告基因验证分析显示，过表达miR-221-3p mimic显著抑制了BCL2L11 3’UTR荧光素酶的活性（P<0.05）;EdU试验分析显示，过表达miR-221-3p的颗粒细胞增殖率为18.9%，极显著高于阴性对照组的10.43%(P<0.01)。【结论】BCL2L11和miR-221-3p是调控绵羊卵巢发育的重要基因及调控元件，BCL2L11是miR-221-3p的靶基因之一，miR-221-3p过表达可抑制颗粒细胞凋亡，该作用结果可能通过抑制靶基因BCL2L11的表达进而影响了绵羊卵巢颗粒细胞的凋亡。

【目的】探讨固始鸡免疫器官内细胞凋亡基因Fas和FasL的动态表达。【方法】应用免疫组织化学技术和Leica显微图像处理系统,对细胞凋亡基因Fas和FasL在固始鸡免疫器官内的动态表达进行研究。【结果】Fas在不同发育阶段固始鸡免疫器官内均有表达,但表达量均不相同,呈波浪样动态变化;Fas表达于固始鸡免疫器官内淋巴细胞细胞膜和细胞质,不表达于细胞核;Fas表达阳性细胞在固始鸡不同免疫器官内分布位置不同,呈散在或簇团状分布:法氏囊内阳性细胞主要分布于黏膜靠近上皮细胞的固有膜层内、淋巴小结与淋巴小结之间区域、淋巴小结边缘,淋巴小结内少量淋巴细胞也有Fas表达;胸腺内主要分布于胸腺小叶髓质,极少出现...

研究类猪圆环病毒2型因子P1体内诱导的细胞凋亡作用。将P1分子克隆接种普通仔猪,用原位末端标记技术(TUNEL)检测猪的扁桃体、脾脏、腹股沟淋巴结等免疫器官细胞的凋亡情况。猪感染P1后21和35 d的扁桃体、脾脏和腹股沟淋巴结等免疫器官细胞出现了凋亡。P1可能引起猪的免疫抑制。

为研究黄芪多糖(APS)和当归多糖(ASP)对维氏气单胞菌诱导鲫细胞凋亡的影响,实验设阴性对照组、阳性对照组,黄芪多糖组和当归多糖组,通过对鲫用维氏气单胞菌攻毒处理,用流式细胞仪测定血细胞的凋亡比例和细胞周期变化,并用荧光显微镜和透射电镜观察凋亡细胞的形态。结果显示,维氏气单胞菌攻毒后阳性对照组鲫血细胞的细胞凋亡率均极显著高于多糖组和阴性对照组;多糖组能显著降低鲫的细胞凋亡率且黄芪多糖组效果更显著;攻毒后鲫肝细胞和肾脏淋巴细胞出现染色质凝集、细胞核固缩边集和细胞空泡化及凋亡小体;同阴性对照组相比;维氏气单

为研究黄芪多糖(astragalus polysacharin,APS)和当归多糖(angelica sinensis polysaccharide,ASP)对维氏气单胞菌诱导的鲫细胞凋亡的影响,实验设阴性对照组、阳性对照组,黄芪多糖组和当归多糖组四个处理组,通过对鲫用维氏气单胞菌攻毒处理,用流式细胞仪测定血细胞的凋亡比例和细胞周期变化,并用荧光显微镜和透射电镜观察凋亡细胞的形态。结果显示,维氏气单胞菌攻毒后阳性对照组鲫血细胞的细胞凋亡率均极显著高于多糖组和阴性对照组(P

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对体外培养的仔猪空肠上皮(IPEC-J2)细胞增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及其相关机制。[方法]以不同浓度的DON(0、0.5、1、2、4、8、和16 μmol/L)处理IPEC-J2细胞24 h后,采用MTT法、Hoechst 33258、western blot、Millipore-ERS和IFA检测DON对IPEC-J2细胞增殖、对细胞凋亡、屏障功能和自噬的影响;通过添加自噬激活剂雷帕霉素(RAPA)来升高细胞的自噬水平,用上述方法检测RAPA对DON引起的IPEC-J2细胞增殖毒性、凋亡和屏障功能的影响。[结果]与对照组相比,当DON浓度达到4、8和16 μmol/L时:1)细胞增殖显著下降(P<0.05);2)凋亡细胞数量和凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3表达显著增加(P<0.05);3)细胞跨膜电阻和紧密连接蛋白occludin表达显著下降(P<0.05);4)自噬相关蛋白LC3-II和Atg5表达显著下降(P<0.05);5)当添加自噬激活剂雷帕霉素(Rapa)时,可以显著缓解DON引起的细胞增殖毒性、凋亡和屏障障碍。[结论]DON暴露通过抑制自噬引起IPEC-J2细胞增殖下降、凋亡增加和屏障功能障碍。