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[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘庆慧 黄倢 宋晓玲 刘莉
从感染白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus,WSSV)的对虾中提取和纯化WSSV,对其蛋白酶活力进行分析。结果表明,WSSV蛋白酶具广泛的pH稳定性,当pH达7.5时,蛋白酶活性最大;pH高于10 0时,酶活力很低,其蛋白酶偏碱性。丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)对酶活性有抑制作用。Ca2+、Mn2+、Fe2+和Cu2+可降低WSSV蛋白酶活性,但Mg2+有轻微的激活作用。胰蛋白酶抑制剂在浓度为12.5～25.0mg/L时,对WSSV蛋白酶活性无影响。Leupeptin使蛋白酶活性降低12.29%。Chymostatin在质量浓度为12.5～25.0mg/L时...
关键词：
WSSV 蛋白酶 特性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘庆慧 黄倢 贾佩峤 王清印
在已有对虾白斑综合症病毒(WSSV)蛋白酶活性研究的基础上,从分子水平上确定WSSV呈蛋白酶活性的肽段。采用凝胶电泳技术的蛋白酶酶谱分析法确定WSSV蛋白酶活性,研究非变性条件下WSSV多肽裂解的条件,确定低温(20℃)裂解WSSV多肽可满足实验的要求。同时使用SDS-PAGE分离胶切割法结合蛋白洗脱分离出Vp19、Vp22、Vp24、Vp26和Vp28共计5个肽段,并对分离的5个组分进行蛋白酶活性的检测,初步结果表明,Vp19具有蛋白酶催化活性。
关键词：
WSSV 蛋白酶 活性肽检测
[期刊] 水产学报
[作者]
王海英 薛长湖 孙谧 王跃军 王清印
以大菱鲆肠道为材料,对大菱鲆消化生理中起重要作用的肠蛋白酶的分离纯化条件和理化性质进行了研究。经Tris-HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级分离,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析分离纯化,获得大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的电泳纯制品,并对该酶的性质进行了研究。结果显示:纯酶的分子量约为58kD。纯酶最适反应pH为9.0,最适反应温度50℃;pH稳定范围6.0~11.0,30℃以下酶活性稳定;Mn2+可激活大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ,Cu2+、Zn2+、Ag+、Fe3+则对酶活性有抑制作用;巯基蛋白酶抑制剂显著抑制大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的活性,金属蛋白酶抑制剂...
关键词：
大菱鲆 肠蛋白酶 纯化 性质
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘庆慧 黄倢 宋晓玲 刘莉
以酪蛋白为底物 ,对常规蛋白酶检测方法进行改进并与偶氮酪蛋白法进行比较 ,建立适应病毒微量蛋白酶的快速检测方法。结果表明 ,改进的微量蛋白酶检测方法具有微量、快速、灵敏度高的特点 ,适于病毒微量蛋白酶的检测。蛋白酶的最低检出量可达ng级。
关键词：
WSSV 微量测定 蛋白酶
[期刊] 水产学报
[作者]
黄峰 严安生 汪小东
鲢、鳙胰蛋白酶的研究黄峰，严安生，汪小东（华中农业大学，武汉４３００７０）关键词鲢，鳙，胰蛋白酶ＳＴＵＤＩＥＳＩＮＴＲＹＰＳＩＮＩＮＳＩＬＶＥＲＣＡＲＰＡＮＤＢＩＧＨＥＡＤＣＡＲＰ￥ＨｕａｎｇＦｅｎｇ；ＹａｎＡｎｓｈｅｎｇａｎｄＷａｎｇＸｉａｏｄｏｎ...
关键词：
鲢,鳙,胰蛋白酶
[期刊] 中国水产科学
[作者]
林仕梅 王友慧 罗莉 叶元土 李涛
以嘉陵江野生大鳍(Mystusmacropterus)为材料,对其蛋白酶的酶活力影响因素、酶解动力学、体外消化率进行综合研究。结果表明,(1)大鳍胃、肠、肝胰脏的蛋白酶最适温度分别为36、40、40℃,最适pH分别为2 2、7 0、7 0,温度对胃、肠蛋白酶的影响大于肝胰脏,pH对胃蛋白酶的影响大于肠和肝胰脏;(2)肠蛋白酶的酶解能力最强,对鱼粉和豆粕酶解产生氨基酸,速度分别为52 288mg/h和33 352mg/h,胃、肝胰脏蛋白酶的酶解能力差异不显著,对鱼粉和豆粕酶解产生氨基酸,速度分别为24 328mg/h、25 275mg/h和19 843mg/h、17 535mg/h;(3)大...
关键词：
大鳍 消化道 蛋白酶 酶活性
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
马宏宇 李菁菁 祁高富 喻子牛 赵秀云
对1株产蛋白酶的枯草芽胞杆菌(Z5)进行化学诱变,筛选得到1株产较高酶活性、大分子质量蛋白酶的菌株。检测该蛋白酶对底物明胶的分解能力,发现该蛋白酶的分子质量约为100 ku,还原剂巯基乙醇对其活性的影响较大。在不同温度、不同pH值处理该蛋白酶后,用茚三酮法测定酶活性,发现该蛋白酶催化反应的最适pH为6,最适温度为50℃,并且该蛋白酶有较好的热稳定性,70℃处理10 min仍能保留50%左右的酶活性。由于此蛋白酶在分子质量及最适pH方面均不同于已报道过的枯草芽胞杆菌蛋白酶,推测其为一种新型的蛋白酶。
关键词：
枯草芽胞杆菌 蛋白酶 化学诱变 酶学性质
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张继平 郭照良 唐冬生 陈建酬 贺顺莲
为了探明 pH 值、温度及矿物质离子对暗纹东方鲀胃蛋白酶活性的影响效果,用暗纹东方鲀的胃为材料,经柠檬酸缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,CM-纤维素离子交换柱、Sephedex G75 层析柱纯化,获得比活为 7.13μmol/(min·mg)的胃蛋白酶.酶经聚丙烯酰胺电泳,表现为单一蛋白带,经 SDS-PAGE 测得酶的亚基相对分子质量为18 600.酶水解酪蛋白的最适温度为50 ℃,在pH2.5, ℃下酶催化酪蛋白水解的Km值为0.715 mmol/L;pH5.0, 3737 ℃下酶...
关键词：
暗纹东方鲀 胃蛋白酶 纯化 性质
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
田鑫 汪之和 施文正 李燕
以南极磷虾(Euphausia superb)为研究对象,通过硫酸铵分级沉淀、Phenyl-Sepharose疏水层析、DEAE-Sepharose FF离子交换层析等方法,从南极磷虾体内分离纯化出胰蛋白酶。其纯化倍数为5.44倍,比活力为38.3 U/mg,得率为26%。SDS-PAGE电泳结果显示,该酶的分子质量为28 ku。蛋白酶最适温度为37℃、最适pH为7.5,Mg2+、Ca2+、Mn2+对南极磷虾蛋白酶具有激活性,Zn2+、Cu2+、Fe3+具有酶活抑制性,其中Cu2+的抑制性最强。酶的动力学实验结果表明,以BApNA为底物测得Km为0.073 mmol/L,Vmax为1.44×1...
关键词：
南极磷虾 蛋白酶 纯化 酶学性质
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘睿 李才国 刘鼎一 潘思轶
以大豆分离蛋白为原料提取7S球蛋白,研究了风味复合蛋白酶对大豆7S球蛋白的改性作用,并且评价了7S球蛋白改性前后的功能性质。结果表明,试验得到的7S球蛋白的持水性、乳化能力和吸油性优于大豆分离蛋白。风味复合蛋白酶酶解最佳的条件为pH值8.5,温度55℃。7S球蛋白改性后功能性质优于改性前。改性后7S球蛋白持水性有明显改善,在水解度为18.43%效果最好。吸油性、乳化性及乳化稳定性也有明显改善,在16.07%的水解度时效果最好。
关键词：
7S球蛋白 功能性质 改性 风味蛋白酶
[期刊] 中国水产科学
[作者]
江信红 唐云明
黄鳝(MonopterusalbusZuiew)肠道经组织捣碎,正丁醇脱脂,硫酸铵分级沉淀,DEAE Sepharose离子交换层析和SephacrylS 200凝胶过滤,得到蛋白酶纯品。经等电聚焦电泳和SDS PAGE均显示为单一条带。酶的等电点为6 2,最适温度为55℃,最适pH值为10 5,Km(酪蛋白)值为5 5×103mg/L。用SDS PAGE和SephacrylS 200测得其分子量分别为26kD和25 5kD。酶的pH稳定性较好,在pH12时室温保持5h,活力还剩55%。NBS、BrAc、TNBS、PMSF对酶有很强的抑制作用,而PCMB、ME对酶活性影响不大。Ca2+对酶活性...
关键词：
黄鳝 蛋白酶 分离纯化
[期刊] 水产学报
[作者]
吴燕燕 李来好 郝志明 杨贤庆
以罗非鱼肠为原料,采用超声波辅助提取技术、电泳技术和层析技术等对罗非鱼肠道蛋白酶进行研究,结果表明:将鱼肠匀浆经超声波提取的粗酶液,用30%～70%的硫酸铵盐进行盐析、HitrapTM Q FF阴离子交换柱纯化及Sephadex G-100凝胶柱分离纯化,得到罗非鱼肠蛋白酶纯品,其比活为335U/mg,得率为32.8%;SDS-PAGE电泳为单一蛋白酶带,分子量为28ku。该酶最适pH为8.0～8.5,在pH7.0～9.0的条件下稳定;最适温度为37～42℃,热稳定性好;该酶的Km值和Vmax值分别为0.605g/L和9.407μg/min。金属离子Ag+、Pb2+对蛋白酶有完全抑制作用,Na...
关键词：
罗非鱼肠 蛋白酶 纯化 性质
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
姜莉 陈金海 徐怀德 刘邻渭 李学俊
【目的】确定蛋白酶水解核桃蛋白的最佳工艺条件。【方法】在单因素分析的基础上,采用响应面分析方法对核桃蛋白的水解条件进行了优化。【结果】胰蛋白酶水解核桃蛋白的最佳反应条件为:反应时间4.0 h,底物质量浓度27 g/L,温度53.4℃,pH8.0,加酶量(E/S)8.3 g/kg,各因素对核桃蛋白水解的影响顺序为温度>加酶量>底物质量浓度。【结论】实际验证表明,利用优化的水解条件可取得较好的水解效果,水解度可达14.497%。
关键词：
核桃蛋白 胰蛋白酶 水解条件 工艺优化
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
陈怡炫 陈昕 王芳 惠彦行 盛军 徐海波 徐甲坤
本研究探讨了反应温度、pH、金属离子(Zn~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)、Al~(3+)和Ca~(2+))对南极磷虾粗酶液中蛋白酶活性的影响,研究了苯甲基磺酰氟(PMSF)、EDTA·2Na、碘乙酰胺(IAM)和甲苯磺酰–苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK)对蛋白酶活性的抑制效果。结果显示,南极磷虾粗酶液中蛋白酶的最适反应温度为40℃;最适反应pH值为8.0;当金属离子浓度为0.5 mmol/L时,Zn~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)和Al~(3+)金属离子对蛋白酶酶活的抑制率分别为55.02%、55.02%、35.39%、20.67%和41.12%,而Ca~(2+)离子对蛋白酶活有明显的促进作用;PMSF和EDTA·2Na对蛋白酶酶活具有较为显著的抑制作用,PMSF的浓度为8.0 mmol/L时,抑制率为60%;EDTA·2Na浓度为0.6 mmol/L时,抑制率为86.67%;IAM在低浓度时有一定的抑制作用;TPCK低浓度时抑制效果不明显,浓度升高时有一定的抑制作用。在5~30℃的温度范围内,随着温度升高,EDTA·2Na对蛋白酶酶活的抑制效果逐渐增加。本研究阐明了影响南极磷虾粗酶液蛋白酶酶活的因素,开发了针对南极磷虾粗酶液中蛋白酶活性的抑制剂,为南极磷虾在食品领域的开发利用提供了基础理论数据。
关键词：
南极磷虾 粗酶液 基础酶学性质 抑制剂
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
林建城 王国玲 闵志勇
【目的】从日本鳗鲡(Anguilla japonica)肠道中分离纯化蛋白酶并分析其酶学性质,为日本鳗鲡饲料的科学研制提供理论依据。【方法】通过硫酸铵沉淀分级分离及Sephadex G-100和Sephadex G-75两级凝胶柱层析纯化日本鳗鲡肠道蛋白酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-PAGE鉴定蛋白酶纯度和亚基分子质量,利用凝胶层析法测定酶的分子质量,用等电聚焦电泳法测定酶的等电点,并研究以酪蛋白为底物时蛋白酶催化反应的动力学参数及pH、温度、金属离子和修饰剂对蛋白酶活力的影响。【结果】日本鳗鲡肠道蛋白酶亚基分子质量为65.3ku,酶分子质量为260.3ku,等电点为8.23;...
关键词：
日本鳗鲡 蛋白酶 分离纯化 酶学性质
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