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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
饶涛 张勇 杜霞 张洋 贾睿 陶妍 何培民
采用超高压液相色谱-四极杆串联质谱法建立了腹泻性贝毒(diarrhetic shellfish poisoning,DSP)、大田软海绵酸(okadaicacid,OA)和鳍藻毒素1(dinophysistoxin-1,DTX1)的检测方法。样品经80%甲醇提取后,经正己烷脱脂和C18固相萃取柱净化,采用Hypersil GOLD C18色谱柱分离,以50%(体积分数)乙腈水(0.2%甲酸)溶液为流动相等度洗脱,电喷雾电离,在选择反应监测(SRM)模式下进行定性与定量分析。OA和DTX1在25～400μg/kg范围内线性关系良好,OA和DTX1最低定量限(LOQ,S/N>10)分别为5μg/k...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
任洁 崔冶建 付亚平 胡建民 罗俊
彭泽鲫在浓度为20ppm的MS－222溶液中浸浴48小时后，鱼体内所吸收的MS－222平均量为16．47微克／克鱼组织。其中每克鱼肉中所含的MS－222量仅为12．93微克。将彭泽鲫转入清水中贮养12小时后，鱼肉中所含的MS－222基本排出。鱼体内MS－222基本排完约需30小时。
[期刊] 华北农学报
[作者]
于晓明 陈瑾 侯立婷 吴楠 侯继波 郑其升
２０１１年江苏泰兴某些猪场相继发生了以腹泻为主要症状的疾病，造成大量哺乳仔猪甚至育肥猪发生死亡。对采集腹泻病料进行病毒的分离鉴定及毒力分析。首先用特异性引物对采集的病料样品进行常见猪病的ＰＣＲ或ＲＴ－ＰＣＲ检测，并处理病料组织进行电镜观察；腹泻病毒经１日龄未吃初乳的仔猪进行猪体复归试验，再次收取病料并进行病毒纯净性检测；最后测定了腹泻组织毒对５，１５，２５日龄仔猪的致病性，及对２５日龄仔猪的半数致死量。结果表明：ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ鉴定结果腹泻猪为猪流行性腹泻病毒感染所致，在组织中没有其他常见猪传染病病原的存在；电镜观察呈典型的ＰＥＤＶ冠状形态；以特异性引物扩增Ｓ１基因，分析测序结果并进行基因．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
祁寒松 吴鹏 赵光伟 杨晓伟
【目的】本文研究了重庆地区猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)M基因序列的特征。【方法】2015年期间采集了来自重庆地区3家规模猪场的病料,采用RT-PCR的方法对PEDV的M基因进行了扩增,测序后进行了分析,并与中国其他省份、美国、韩国的PEDV毒株进行同源性比较,完成了进化树的构建。【结果】3份病料中M基因片段长为426 bp,编码142个氨基酸。测序表明,3份毒株M基因同源性为98.7%99.8%。与经典毒株CV777相比,核酸序列同源性为97
关键词：
猪流行性腹泻病毒 M基因 序列分析
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
朱杰 杨才俊 祁明普 杨凯辉 王宇 陈颖钰 陈曦 胡长敏 郭爱珍
为全面评估我国牛群中牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）病原流行率对该病毒感染的防控，在中国知网（CNKI）、万方、维普、PubMed和ScienceDirect 5个数据库中，检索截止到2021年9月1日发表的关于中国牛群BVDV流行情况的文献，并进行系统评价和Meta分析。共筛选出93篇关于BVDV病原学检测的研究论文纳入本次Meta分析中。分析结果显示：我国牛群中BVDV病原（抗原和核酸）流行率为9.8%(95%CI:7.8,11.9)，其中BVDV抗原流行率为3.1%(95%CI:2.1,4.4),BVDV核酸流行率为19.5%(95%CI:16.0,23.3)。各省间比较发现，青海省流行率最高，为22.6%(95%CI:12.1,35.3)，其次是福建省和广西壮族自治区。进一步开展亚组分析和Meta回归分析的结果显示，品种（牦牛对比奶牛：比值比（odds ratio,OR）=1.37,95%CI:1.05～1.79）、饲养模式（散养对比规模化：OR=1.41,95%CI:1.08～1.85）、诊断方法（RT-PCR vs ELISA:OR=1.64,95%CI:1.38～1.94）、牛体健康状况（有临床症状对比无临床症状：OR=1.42,95%CI:1.20～1.68）、高山高原气候（OR=1.54,95%CI:1.20～1.97）和高海拔（>3000 m;OR=1.64,95%CI:1.21～2.21）等都是BVDV感染流行的风险因子。以上结果表明，BVDV在我国奶牛、肉牛和牦牛群体中广泛流行，有必要持续监测BVDV感染的流行情况。此外，根据本研究揭示风险因子，制定相应的防控方案，防止BVDV在我国牛群中传播。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吴美洲 陈芳洲 李中华 万胜锋 叶十一 何启盖
为研究猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）变异株特性，通过细胞培养、细胞病变（ＣＰＥ）观察、ＲＴ－ＰＣＲ、间接免疫荧光实验和透射电镜观察分离鉴定１株ＰＥＤＶ变异株（ＣＨ／ＹＮＫＭ－８／２０１３株）并分析了全基因组序列。运用基因组分段扩增方法，测得该毒株的全基因组序列（ＧＥＮＢａＮＫ登录号为ＫＦ７６１６７５．１）。该毒株Ｓ基因Ｎ端比ＣＶ７７７毒株Ｓ基因的Ｎ端长９ＢＰ，包括１５ＢＰ的插入和６ＢＰ的缺失，表明ＣＨ／ＹＮＫＭ－８／２０１３为变异毒株。同源性分析显示，该毒株的基因组序列与我国广东２０１１年分离毒株ＬＣ的同源关系最近，相似性为９９．６％，与韩国毒株ＫＮＵ－１３０５和美国毒株ＵＳａ／ＭｉＮＮＥＳｏＴ．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
朱小甫 吴旭锦 郑红青 尹宝英 熊忙利
[目的]分析2014-2021年陕西省猪群猪流行性腹泻病毒(PEDV)主要毒力基因的生物学信息特征,揭示陕西省PEDV流行毒株基因变异情况,为防控猪流行性腹泻提供理论参考。[方法]参考PEDV全基因序列设计4对引物,采用RT-PCR方法分段扩增10株陕西省PEDV流行毒株S基因。利用生物信息分析软件,将获得的PEDV流行毒株S基因与GenBank中公开的57株PEDV序列进行比对分析。[结果]获得了10株陕西省PEDV流行毒株S基因全序列,长度为4 149～4 167 bp。将序列上传GenBank,获得相应的登录号为OL855978～OL855987。系统进化树分析显示,67个PEDV毒株分为G1a、G1b、G2a和G2b 4个亚群,10株PEDV流行毒株均属于G2b亚群,且遗传距离较近,与我国多个省区近年流行毒株亲缘关系较近。同源性分析结果表明,10株流行毒株之间S基因核苷酸序列同源性为95.4%～98.3%,氨基酸同源性为91.0%～98.1%;10株流行毒株与疫苗毒株S基因核苷酸序列同源性为91.7%～98.5%,氨基酸同源性为87.8%～98.5%。与G1a亚群的SD-M、CV777疫苗毒株核苷酸、氨基酸相比同源性均较低,而与G2b亚群的AJ1102、LNCT2、LW/L、XJ-DB2疫苗毒株核苷酸、氨基酸相比同源性均较高。与CV777 S蛋白相比较,共有88个氨基酸位点出现变异,变异位点占总位点数的6.36%(88/1 383),其中在59～62位氨基酸有7株毒株出现了QGVN插入,在140位氨基酸有8株毒株出现N插入,在160～161位氨基酸有7株毒株出现DG缺失。S蛋白主要的中和表位、抗原表位和单抗识别表位出现多个变异位点。二级结构预测发现,与CV777相比较,多数流行毒株S蛋白的。螺旋、无规则卷曲占比稍有增加,β转角、延伸占比有所下降。S蛋白糖基化位点预测结果表明,与CV777株相比,流行毒株有多个引入或缺失的糖基化位点。[结论]陕西省PEDV流行毒株S蛋白抗原性发生了较大变化,推测疫苗免疫保护效果下降与此密切相关。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
董世娟 朱于敏 于瑞嵩 司伏生 石明明 张源淑 李震
从浙江地区分离的2株代表性样品与全国范围内流行的参考毒株进行比对和遗传进化分析,结果分为4个组,代表性样品与大部分国内的毒株落入G4-2组,与国内早期CH-S毒株核苷酸(氨基酸)同源性为98.4%~98.5%(99.1%~99.6%);以华南地区为主的2011-2012年分离的毒株自成一组,与中国其他地区的毒株的同源性为95.0%~97.2%,与其余3组比较有9个核苷酸的变异。遗传进化分析表明所分离毒株与大部分中国的流行毒株属于一个基因型;以2011-2012年中国华南地区为主的毒株成为PEDV的一个新的基因型;提示2011-2012年中国流行着2种PEDV的基因型。
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘文俊 王娟萍 姚敬明 吴忻 孟帆 韩一超 樊振华 薛翼鹏 米瑞娟 李红丽 赵岳
为了研究山西地区猪流行性腹泻病毒ORF3基因的遗传变异情况,2014-2015年从山西地区11个地市收集的PEDV阳性病料中扩增到4株PEDV的ORF3基因,并进行序列比对及遗传分析。序列分析结果表明,4株PEDV山西分离毒株的ORF3基因与CV777毒株相比,无核苷酸插入和缺失,有部分核苷酸及氨基酸发生变异;4株PEDV山西分离毒株的ORF3基因之间核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.6%100.0%和98.7%99.6%,与CV777、疫苗株CV777 truncated和attenuated DR13
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵丽 韩昊莹 张鸿鑫 卢婷婷 王文静 陈红英
为了分析河南省猪流行性腹泻病毒(PEDV)毒株S和ORF3基因变异情况,于2015年1-12月收集河南省规模化猪场的150份PED疑似病料利用RT-PCR方法进行S和ORF3基因检测,共扩增到15株PEDV的S和ORF3基因,回收纯化PCR产物克隆至T载体,并进行序列分析,结果显示,15株S基因与CV777相比,核苷酸同源性为93. 6%~93. 9%,氨基酸同源性为92. 2%~93. 1%,而且存在不同碱基插入和缺失; ORF3基因与CV777相比,核苷酸同源性为97. 7%~100%,氨基酸同源性为93. 7%~100%,与疫苗毒株相比,不存在氨基酸的缺失现象。进化树分析基于S基因扩增的15株独立成群,与其他参考毒株亲缘较远;基于ORF3基因扩增的15个毒株与国内分离株、美国株及韩国株均有较近的亲缘关系,与经典毒株CV777株亲缘关系较远。对于S和ORF3基因在整个进化关系中,试验中的15个河南株均相对独立成群,与经典毒株CV777及国内所使用的疫苗株,亲缘关系较远,15株河南株的S和ORF3基因存在基因变异,为河南省PED的分子流行病学研究和防控提供技术支持。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
顾超逸 孙裴 施雷
【目的】研究安徽地区猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)ORF3基因序列特征。【方法】于2012-2013年,从安徽省合肥、肥东、肥西、滁州、亳州、阜阳、马鞍山、蚌埠、宿州、巢湖、六安、淮南、宣城和淮北地区的19个不同猪场采集93份病料,采用RT-PCR方法对PEDV ORF3基因进行扩增,测序后进行序列分析,并与韩国、欧洲及中国其他省份PEDV毒株进行同源性比较,并构建遗传进化树。【结果】在93份病料中,自20份病料中获得的PEDVORF3基因开放阅读框全长为810bp,编码224个氨基酸,较多的基因位点发生了突变,没有缺失和插入。安徽...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
宿志伟 赵峰 刘远平 徐娜 周德庆 姚建华 李钰金 刘志敏
本研究根据固相吸附毒素跟踪技术（Ｓｏｌｉｄ ｐｈａＳｅ ａｄＳｏｒｂｅｎｔ ａｎｄ ｔｏｘｉｎ ｔｒａｃｋｉｎｇ，Ｓｐａｔｔ）原理，在牡蛎养殖区内，利用ｈｐ２０大孔吸附树脂对海水中常见的４种腹泻贝类毒素：大田软海绵酸（ｏｋａｄａｉｃ ａｃｉｄ，ｏａ）及其衍生物鳍藻毒素（ｄｉｎｏｐｈｙＳｉＳｔｏｘｉｎ－１，ｄｔｘ－１和ｄｉｎｏｐｈｙＳｉＳｔｏｘｉｎ－２，ｄｔｘ－２）、米氏螺环毒素（ｇｙｍｎｏｄｉｍｉｎｅ ｔｏｘｉｎＳ，ｇｙｍ）进行吸附，对其吸附效率进行评价；建立了从海水中富集与检测４种常见腹泻性贝类毒素的方法；在养殖区内，选取５个采样点，每隔７ ｄ，同步采集海水与牡蛎样品，对牡蛎养殖区海水中和牡．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
袁骐
在江苏及浙江共5个地点采集了8种贝类,使用四甲基氢氧化胺和9-氯乙基蒽衍生的高效液相色谱法,检测样品的大田软海绵酸含量。结果表明:样品中的大田软海绵酸含量从15.75～218.95ng·g-1,平均含量为37.10ng·g-1,检出率为48%。有一个样品的含量超过食用标准(200ng·g-1)。从该结果与其他研究结果可以推断腹泻性贝类毒素在我国分布区域较广,且在某些地区含量较高。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王增斌 宋雪 王洋 李怡诺 鲁周民
[目的]探明枇杷叶次生代谢物在生长过程中的变化规律,为枇杷叶的有效利用提供理论依据。[方法]以枇杷夏梢为试验材料,从新叶停止伸长生长(7月4日)开始,每3个月采样1次,以甲醇作为提取溶剂,采用超高效液相色谱-质谱法(UHPLC-MS),测定枇杷叶中的酚酸类、有机酸类、单宁类、黄酮类、萜类、生物碱类、香豆素类等次生代谢成分,分析其在不同时期的变化规律。[结果]在枇杷叶甲醇提取物中共分离鉴定出8类71种化合物,包括酚酸类8种,有机酸类5种,单宁类3种,黄酮类28种,萜类18种,生物碱类2种,香豆素类3种,其他类4种。酚酸类主要成分为绿原酸和新绿原酸,黄酮类主要成分为儿茶素和2"-O-对香豆酰基牡荆素,萜类主要成分为积雪草酸、山楂酸和皂皮酸。在枇杷夏梢周年生长中,各类次生代谢物质的化合物数量和总含量呈现出规律变化:从化合物数量看,除单宁类、生物碱类和其他类次生代谢物数量基本不变外,其余5类次生代谢物的化合物数量均呈增加趋势,而且化合物数量增加都在生长初期的6个月内完成;从每类物质总含量看,萜类和其他类物质含量呈逐渐上升趋势,酚酸、黄酮和香豆素3类物质含量呈先上升后下降趋势,单宁类物质含量变化不大,有机酸类与生物碱类物质含量总体呈下降趋势。[结论]以萜类为利用目标原料时,应在枇杷叶老熟并即将掉落时采集;而以酚酸、黄酮类物质为利用目标原料时,应在1月份采集。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
倪冰冰 刘宏 于立洋 张国昀 何彩云 张建国
[目的]基于超高效液相色谱–四极杆飞行时间–质谱（UHPLC–QTOF–MS）技术分析五倍子中单宁成分，建立一种有效的五倍子单宁成分测定方法，并解析单宁的裂解规律。[方法]使用高温和超声波辅助方法提取五倍子中的酚类化合物，基于二级质谱推定化合物的裂解途径。[结果]共鉴定到20种化合物，包含14种没食子单宁、3种酚酸、2种没食子酸酯和1种黄烷醇。以高温121℃为提取条件，均未鉴定到分子质量高于1 500 Da的没食子单宁，而在超声波辅助提取的五倍子水提取液中，成功地检测到1–O–没食子酰基葡萄糖至14–O–没食子酰基葡萄糖，其中，超声功率1 500 W，提取温度65℃条件下，鉴定到更多的没食子单宁异构体。MS/MS图谱显示，五倍子单宁主要通过没食子酸、没食子酰基、糖苷、水、羧基的损失进行裂解。[结论]本研究证明，超声波辅助提取条件下，应用UHPLC–QTOF–MS技术能够全面高效地分析五倍子中的单宁成分，本研究为富含单宁的植物的化学成分研究提供参考依据。
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