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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘淼 温海深 何峰 李吉方 胡建 张远青 马瑞芹 母伟杰 祁保霞
采用半定量PCR的方法,分别从时空表达、温度应激调控和血清雌二醇(Estradiol-17β,E2)水平3个方面,共同研究雌性黄颡鱼Sox9基因的功能。结果表明,Sox9a1基因在雌性黄颡鱼各组织中存在广泛的表达,而Sox9a2则在脑和卵巢中有高表达(脑>卵巢),胃中表达微弱。在卵巢年周期发育中,卵巢中Sox9a1在Ⅲ期时达到高峰,Sox9a2则在Ⅴ期时达到峰值;脑中Sox9a1和Sox9a2表达的最大值均在Ⅱ期,后随着卵巢的发育表达水平显著下降。在热应激调控试验中,卵巢中Sox9a1虽然对热应激存在响应,但并没有出现E2相一致的变化趋势,而Sox9a2的变化趋势与血浆中E2相同。虽然脑中So...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王雨 徐伟 杨建 耿龙武 张宇婷
为初步阐明拟赤梢鱼(Pseudaspius leptocephalus)卵巢发育特征及sox3 (sry related high mobility group box 3)基因在其卵巢发育过程中的作用，本研究通过组织切片观察了拟赤梢鱼卵巢早期发育过程，利用RACE技术克隆了该鱼sox3基因cDNA全长序列，并进行生物信息学分析；利用实时荧光定量PCR技术分析了sox3基因在拟赤梢鱼不同组织及性腺不同发育时期的表达模式。结果显示，拟赤梢鱼卵巢在孵化后45 d分化形成，160 d时由Ⅰ期进入Ⅱ期，孵化后360 d，卵巢仍处于Ⅱ期。拟赤梢鱼sox3基因cDNA全长为1800 bp (NCBI登录号：MT952206)，编码299个氨基酸，存在保守的HMG结构域。氨基酸序列比对和系统进化树分析结果显示，拟赤梢鱼SOX3蛋白与斑马鱼(Danio rerio)、翘嘴鲌(Culter alburnus)亲缘关系最近。此外，sox3基因在拟赤梢鱼卵巢中表达量最高，其次是脑、眼睛，在精巢和其他组织中微量表达；在性腺分化过程中，sox3基因在卵巢中表达量显著高于未分化性腺和精巢，在卵巢发育阶段表达量不断升高，而在精巢中持续低水平表达。综上，本研究推测sox3基因主要参与拟赤梢鱼卵巢的分化和发育。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李志敏 李健 李吉涛 何玉英 葛倩倩 索帅
为了研究法尼酸甲基转移酶（Ｆａｒｎｅｓｏｉｃ ａｃｉｄ ｏ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓＦｅｒａｓｅ，Ｆａｍｅｔ）在脊尾白虾卵巢发育中的作用，采用实时荧光定量Ｐｃｒ方法分析连续３次繁殖过程中卵巢不同发育时期（Ⅰ－Ⅴ期）大颚器、卵巢和肝胰腺中Ｆａｍｅｔ基因的表达规律。结果显示，Ｆａｍｅｔ基因在鳃、心脏、肌肉、肝胰腺、卵巢、大颚器等组织中均有稳定的表达，其中，在鳃和大颚器的表达量显著高于其他组织；在卵巢发育周期内，Ｆａｍｅｔ基因在大颚器、卵巢、肝胰腺中的表达量变化趋势基本一致，从Ⅰ－Ⅳ期逐渐下降，到Ⅴ期时表达量上调；在每个卵巢发育时期，Ｆａｍｅｔ基因在大颚器中表达量最高，约为卵巢中表达量的２０–３０倍。．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
徐跑 俞菊华 唐永凯 吴婷婷
P-450芳香化酶(P450arom)是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶。本研究采用RT-PCR和RACE(Rapid Ampli-fication of cDNA Ends)法,分离和克隆了黄颡鱼(Pelteobasrus fulvidraco)卵巢P450芳香化酶基因HP450arom A,并使用荧光实时定量RT-PCR对其组织表达进行了分析。结果表明,HP450arom A cDNA全长1 914 bp[不包括poly(A)],5′端非翻译区有13 bp,3′端362 bp[不包含poly(A)],阅读框(Open Reading Frame,ORF)1 539 bp,翻译成513个氨基...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
罗明坤 赵金良 Thammaratsuntorn Jeerawat 李传阳 魏继海 赵永华
通过组织切片、酶联免疫吸附及荧光定量PCR等方法,研究了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)卵巢发育过程中性类固醇激素(雌二醇E2、孕酮P)、卵黄蛋白原(Vtg)含量及Vtg mRNA相对表达水平变化规律。结果表明,尼罗罗非鱼性腺指数(GSI)与卵巢成熟发育间呈同步性变化,Ⅴ期达到峰值。血清中E2含量自卵巢Ⅱ期开始显著升高,Ⅳ期达到峰值,Ⅴ期后显著下降;血清P含量自卵巢Ⅱ期开始不断升高,Ⅴ期达到峰值,Ⅵ期显著下降;E2、P分别在卵巢成熟发育前期与后期发挥作用。肝中Vtg含量先升、后降,Ⅳ期达峰值;血清、卵巢中Vtg含量均自Ⅱ期开始增加,Ⅴ期达峰值,Ⅵ期显著降低;不同组织中V...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
马骊 葛倩倩 许杨 彭素晓 李健
为深入了解脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)卵巢发育和卵黄蛋白原发生的分子机制,本研究克隆得到脊尾白虾翻译控制肿瘤蛋白基因TCTP,并结合自噬调控基因TCTP、Hif-1α、Beclin1和Bcl-2在卵巢发育期的表达水平,阐释脊尾白虾卵黄蛋白原合成过程中的分子调控特征。研究显示,脊尾白虾TCTP基因c DNA全长为732 bp,编码168个氨基酸,具有典型的TCTP1和TCTP2功能域以及PKC和TKⅡ等mTOR信号通路相关的磷酸化位点。同时发现,甲壳动物TCTP普遍缺乏在其他动植物中高度保守的C末端的cys残基。进化分析显示,脊尾白虾TCTP与中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)亲缘关系最近。4种自噬调控基因在脊尾白虾卵巢发育期的表达结果显示,肝胰腺TCTP基因从增殖期到产后恢复期呈递减趋势;肝胰腺Hif-1α、Beclin1和Bcl-2基因表达趋势相似,即从增殖期到小生长期高表达,大生长期极显著下降,表达量最低(P
[期刊] 水产学报
[作者]
王莉 孙伟 储经乾 刘颖 史思瑞 葛楚天 钱国英
SOX9基因在脊椎动物性别决定和性腺分化中扮演重要的调控作用。从mRNA和蛋白水平分析中华鳖SOX9基因在不同组织中的差异性表达、在胚胎性腺和成年睾丸中的细胞定位以及在性逆转中的表达变化,研究SOX9基因在中华鳖性别分化中的调控作用。Real-time PCR结果显示,SOX9基因在中华鳖雄性性腺中特异性表达。免疫荧光染色分析显示,SOX9蛋白在雄性18期胚胎性腺中开始表达,随着性腺的发育,SOX9蛋白定位于性腺Sertoli前体细胞细胞核中;而在雌性胚胎性腺并未见其表达。此外,在雌激素诱导的雄性向雌性性逆转胚胎中,SOX9基因显著下调,而在芳香化酶抑制剂诱导的雌性向雄性性逆转胚胎中,SOX9...
关键词：
中华鳖 SOX9基因 性别分化 性逆转
[期刊] 中国水产科学
[作者]
梁少帅 于潇含 杨丹丹 秦贞奎
SOX9是SOX家族的SOXE亚族成员,在脊椎动物骨骼发育、胰腺发育、性别决定与分化以及肿瘤形成中发挥重要的作用。sox9在不同种类脊椎动物性腺中的表达存在差异,在无脊椎动物性腺中的表达特征尚不清楚。本研究利用RACE技术克隆了栉孔扇贝(Chlamys farreri)sox9(Cf-sox9)全长的c DNA序列,其长度为2835 bp,开放阅读框为1413 bp,编码470个氨基酸。预测的氨基酸序列具有SOX家族的HMG-box和SOXE亚族的高保守区域,但没有脊椎动物羧基端的Pro-Gln-Ser
关键词：
栉孔扇贝 sox9 性腺 配子发生
[期刊] 水产学报
[作者]
张丽晗 罗智 有文静 李丹丹 徐异桓 潘亚雄
采用RT-PCR和RACE技术获取了黄颡鱼Wnt/β-catenin信号通路5个重要基因wnt2、wnt2bb、wnt3a、wnt8a和ctnnb1的全长cDNA序列,分别为1 743、2 133、1 379、1 508和2 636 bp,其中ORF长度分别为1 052、1 115、872、1 160和2 372 bp,分别编码351、372、291、387和791个氨基酸。氨基酸序列比对和系统发育树分析显示,上述基因十分保守,黄颡鱼与墨西哥丽脂鲤亲缘关系最近。组织表达分析显示,上述基因的mRNA在脑、脾脏、肾脏、鳃、心脏、肌肉、肠系膜脂肪、肝脏及卵巢等组织中都有表达,但表达水平不尽相同。这些基因在黄颡鱼卵巢中的表达水平对铜暴露的响应结果显示,在暴露28 d时,wnt3a mRNA水平随着铜浓度的增加而降低,而wnt8a趋势则相反,wnt2、wnt2bb和ctnnb1基因表达各个处理组间无显著性差异;在56 d时,wnt2、wnt2bb、wnt3a、wnt8a和ctnnb1基因表达各个处理组间均无显著差异。研究表明,Wnt/β-catenin信号通路基因的功能发生了分化,部分成员可能介导了铜影响黄颡鱼卵巢发育的调控。
[期刊] 水产学报
[作者]
陆洋 吴旭干 柳梅梅 巩杰 成永旭
实验通过活体注射、养殖实验和荧光定量PCR等方法,研究了不同浓度TAM对三疣梭子蟹雌体成活率、卵巢指数、肝胰腺指数及卵巢发育相关基因表达的影响,旨在探讨雌激素对甲壳动物卵巢发育的作用机制。结果显示,不同浓度TAM对雌体存活率和肝胰腺指数均无显著影响,但在一定程度上抑制了卵巢指数。不同组织中的卵黄蛋白原(Vg)、雌激素相关受体(ERR)、维甲酸受体(RXR)和蜕皮激素受体(EcR)基因表达均受到了TAM的影响:Vg基因在卵巢和肝胰腺中的表达水平明显受到TAM的抑制;低浓度TAM组(6.7和13.4μg/g)
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
柳学周 臧坤 徐永江 李春广 史宝 王妍妍
利用cDNA末端快速克隆(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)方法获得了漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)促黄体素(Luteinizing Hormone,LH)β亚基的cDNA全长序列,检测了LHβ亚基mRNA的组织表达水平,揭示了垂体、肝脏和卵巢中LHβ亚基mRNA在卵巢发育周期中的表达水平变化,利用酶联免疫技术(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)测定了血浆LH和雌二醇(Estrodiol,E2)表达水平的变化。结果表明,漠斑牙鲆为卵巢非同步发育分批产卵性鱼类,LHβ亚基cDN...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
卜宗元 傅洪拓 孙盛明 乔慧 金舒博 张文宜 龚永生 蒋速飞 熊贻伟 吴滟
本研究应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponensis)Ran(Ras related nuclear protein,Ras相关核蛋白)基因全长cDNA序列,该基因cDNA全长1191 bp,包括218 bp的5'UTR,648 bp的开放阅读框(ORF),405 bp的3'UTR,编码215个氨基酸。青虾Ran基因属于P-loop-NTPase超级家族,拥有PTZ00132跨结构域,多肽分子量约为24.57 kDa,理论等电点7.13。系统进化树分析表明,在动物界进化中非
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王璐 刘红改 于得水 李晶 刘慧 赵慧英
【目的】探讨Ｇ蛋白耦联雌激素受体（Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｅｓｔｒｏＧｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｇｐｅｒ）激动剂对卵巢表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｅＧｆｒ）表达的影响，为阐明Ｇｐｅｒ和ｅＧｆｒ在卵巢功能维持中的作用奠定基础。【方法】取间情期小鼠，将其分为４０，２００，１ ０００ｎＧ／只Ｇ－１腹腔注射组和对照组（腹腔注射等体积生理盐水），每组２０只，各组小鼠进行相应的处理。注射Ｇ－１后，依次取发情前期、发情期、发情后期和间情期小鼠各５只，脱颈处死，迅速取出卵巢，采用免疫组织化学ｓｐ法和实时定量ｒｔ－ｐｃｒ法，研究不同剂量Ｇｐｅｒ激．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
李营营 张昊堃 贾皓帆 郭婧瑶 杨喜喜 王志亮 李明娜 王欣荣
旨在初探BMF基因在小尾寒羊卵泡发育过程中的生物学功能，为将来深入探索其调控机理提供理论依据。对小尾寒羊实施同期发情，采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot, WB)及免疫荧光染色(IF)方法检测BMF基因及其编码蛋白在不同生理阶段卵巢中的表达量；随后分离不同直径的卵泡，分析目的基因在大、中、小卵泡中的表达差异。结果显示，BMF mRNA在撤栓后42 h卵巢中的表达量显著高于撤栓后18 h(P<0.05),其编码蛋白表达结果与mRNA基本一致；BMF蛋白主要表达于卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞中；进一步分离卵泡，发现BMF基因及其编码蛋白表达量均在中卵泡中显著高于大卵泡和小卵泡(P<0.05)。以上结果表明，BMF基因可能参与卵巢周期性活动，在卵泡发育过程中发挥重要作用。
关键词：
小尾寒羊 BMF 卵泡 卵巢 繁殖
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张敏智 邓思平 朱春华 李广丽
应用比色法、放射免疫测定法(RIA)、连续组织切片及荧光定量RT-PCR技术,检测了不同温度(23℃、26℃、29℃)处理6周对2龄金钱鱼卵巢发育过程中血清中蛋白磷(SPP)、蛋白钙(SPC)、性类固醇激素(雌二醇E2,睾酮T)及肝和卵巢中卵黄蛋白原mRNA(vtg mRNA)表达的影响。结果显示,实验结束(6周)时,23℃和26℃组卵巢中出现Ⅲ时相卵母细胞,29℃组仅出现Ⅱ时相卵母细胞。除肝体指数(HSI)随处理时间延长而减小外,其他检测指标随时间延长而增加。实验中温度对血清中T水平无显著影响;3周时,23℃和26℃组性腺成熟指数(GSI)及血清中E2水平略高于29℃组,但差异不显著(P>0...
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