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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李双洁 卢宇 张金秋 苗晋锋 侯继波
［目的］鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）感染会引起鸡的免疫抑制，给养禽业带来巨大危害。本文旨在探讨鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）蛋白ＶＰ４和ＶＰ５在病毒感染引起的免疫抑制中的作用。［方法］构建ＶＰ４和ＶＰ５蛋白的真核表达质粒并转染Ｖｅｒｏ细胞，再用ＩＢＤＶ ＣＶ０３病毒株感染转染后的细胞，Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ方法检测细胞中模式识别受体及下游转录因子的表达；ｒｔ－ｑ ＰＣｒ检测细胞因子及抗病毒基因的表达。［结果］ＩＢＤＶ ＣＶ０３病毒感染Ｖｅｒｏ细胞后，ＶＰ４蛋白在一定程度上能够提高ｔｌｒ３、ｒＩＧ－Ⅰ蛋白含量，但差异不显著；ＶＰ５对ｔｌｒ３、ｒＩＧ－Ⅰ等介导的天然免疫通路有一定的抑制作用；过．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
肖治军 张改平 杨汉春 杨艳艳 赵东 李学伍 邓瑞广 柴书军 邢广旭 杨继飞
为检测Ⅰ型IBDVVP2蛋白线性B细胞抗原表位肽PJ14和PJ5的免疫原性,将人工合成并纯化的PJ14和PJ5分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联;将与BSA偶联的PJ14和PJ5分别免疫BALB/c小鼠,然后以与OVA偶联的PJ14和PJ5作为间接酶联免疫吸附试验抗原,分别测定免疫鼠血清中抗相应多肽的抗体。结果显示,免疫小鼠产生了抗PJ14和PJ5的抗体,抗体持续期达21周。表明PJ14和PJ5具有免疫原性。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈明勇 陈德威 高齐瑜 张冰
研究了传染性法氏囊病病毒 (IBDV)变异 E株人工感染体外培养法氏囊细胞的凋亡。电镜观察和DNA电泳分析表明 ,IBDV感染后 4～ 2 4 h,法氏囊培养细胞呈现典型细胞凋亡的形态学特征和生化特征。经流式细胞计检测、荧光染色观察和统计学分析表明 ,IBDV感染后 4～ 2 4 h,法氏囊培养细胞凋亡数量显著增加 (P
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈明勇 高齐瑜 郭建华 王彩虹
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张春杰 程相朝 李银聚 吴庭才 王淑芳
应用RT-PCR法,对分离于当地典型发病乌鸡群的IBDV(WJ株)进行了VP2基因的克隆与序列分析,并和相关毒株进行了比较。结果表明,WJ株与标准血清 型STC株的核苷酸和氨基酸的同源性只有91.39%和92.74%,而与超强毒株UK661和从当地鸡群中分离的超强毒株HN01株的核苷酸和氨基酸的同源性则较高,其中,与其核苷酸同源性分别为95.43%和95.87%,与其氨基酸同源性均为96.77%。且该毒株的VP2基因序列完全具备超强毒株的主要特征。由此说明,分离于当地发病乌鸡群的IBDV为超强毒株,并和当地流行的鸡IBD超强毒株有较高的同源性,但也有明显的差异。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王俊全 王韦华 刘桂梅
【目的】克隆鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJ-10株VP2基因,构建其原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行高效表达。【方法】根据IBDVVP2基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV BJ-10株VP2基因;将目的基因插入pMD18-T连接载体,筛选出阳性重组质粒;将该质粒克隆至原核表达载体pET-32α中,转化入JM109,经IPTG诱导表达,对产物进行SDS-PAGE电泳分析,确定IPTG的最佳诱导表达时间和浓度。【结果】克隆到了全长1 356bp的IBDV BJ-10株VP2基因;PCR、酶切鉴定分析表明,成功构建了重组质粒pET-32α-VP2;SDS-PAGE电...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吴志明 张春杰 李银聚 王臣 高争艳
应用RT-PCR法对分离于不同禽类的IBDV HN 01株(鸡源)、W J株(乌鸡源)和YL 997株(鸭源)的VP2基因分别进行了克隆,对其与核苷酸序列及其编码的VP2蛋白氨基酸序列进行了分析,并对此3株IBDV与标准血清Ⅰ型STC株的VP2基因和VP2蛋白进行了同源性分析。结果表明,W J株、LY 997株、HN 01株与标准血清Ⅰ型STC株的核苷酸同源性分别为91.30%,92.50%和93.47%,氨基酸同源性分别为92.74%,91.90%和95.10%;HN 01株与W J株的核苷核和氨基酸的同源性分别为97.9%和98.4%,HN 01株与LY 997株的核苷酸和氨基酸的同源性分...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙建和 陆苹 赵渝 李晖
用传染性法氏囊病病毒 (IBDV)攻击 4周龄的非免疫鸡 ,以超速离心法从感染鸡法氏囊组织中分离、纯化IBDV ,应用蛋白酶K消化和Trizol(异硫氰酸胍 -酚 -氯仿法 )处理 2种方法从纯化的IBDV中抽提dsRNA。通过低熔点琼脂糖割胶 -酚 -氯仿抽提可获得纯化的dsRNA ,研究发现应用蛋白酶K消化获得的纯化RNA产量高 ,用其作模板进行RT -PCR可扩增IBDV基因组全长cDNAA片段和B片段、VP2基因和VP2 - 4 - 3基因。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈明勇 佘瑞萍 高齐瑜 贾君镇
利用透射电镜连续观察了传染性法氏囊病病毒变异 E株人工感染雏鸡后不同时期法氏囊淋巴细胞的超微结构变化 ,并对法氏囊内 SIg M,SIg G,SIg A3种抗体生成阳性细胞数量和血液中 Ig M,Ig A,Ig G抗体水平进行检测。观察结果表明 ,IBDV感染后法氏囊淋巴细胞出现了严重变性、坏死 ,表现为核染色质浓缩、碎裂、溶解 ,线粒体溶解呈空泡样结构 ,其他细胞器破坏溶解 ,在法氏囊淋巴细胞、巨噬细胞、网状上皮细胞等细胞的胞浆中可见不同类型和排列方式的病毒粒子。IBDV感染后法氏囊内抗体阳性细胞数量和血清中抗体水平均呈现不同程度的下降 ,揭示雏鸡机体体液免疫功能严重抑制
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姜平 陈溥言 蔡宝祥 黄兵
用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡，免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价，并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示：（１）ＶＰ２基因重组质粒ＤＮＡ除可诱导产生较高的ＥＬＩＳＡ抗体外，还可明显降低仔鸡ＩＢＤＶ攻击所引起的急性发病率和死亡率；（２）ＶＰ３－ＧＳＴ融合蛋白表达产物全菌裂解液可较早地诱导产生ＥＬＩＳＡ抗体，但对ＩＢＤＶ野毒株攻击只提供部分保护；（３）ＶＰ２和ＶＰ３表达产物无明显协同作用。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
蒋静 孙建和 陆苹
应用Long and Accurate—PCR(LA-PCR)技术,扩增克隆了鸡传染性法氏囊病病毒上海超强毒(wIB-DV)的VP2—4—3基因。应用粘性末端连接策略,将VP2-4-3基因克隆人真核表达载体pALTER-MAX。经酶切鉴定,表明VP2-4-3基因为正向插入,位于CMV启动子下游。该真核表达质粒在脂质体的介导下转染Vero细胞,经特异性抗IBDV抗体的免疫荧光检测,发现在细胞内有特异蛋白表达。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
郭露玲 刘海滨 石剑 李谷 肖庚富
通过RT-PCR获得了传染性造血组织坏死症病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)囊膜糖蛋白(G蛋白)基因,并将其克隆入新型MBP(麦芽糖结合蛋白)融合表达质粒pMAL-c2X,构建重组质粒pMAL-c2X/IHNV-G并转入大肠杆菌Rossetta-gami2(DE3)splyS。经IPTG诱导后,表达出包含全长G蛋白在内、预期分子质量为99 ku的融合蛋白。基于anti-MBP抗体的Western blot鉴定证实表达蛋白存在。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
祁小乐 高宏雷 高玉龙 邓小芸 步志高 王晓燕 王笑梅
【目的】建立高效鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)拯救平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】在IBDVGt株全基因组中引入分子标签(A节段:EcoR V酶切位点;B节段:PstI酶切位点)。在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游,构建IBDV感染性克隆pCAGGmGtAHRT和pCAGGmGtBHRT,LipofectamineTM2000介导共转染DFI细胞,进行病毒拯救研究。【结果】构建的IBDV感染性克隆可在DFI、Vero/E6、Vero/P1...
[期刊] 华北农学报
[作者]
王文科 陈冠春 王笑梅
从暴发鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）死亡率６３．５１％的病死鸡中，分离出一株ＩＢＤ病毒（ＩＢＤＶ）９０１株。经检测，９０１株是一株ＩＢＤＶ超强毒株，可使３１日龄健康雏鸡７１．４％死亡，１０日龄ＳＰＦ鸡胚和３０日龄ＳＰＦ雏鸡１００％死亡。死亡鸡再现了自然暴发ＩＢＤ的典型病变。
关键词：
鸡传染性法氏囊病,超强毒,感染
[期刊] 中国农业科学
[作者]
葛金英 温志远 高宏雷 王永 胡森 鲍恩东 王笑梅 步志高
【目的】重组新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒(very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV)及新城疫重组二联活病毒载体疫苗的可行性。【方法】采用单股负链RNA病毒反向遗传操作技术,救获野生型NDV LaSota疫苗株rLaSota及表达vvIBDV Gx株VP2基因的重组疫苗株rLaSota-VP2,分别经滴鼻点眼途径免疫SPF雏鸡,免疫后21d分别以vvIBDVGx超强毒和新城疫强毒进行攻击。【结...
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