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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
任婉莹 姜晓娜 葛彦龙 田立静 李■ 李池陶 田景文 胡雪松 石潇丹 石连玉 贾智英
以抗病镜鲤选育系F_4和德国镜鲤选育系为实验材料，通过RT-PCR技术确定鲤受CyHV-3感染过程两组鱼脾脏组织中TLR18、接头蛋白MyD88及相应配体TRAF6、下游因子IRF5及P65基因的表达模式，并分析其在抗病镜鲤选育系F_4中的相关抗病机制。结果显示：TLR18、MyD88、TRAF6、IRF5基因在两组鱼间均呈先上升后下降并趋于平稳趋势，在48 h达到最高，而P65基因在未选育组呈先上升后下降并恢复初始水平趋势，在48 h达到最高，在选育组呈下降后恢复初始水平趋势。在未感染CyHV-3时，TLR18与IRF5基因相对表达量在选育组极显著低于未选育组，MyD88、TRAF6与P65基因相对表达量在选育组极显著高于未选育组；到CyHV-3感染早期，TLR18与P65基因相对表达量在选育组极显著低于未选育组，MyD88、TRAF6及IRF5基因相对表达量在选育组显著高于未选育组。推测在CyHV-3感染过程中，TLR18基因通过依赖MyD88途径产生IRF5基因清除病毒的同时激活NF-κB信号通路，且选育组较未选育组通过产生较多IRF5基因清除病毒，而未选育组较选育组显著激活NF-κB信号通路产生相关炎症因子，这可能与选育组抗病性及抗病机制有关。该结果不仅验证了选育组在机体基础水平及先天免疫过程中对CyHV-3抗性的增强，还为深入研究选育组抗病机制及鱼类TLRs在病毒感染过程中的作用及其相关信号通路奠定基础。
关键词：
鲤 TLR18 CyHV-3 选育
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
白姗姗 贾智英 郎延贺 石连玉
对镜鲤抗锦鲤疱疹病毒(CyHV-3)新品种的选育工作,目前已经进行到F_3,F_2、F_3成活率相近且显著高于F_1。本研究利用实时荧光定量PCR技术比较选育世代间免疫基因IL-1β、TRAF6、My D88a、I-IFN和TLR7a的表达及Cy HV-3病毒载量情况,从而在免疫基因表达水平及病毒载量两个方面结合抗病成活率综合评估选育世代的抗病能力。结果显示:(1)Cy HV-3病毒载量在F_1、F_2、F_3中呈下降趋势,且F_3显著低于F_1、F_2(P<0.05)、TRAF6显著高于F_1(P<0.
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孙佳鑫 石连玉 姜晓娜 李池陶 葛彦龙 胡雪松 张晓峰 贾智英
以F_(4)为实验材料,利用实时荧光定量PCR技术以TK和ORF72基因为病毒标志基因，分析镜鲤抗疱疹病毒（CyHV-3）选育抗病品系F_(4)在病毒感染不同阶段中的表达量。结果显示：（1）两个基因不同感染阶段脾、肾组织表达量趋势一致，24～144h呈上升趋势，144～288h呈下降趋势，且在144h脾、肾组织的病毒表达量均达到最高。（2）脾组织两个基因表达量均低于肾组织。选育组两个基因在120h均达到差异极显著(P<0.01)，未选育组两个基因均在96～144h差异极显著（P<0.01）。（3）选育组两个基因表达量低于未选育组。脾、肾组织TK基因均在96～168h差异极显著(P<0.01)；脾、肾组织ORF72基因均在96～192h差异极显著(P<0.01)，其中脾组织216h也差异极显著(P<0.01)。以上结果说明选育组抗病性能强于未选育组，其中肾组织抗病性能强于脾组织，且经选育肾组织抗病免疫性能得到提高。目前，未见其他鱼类的选育种在抗病性状上达到一个稳定阶段，本研究在对于病毒表达量的研究当中可对其他鱼类提供重要的指导作用。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
路飏 王启龙 李敏 陈松林 沙珍霞
应用实时荧光定量PCR技术,检测了TLR20和TLR21基因在斑点叉尾Ictalurus punctatus感染迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda、链球菌Streptococcus iniae、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和斑点叉尾呼肠孤病毒(Channel Catfish Hemorrhage Reovirus,CCRV)后,在0、12、24、48、72h、7d,肝脏、头肾、脾脏、肠中的时空表达特征。结果显示,4种病原均能引起斑点叉尾TLR20、TLR21基因在所测免疫相关组织中表达量的变化,但呈现出不同的表达模式:感染嗜水气单胞菌后这两种基因...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
束婧婷 宋迟 徐文娟 章明 单艳菊 陈文峰 宋卫涛 陶志云 李慧芳
【目的】ＩＧＦ－Ｉ－钙调磷酸酶（Ｃａ Ｎ）－ＮＦａＴ信号途径是调节肌肉生长、决定不同肌纤维类型的主要信号途径，本研究选择生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验材料，首次对不同品种鸭胚胎期和出雏早期肌肉中ＩＧＦ－Ｉ－Ｃａ Ｎ－ＮＦａＴ信号通路相关基因的表达规律及其与肌纤维类型的相关性进行了研究。【方法】采用实时荧光定量ＰＣＲ方法研究鸭１３、１７、２１、２５、２７胚龄和出雏后７日龄胰岛素样生长因子（ＩＮｓｕｌＩＮ－ｌＩｋｅ ＧＲｏｗＴｈ ＦａＣＴｏＲｓ，ＩＧＦ－Ｉ），钙调磷酸酶（ＣａｌＣＩＮｅｕＲＩＮ，ＣＮ ａα）和活化Ｔ细胞核因子（ＮｕＣｌｅａＲ ＦａＣＴｏＲ ｏＦ ａＣＴＩｖａＴｅｄ Ｔ Ｃｅｌｌ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
束婧婷 宋迟 徐文娟 章明 单艳菊 陈文峰 宋卫涛 陶志云 李慧芳
【目的】IGF-I-钙调磷酸酶(Ca N)-NFAT信号途径是调节肌肉生长、决定不同肌纤维类型的主要信号途径,本研究选择生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验材料,首次对不同品种鸭胚胎期和出雏早期肌肉中IGF-I-Ca N-NFAT信号通路相关基因的表达规律及其与肌纤维类型的相关性进行了研究。【方法】采用实时荧光定量PCR方法研究鸭13、17、21、25、27胚龄和出雏后7日龄胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGF-I),钙调磷酸酶(calcineurin,Cn Aα)和活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cell...
[期刊] 水产学报
[作者]
王莉 孙伟 储经乾 刘颖 史思瑞 葛楚天 钱国英
SOX9基因在脊椎动物性别决定和性腺分化中扮演重要的调控作用。从mRNA和蛋白水平分析中华鳖SOX9基因在不同组织中的差异性表达、在胚胎性腺和成年睾丸中的细胞定位以及在性逆转中的表达变化,研究SOX9基因在中华鳖性别分化中的调控作用。Real-time PCR结果显示,SOX9基因在中华鳖雄性性腺中特异性表达。免疫荧光染色分析显示,SOX9蛋白在雄性18期胚胎性腺中开始表达,随着性腺的发育,SOX9蛋白定位于性腺Sertoli前体细胞细胞核中;而在雌性胚胎性腺并未见其表达。此外,在雌激素诱导的雄性向雌性性逆转胚胎中,SOX9基因显著下调,而在芳香化酶抑制剂诱导的雌性向雄性性逆转胚胎中,SOX9...
关键词：
中华鳖 SOX9基因 性别分化 性逆转
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘宁 陈秀荔 黄欣
为探究RNase 1在鱼类食性适应性进化中的作用,对不同食性的9种鲤科鱼类,包括草食性的草鱼(Ctenopharyngodon idella)和团头鲂(Megalobrama amblycephala)、杂食性的鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙(Hypophthalmichthys nobilis)、鲤(Cyprinus carpio)、黄尾鲴(Xenocypris davidi)和斑马鱼(Danio rerio)以及肉食性的翘嘴鲌(Culter alburnus)和鳡(Elopichthys bambusa)的RNase 1基因进行鉴定、序列特征分析、进化规律及组织表达模式分析。研究结果显示,与哺乳动物不同,9种鲤科鱼类基因组中只存在1个RNase 1基因,序列同源性高,且具有RNase A超家族的序列特征,包括N端信号肽序列,6个间隔的半胱氨酸残基,3个催化碱基形成的催化三联体和"CKXXNTF"序列;系统发育树显示,硬骨鱼和哺乳动物的RNase 1聚为不同分支,鲤科鱼类单独聚为一支;qRT-PCR结果显示,植食性的团头鲂和草鱼、杂食性的鳙和肉食性的翘嘴鲌的RNase 1基因在不同组织中的表达模式各不相同,4种鱼类在肝脏中相对表达量高,在团头鲂和翘嘴鲌的脾脏中表达量也高。以上结果表明,鲤科鱼类的RNase 1的进化与物种食性的关联性不大,但符合物种进化的规律。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
林梦娇 陈亚东 刘洋 王磊 张天时 史萌 陈松林
为了探究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)vstm2a基因响应细菌感染的表达特征和其蛋白功能。本研究采用实时荧光定量(RT-qPCR)检测哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染半滑舌鳎后免疫组织(鳃、肝脏、脾脏、肠道和肾脏)中vstm2a的相对表达特征；构建vstm2a基因原核表达重组质粒，获得重组蛋白，采用牛津杯法、细菌蛋白结合实验和siRNA沉默等，探究vstm2a蛋白在细菌入侵中的功能。结果显示：vstm2a蛋白具有跨膜结构域和Ig结构域，在细胞表面行使功能；相关免疫组织中的vstm2a基因的表达量在哈维氏弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、迟缓爱德华氏菌和无乳链球菌感染半滑舌鳎后6 h、48 h和72 h显著升高；vstm2a重组蛋白与细菌孵育后，经过低速离心与细菌共同沉淀；抑菌实验显示其显著抑制细菌的生长，并且siRNA降低vstm2a基因后，抑制了细胞因子IL-6和IL-10等基因的表达。本研究证明了vstm2a蛋白响应细菌入侵，可以识别和结合细菌，通过抑制细菌生长和激活促炎症细胞因子，对病原菌的侵染起到免疫防御作用，是一种重要的免疫蛋白。本研究有助于解析细菌粘附细胞或鱼体抵抗细菌入侵的机制，为未来的采用分子手段选育抗性品种提供一定的理论基础。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
孙钰 吴桂贤 刘丽英 齐玉凯 李显耀
为研究鼠伤寒沙门氏菌感染后不同时间鸡盲肠和脾脏组织TLR4、TLR5、TLR15和TLR21 mRNA的表达规律,选用沙门氏菌阴性济宁百日鸡36只,随机分为2组,饲喂于隔离器中,2日龄分别接种1.23×108cfu鼠伤寒沙门氏菌和PBS溶液,接种后第1、3和7天采集盲肠和脾脏组织样品,应用荧光定量PCR检测感染后各时间、各组织中TLR4、TLR5、TLR15和TLR21的表达量。结果显示,1)济宁百日鸡感染鼠伤寒沙门氏菌后盲肠中TLR4、TLR5、TLR15和TLR21表达量均发生显著变化(P<0.05);2)脾脏中TLR21和TLR4的表达量分别在接种后第1天和第3天显著上调(P<0.05)...
关键词：
鸡 TLR 鼠伤寒沙门氏菌 基因表达
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
赵丹 周丽青 郑言鑫 孙秀俊 吴彪 刘志鸿 吴宙 吴磊
Foxl2是叉头状转录因子(forkhead transcription factor， Fox)基因家族的重要成员之一，在卵巢发育和性别调控中发挥着重要作用。为探究Foxl2在虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)性腺发育中的表达调控模式，利用生物信息学方法分析了虾夷扇贝Foxl2的序列特征；采用半定量PCR(RT-PCR)检测了Foxl2在不同组织中的表达差异。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和原位杂交技术(ISH)揭示了Foxl2在性腺发育4个时期(增殖期、生长期、成熟期和排放期)的时空表达变化。结果显示，虾夷扇贝Foxl2序列包含Fox基因家族共有的FH结构域；多重序列比较分析显示，虾夷扇贝与栉孔扇贝(Chlamys farreri)、欧洲大扇贝(Pecten maximus)的相似性最高，分别为98%、96%。系统进化树分析显示，在不同物种以及进化的过程中，Foxl2基因具有较高的保守性。定量分析和原位杂交结果显示，原位杂交阳性信号主要定位在生殖细胞的细胞质中。在虾夷扇贝的鳃、肾、肝胰腺、精巢中，都可检测到少量Foxl2转录本的存在，在卵巢中表达量最高，且在卵巢成熟期达到最高值。随着性腺发育和精细胞的逐级分化，Foxl2的表达量呈下降趋势，这与原位杂交的结果一致。研究结果表明，Foxl2在虾夷扇贝卵巢发育中可能发挥重要作用，推测其是雌性虾夷扇贝性腺发育调控中的关键基因，可为今后阐明其在虾夷扇贝性别分化进程中的功能提供理论依据。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姚晓磊 孟繁星 王书婷 刘孜斐 王锋
[目的]本文旨在探究不同发育阶段湖羊附睾(头、体、尾)中GALNTL5(polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase-like protein 5)的表达规律及其microRNA(miRNA)预测。[方法]选取3、9、24月龄(M)雄性湖羊各5只,屠宰后采集附睾(头、体、尾)组织。采用RT-qPCR和Western blot技术检测不同发育阶段湖羊附睾中GALNTL5 mRNA和蛋白表达水平;用免疫组化技术对其进行定位分析;用RNAhybrid和miRanda 2种软件分别预测GALNTL5对应的miRNA并取交集,同时检测候选miRNA在附睾尾中的表达规律。[结果]GALNTL5 mRNA和蛋白在附睾体、尾中表现为性成熟后(9 M和24 M)显著高于性成熟前(3 M)(P0.05)。除了GALNTL5蛋白在9 M与24 M附睾尾中差异显著外,其余均差异不显著(P>0.05);GALNTL5蛋白在附睾头、体中的表达规律一致;GALNTL5定位于附睾主细胞、基细胞及精子中。预测获得11个候选miRNA,按评分高低进行排序,选取miR-487a-5p、miR-485-5p、miR-329b-5p和miR-27a这4个miRNA进行验证,发现miR-487a-5p表达水平表现为性成熟后(9 M和24 M)显著高于性成熟前(3 M)(P<0.05),而miR-485-5p和miR-27a呈现相反趋势。[结论]GALNTL5在精子成熟过程中扮演着重要的角色;miR-485-5p和miR-27a可能与GALNTL5存在靶向关系。
关键词：
GALNTL5 附睾 发育阶段 湖羊
[期刊] 水产学报
[作者]
吴婷婷 杨弘 董在杰 夏德全 史瀛仙 季肖东 沈玉 孙伟勇
采用显微注射方法，将带有小鼠ＭＴ－１基因启动顺序与人生长激素ｈＧＨ基因顺序重组的线状ＤＮＡ片段，注入团头鲂和鲤的受精卵，获得成活的实验鱼。经斑点、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、放射免疫和酶联等方法检测，表明外源基因在受体鱼中得到整合、转录、翻译和表达，并具促生长效应。转基因雌鱼和雄鱼有性繁殖所获得的子鱼带有外源基因，表明外源基因能通过性细胞传递给子代，并仍具促生长效应。
[期刊] 水产学报
[作者]
张东玲 喻达辉 陈健 叶坤 王志勇
为探究大黄鱼ＭＡＲＣＨ５Ａ的免疫作用，实验采用反转录ＰＣＲ确认了该基因的Ｃ ＤＮＡ序列。该序列全长１０４５ ｂＰ，包含１个长度为８６７ ｂＰ的开放阅读框，编码２８８个氨基酸；序列分析显示该蛋白含１个ＲＩＮＧｖ和４个跨膜结构域。进化树分析表明大黄鱼有１１个ＭＡＲＣＨ家族蛋白（与哺乳动物相同），但鱼类存在多个亚型，ＭＡＲＣＨ５Ａ为鱼类特有蛋白，其蛋白理化性质和三维结构均与ＭＡＲＣＨ５ｂ存在一定的差异。荧光定量ＰＣＲ分析显示，ＭＡＲＣＨ５Ａ在健康大黄鱼的多个组织中均有表达，在血液和心脏中表达量最高，其次为鳃和脑，而在肾脏和皮肤中表达量最少。刺激隐核虫感染大黄鱼后，ＭＡＲＣＨ５Ａ在皮肤中早期表达量显著．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李敏 李琪 王启龙 路飏 陈松林 沙珍霞
分别用迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila、链球菌Streptococcus iniae和斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(channel catfish hemorrhage reovirus,CCRV)对斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus进行感染实验,取感染后0h、12h、24h、48h、72h和7d的头肾、肠、肝脏和脾脏,采用实时定量PCR方法检测了TLR5和TLR5S基因在这4种免疫相关组织中的时空表达特征,探讨它们与斑点叉尾鮰先天免疫反应的关系。结果表明,链球菌和迟钝爱德华氏菌能够引起TLR5和TLR5S强烈的上调...
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