【背景】在当前饲料禁抗的背景下，利用低残留、无毒副作用的中草药制剂进行奶牛围产期保健已备受广大养殖企业的青睐。前期研究发现，归芪益母口服液能够减轻产后奶牛炎性反应、增强免疫力和缓解能量负平衡，但其详细的作用机制尚不清楚。【目的】通过超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）代谢组学技术评价归芪益母口服液对产后奶牛瘤胃代谢的调节作用，以期从新的视角揭示该配方的作用机制。【方法】试验选择18头体况相近、2—3胎次健康待产荷斯坦奶牛，随机分为对照组和试验组，每组各9头。试验组和对照组分别在产后0 d灌服归芪益母口服液和饮用水，连续灌服6 d。产后0 d未灌服前和产后7 d晨饲前采集瘤胃液，预处理后采用UPLC-MS/MS技术对瘤胃代谢物进行定性和定量分析。两组瘤胃液代谢物数据导入MetaboAnanlyst 5.0软件进行主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA），考察两组奶牛瘤胃液代谢轮廓的变化，筛选差异代谢物进行聚类分析和通路富集分析。【结果】产后7 d，试验组瘤胃代谢轮廓较对照组发生明显改变，43种瘤胃代谢物含量发生了显著变化（VIP>1,P<0.05），其中8种代谢物含量显著上调（P<0.05），分别是9-氧代-10E,12Z-十八碳二烯酸、石榴酸、6-二甲基氨基嘌呤、L-脯氨酸、马来酸、N-乙酰基5-羟色胺、泛酰醇、刺芒柄花素，35种代谢物含量显著下调（P<0.05），包括有机酸及其衍生物、核苷酸及其代谢物、碳水化合物及其代谢物等；聚类分析结果显示差异代谢物能明显区分对照组与试验组奶牛瘤胃液；代谢通路富集分析显示归芪益母口服液明显改变了奶牛瘤胃内组氨酸代谢、戊糖和葡萄糖醛酸相互转化、精氨酸和脯氨酸代谢、色氨酸代谢、嘧啶代谢和嘌呤代谢通路。【结论】归芪益母口服液能促进产后奶牛瘤胃菌群代谢机能，是其缓解产后奶牛能量负平衡、增强免疫、抗炎和维持肠道稳态的机制之一。

【目的】运用代谢组学中气相色谱/质谱联用技术(GC/MS)筛选卵巢静止奶牛和正常发情奶牛的血浆差异代谢物,探究奶牛发生卵巢静止时其体内代谢的变化。【方法】在黑龙江省某集约化牛场选取产后60—90 d,年龄、胎次、体况相近的经产高产奶牛为实验动物。根据奶牛的发情表现、直肠检查、B超检查及激素检测的结果,将奶牛分为发情组(A)22头和卵巢静止组(B)20头。应用GC/MS对两组奶牛的血浆样品进行检测得到其代谢组图谱,利用Chroma TOF软件对得到的峰图进行分析,得到原始数据。将标准化的GC/MS数据矩阵导

从 6头装有瘤胃瘘管的公水牛收集瘤胃液和唾液 ,加干草粉作底物 ,进行体外厌氧培养。每隔 2h采样测pH、挥发性脂肪酸 (VFA)、氨氮 (NH3 N)、微生物粗蛋白 (MCP) ,并在培养结束后测干物质 (DM)和酸性洗涤纤维 (ADF)消失率。结果显示 ,与人工唾液相比 ,唾液使草粉DM和ADF消失率分别提高 17 95 % (P 0 0 5 ) ,12 2 4% (P >0 0 5 )和10 5 4% (P

利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物PCR扩增并测序,揭示奶牛瘤胃尿素分解菌的多样性。提取本研究室前期鉴定的16个脲酶克隆的质粒,利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到pMD19-T载体,转化E.coliJM109,挑取阳性克隆测序。利用Blast程序将序列与GenBank和RDP数据库进行比对,并使用Mega 4.0软件构建系统发育树。4个脲酶克隆含有脲酶保守序列ureC,系统发育树分析表明,U1、U5、U13和U15分别属于Firmicutes、ε-Proteobacteria、β-Proteobacteria和A...

【目的】研究体外培养条件下日粮与缓冲液pH对奶牛瘤胃液共轭亚油酸(CLA)含量的影响,筛选能提高奶牛瘤胃CLA含量的最佳条件。【方法】选择日粮中粗料比例、精料中植物油种类及比例、棉粕质量分数与豆粕质量分数比值(以下简称棉粕与豆粕比例)、缓冲液pH值、硫酸铜作为影响因素,采用五因素二次正交旋转组合设计,对泌乳荷斯坦奶牛瘤胃液进行体外培养,测定奶牛瘤胃中CLA含量。【结果】各因素对CLA含量的影响作用从大到小依次为:pH值平方项>粗料比例>植物油种类及其比例平方项(达1%显著水平)>粗料比例与pH值交互项(达2.5%显著水平)>棉粕与豆粕比例平方项>pH值(达5%显著水平)。在其他条件一定时,日粮...

[目的]本试验旨在研究壳寡糖/ZnO/凹凸棒石复合剂对湖羊瘤胃微生物菌群组成和代谢产物的影响。[方法]选取48只60～70日龄的健康湖羊[(15±5)kg],随机分为2组,每组24只,6重复,每重复4只羊。其中对照组饲喂全混合配方颗粒料,试验组于对照日粮中添加壳寡糖/ZnO/凹凸棒石复合剂(500 mg·kg~(-1)),预饲期7 d,正式试验80 d后进行屠宰,采集试验个体瘤胃液进行微生物和代谢组学相关数据分析。[结果]日粮中添加复合剂能够显著提高湖羊瘤胃微生物菌群的Chao1、Ace和Shannon指数,改变瘤胃菌群结构(P<0.05)。在门水平上,与对照组相比,复合剂显著提高瘤胃厚壁菌门(Firmicutes)和纤维杆菌门(Fibrobacteres)的相对丰度(P<0.05)。瘤胃内容物代谢组学结果表明,与对照组湖羊相比,复合剂组湖羊瘤胃中丙酸、磷酸葡萄糖酸、白藜芦醇和丁香酸等含量显著升高,而与脂质代谢有关的亚油酸、花生四烯酸、胆固醇、胆汁酸、棕榈酸、2-单硬脂酸酯、1-单十七烷基甘油酯等含量显著降低[错误发现率(FDR)

为阐明日粮中添加过瘤胃胆碱对围产期奶牛生产性能和能量代谢的影响,选取年龄、胎次和泌乳量相近的健康荷斯坦奶牛40头,随机分为4组,每组10头。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组每天分别在基础日粮中添加5、10和20g过瘤胃胆碱,Ⅳ组饲喂基础日粮。试验期内(产前14d～产后42d)分别调查和检测奶牛的生产性能(泌乳量和干物质摄入量)、血液生化指标(葡萄糖、β-羟丁酸、游离脂肪酸、甘油三酯和胆固醇)和内分泌指标(胰岛素和胰高血糖素)。结果显示:1)围产期奶牛日粮中添加过瘤胃胆碱能明显提高奶牛泌乳量(MY)和干物质摄入量(DMI),以每头奶牛每天添加10g过瘤胃胆碱效果最好。2)围产期奶牛日粮添加过瘤胃胆碱,能延缓血浆葡萄...

本试验旨在初步探究并比较安琪与乐斯福两种不同来源酵母对奶牛瘤胃发酵特性的作用,预测其对奶牛生产性能可能的影响,从而为研究酵母在反刍家畜生产中营养生理调控提供理论依据。采用单因子区组试验设计,两种活性酵母均设置4个添加水平(0、0.025%、0.050%、0.075%),分别以玉米秸秆和水稻秸秆为底物,采集奶牛瘤胃液进行48h的体外发酵试验。结果表明,两种酵母对两种底物体外发酵产气量、产气参数、中性洗涤纤维消失率(NDFD)均无显著影响(P>0.05),但提高了玉米秸秆(P<0.05)和水稻秸秆(P<0.01)的DMD;添加两种酵母对玉米秸秆体外发酵液pH值及NH3-N浓度均没有表现出显著性影响...

为探讨不同生理状态热应激奶牛嗜淀粉瘤胃杆菌(Ruminobacter amylophilus)的含量差异,选择48头产奶母牛,按照因子试验设计分为泌乳中期和后期牛、高产和中产牛、初产和经产牛。奶牛经历1周热应激后,采集瘤胃液,利用RT-PCR定量分析方法,测定瘤胃液中嗜淀粉杆菌的含量。结果显示,微生物的数量经lg转化后,泌乳中期奶牛嗜淀粉瘤胃杆菌为7.70,泌乳后期为7.95,差异不显著(P>0.05);高产牛嗜淀粉瘤胃杆菌为7.46,中产牛为8.20,差异不显著(P>0.05);初产牛嗜淀粉瘤胃杆菌为7.97,经产牛为7.68,差异不显著(P>0.05)。综上所述,在奶牛遭受热应激时,嗜淀粉...

为科学制定银杏叶质量控制标准提供依据,借助代谢组学方法研究不同时期采收的银杏叶中化学组分的变化规律。经过标准的提取工艺得不同采收期(春季、夏季、秋季)银杏叶的提取物,利用超高效液相色谱与三重四级杆飞行时间质谱联用技术UPLC–QTOF MSE的方法进行数据采集,借助多元统计的主成分分析方法比较上述银杏叶之间的组分差异。结果表明,不同采收季节的银杏叶组分差异明显,并呈现规律性的变化,尤其是槲皮素对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷等黄酮醇苷类成分含量从春季到夏季、秋季呈下降趋势。

反刍动物在发情期血浆雌二醇(E_2)含量大幅度升高,同时消化机能降低,采食量明显减少。关于雌激素对瘤胃消化代谢的作用,尚未阐明。本研究旨在比较水牛、奶牛发情期和间情期瘤胃 E_2 水平和消化代谢的变化。

【目的】植物激素在植物生长发育和响应生物和非生物胁迫过程中起着非常重要的作用,研究植物激素的合成、运输、代谢和分子作用机理,需要对植物激素进行定量分析。针对植物激素在大多数植物组织中的含量很低,性质不稳定,与其共存的次生代谢产物背景干扰严重,此外有些植物材料非常珍稀,材料量少的问题,以毛白杨叶片为材料,建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定植物组织中吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA3)、茉莉酸(JA)和水杨酸(SA)的新方法,为植物激素的研究提供技术支撑。【方法】在用异丙醇、水和盐酸(2∶1∶0.002,v∶v∶v)混合液4℃提取激素时,定量加入IAA、ABA、GA3、JA和SA内标(2H5-IAA、2H6-ABA、2H-JA和2H5-SA各10 ng,2H2-GA320 ng),激素提取液经二氯甲烷萃取后,UPLC-MS/MS定量测定。乙腈-0.1%乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL/min,柱温30℃,C18色谱柱分离,多反应监测(MRM)、电喷雾电离源(ESI)负离子模式下进行分析,内标曲线法定量。【结果】5种植物激素在5 min内实现完全分离,检出限为0.01～0.05 pg/g,定量限为0.05～0.15 pg/g。在实验所采用的浓度范围内线性相关系数r在0.999 4～0.999 9之间,精密度和重现性均较好,峰面积的相对标准偏差为1.1%～3.9%。经检测毛白杨叶片中IAA、ABA、GA3、JA、SA的含量分别为(74.38±4.62)ng/g、(193.80±6.04)ng/g、(674.67±18.08)ng/g、(286.62±7.48)ng/g、(746.02±13.93)ng/g。【结论】本法操作简单,灵敏度高,分析时间短,适用于多种植物激素的测定。

【目的】研究不同脂肪酸构成的油料籽实对奶牛瘤胃液和血浆中脂肪酸的组成及乳脂CLA含量的影响,初步探讨乳脂CLA合成机制,为改善牛奶脂肪酸构成,提高乳脂中CLA含量寻找合适途径。【方法】以3头装有永久性瘤胃瘘管的经产荷斯坦奶牛为试验动物,采用3×3拉丁方设计,在日粮中添加不同油料籽实(葵花籽、亚麻籽、菜籽),3种日粮的粗脂肪含量基本相同,测定采食后不同时间点瘤胃液、血浆及乳脂中脂肪酸含量。【结果】葵花籽组奶牛乳脂中CLA、t11-C18﹕1、PUFA及LCFA比例均显著高于菜籽组和亚麻籽组(P<0.05);葵花籽组奶牛血浆中t11-C18﹕1的比例显著高于菜籽组和亚麻籽组(P<0.05);瘤胃液...

选用16头泌乳中期荷斯坦奶牛按拉丁方设计进行试验,研究饲粮中补充0、8、12和16 g.d-1过瘤胃蛋氨酸对奶牛产奶量、乳成分以及血液氨基酸含量的影响。结果表明,与对照组相比,补饲过瘤胃蛋氨酸能够提高奶牛乳蛋白、乳脂率和酪蛋白水平。补饲过瘤胃蛋氨酸对产奶量较高(>22 kg.d-1)的奶牛有增加产奶量的趋势,对产奶量低的奶牛没有积极作用,能提高高产奶牛乳蛋白和乳脂肪量。选用9头泌乳中期荷斯坦奶牛,在补饲过瘤胃蛋氨酸和普通蛋氨酸前后连续采血44 h,探索蛋氨酸的吸收变化曲线,发现奶牛补饲过瘤胃蛋氨酸后12~16 h达到吸收高峰,过瘤胃蛋氨酸能显著提高奶牛血清蛋氨酸水平,而补饲普通蛋氨酸则无明显影...

【目的】研究不同日粮精粗比条件下奶牛瘤胃pH,挥发性脂肪酸(VFA,主要包括乙酸、丙酸、丁酸)浓度和血清乙酸、丙酸、丁酸浓度的动态变化规律。【方法】选用5头健康的干奶期荷斯坦奶牛(体重(502±25)kg),饲喂精粗比(质量比)分别为30∶70、35∶65、40∶60、45∶55、50∶50、55∶45、60∶40、70∶30和100∶0的9种日粮,对奶牛瘤胃内pH、VFA和血清VFA浓度进行检测。对5头奶牛连续进行9期饲喂试验,前8期试验每期30 d,最后一期试验为3 d。【结果】随日粮中精料比例的提高,奶牛瘤胃pH逐渐降低,其中饲喂精粗比为100:0日粮组的奶牛瘤胃pH显著低于其他精粗比日...