- 年份
- 2024(6013)
- 2023(8155)
- 2022(6627)
- 2021(6181)
- 2020(5086)
- 2019(10883)
- 2018(10935)
- 2017(19303)
- 2016(10785)
- 2015(12178)
- 2014(11944)
- 2013(11234)
- 2012(10412)
- 2011(9354)
- 2010(9690)
- 2009(8886)
- 2008(8877)
- 2007(8289)
- 2006(7337)
- 2005(6481)
- 学科
- 济(36184)
- 经济(36140)
- 管理(35321)
- 业(33005)
- 企(28625)
- 企业(28625)
- 技术(17664)
- 方法(13294)
- 中国(11490)
- 学(11327)
- 技术管理(11262)
- 农(10871)
- 数学(10666)
- 数学方法(10373)
- 制(9787)
- 业经(9271)
- 理论(9125)
- 财(9103)
- 体(7899)
- 银(7761)
- 银行(7719)
- 行(7470)
- 融(7295)
- 金融(7287)
- 地方(7186)
- 农业(7044)
- 教育(6315)
- 贸(6128)
- 贸易(6125)
- 教学(6003)
- 机构
- 学院(154850)
- 大学(154038)
- 研究(57114)
- 济(55847)
- 管理(54760)
- 经济(54412)
- 理学(46477)
- 理学院(45885)
- 管理学(44763)
- 管理学院(44472)
- 中国(41220)
- 科学(38064)
- 京(33792)
- 农(31323)
- 所(30413)
- 研究所(27947)
- 业大(26282)
- 财(26045)
- 江(25620)
- 中心(25261)
- 农业(24867)
- 技术(22262)
- 范(21575)
- 师范(21202)
- 院(21195)
- 北京(21108)
- 州(20055)
- 财经(19995)
- 省(19081)
- 经(18125)
- 基金
- 项目(105753)
- 科学(81992)
- 研究(75456)
- 基金(73770)
- 家(67187)
- 国家(66644)
- 科学基金(55357)
- 社会(45419)
- 省(43850)
- 社会科(42968)
- 社会科学(42952)
- 基金项目(38313)
- 划(36849)
- 自然(36331)
- 自然科(35549)
- 自然科学(35529)
- 教育(35333)
- 自然科学基金(34889)
- 编号(29673)
- 资助(29412)
- 创(25217)
- 成果(24908)
- 重点(24665)
- 创新(23888)
- 发(23127)
- 课题(22782)
- 部(22114)
- 计划(21297)
- 科研(19882)
- 科技(19688)
共检索到238928条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张明科 张鲁刚 巩振辉 惠麦侠
【目的】对限制性位点扩增多态性(Restriction site amplified polymorphism,RSAP)标记技术进行改进,并优化了其反应体系。【方法】遵循引物设计原则,使限制性位点序列位于中间,在其3′端增加3个选择性碱基,5′端设计为10~12个碱基的随机序列,设计了14条长为19 bp的限制性位点扩增多态性(RSAP)新引物。以大白菜、紫菜薹自交系及其F1、F2的DNA为模板,对新引物的反应体系进行了优化,并对其重复性和适用性进行了检验。【结果】新设计引物PCR扩增的前5个循环退火温度为35℃,后35个循环为52℃;在25μL优化反应体系中,模板DNA用量为2.0μL(2...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
顾丰
本文综述了近几年来引物原位标记技术的发展和应用，并以检测猪染色体端位序列为例，介绍了这项技术的基本原理和实验程序。现已表明，引物原位标记技术不仅可以应用于检测染色体（包括多线染色体）特定的ＤＮＡ序列，而且可以应用于在细胞和组织切片上检测特定的ＲＮＡ序列。
关键词：
引物原位标记技术 端位着丝点 染色体 猪
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏辉 李志刚 宋书宏
以大豆(Glycine maxL.)为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对大豆SSR扩增结果的影响,并确定影响SSR扩增结果的各因素的最佳用量。以CTAB法提取的大豆叶片DNA为模板,应用L16(44)正交设计对影响大豆SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适合大豆SSR-PCR反应的最佳体系。结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响。大豆SSR-PCR优化反应体系为:2.0μL10×PCRBuffer,30 ng模板DNA,150μmol/LdNTP,0.4μmol/LSSR引物,1.5 UTaqDNA聚合酶,2.0 mmol/L Mg2+,加ddH2O至终体积20.0μL...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李炎林 熊兴耀 于晓英 陈海霞 李艳香 李达
分别采用单因子试验和正交设计试验对影响红花檵木RSAP-PCR反应体系的5个因素(DNA模板量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶量)在4个水平上进行优化.结果表明,2种方法得到的影响因素的最优水平存在差异,通过综合比较与分析,选取红花檵木RSAP-PCR最优反应体系为:在25μL的反应体系中,模板量70ng,Mg2+浓度1.50mmol/L,dNTPs浓度0.25mmol/L,引物浓度0.20mmol/L,Taq酶量2.50U.
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李培 阙青敏 王芳 李俊成 朱芹 廖柏勇 陈晓阳
[目的]优化相关序列扩增多态性(SRAP)体系内的不同组分,建立适用于红椿SRAP分子标记的反应体系,并进一步从SRAP引物组合中筛选出稳定、多态性好的引物组合,为红椿遗传多样性研究奠定试验基础。[方法]针对SRAP-PCR反应体系中5个因素各设置8个水平,先利用单因素试验确定浓度梯度,后在确定的梯度范围内选定4个水平,按照正交试验L16(45)进行优化,结合正交直观分析法和新复极差法对各因素进行优化筛选。[结果]确定最优体系为总体系25μL,模板DNA 25 ng,上下游引物各0.3μmol·L(-1)
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杜晓华 王得元 巩振辉
为了避开基于限制性酶切位点分子标记技术的DNA酶切环节,简化其复杂的程序,试验以辣椒为材料,建立了一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性(RSAP),并对其反应体系进行了优化,对RSAP适用性、重复性进行了检验。结果显示,RSAP技术的引物为2条长度均为18 bp的引物,引物的3′端为4~6个碱基的限制性酶切位点序列,接着是12~14个碱基的随机序列,2条引物的限制性位点和随机序列不同;PCR扩增的前5个循环采用35℃的退火温度,随后的35个循环采用48℃的退火温度;在25μL反应体系中,模板DNA用量为20 ng,M g2+浓度为2.5 mm o l/L,dNTP s浓度为0.2 m...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
胡尚力 徐刚标 梁艳 刘雄盛 肖玉菲 郝博搏
伯乐树为国家一级保护植物,在研究被子植物的系统发育和古地理、古气候等方面具有重要的科学价值。cpDNA-PCR反应是在分子水平上确定伯乐树系统分类的基础。建立了伯乐树cpDNA-PCR反应体系,对影响扩增反应的因素(Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度以及模板DNA浓度)进行了优化,得到了伯乐树cpDNA-PCR扩增反应的最佳体系,并筛选出了适合伯乐树分子谱系地理研究的非编码区序列和引物。伯乐树cpDNA-PCR最佳反应体系为:30μL反应体系含有10×PCR buffer、2.9 mmol Mg2+、120 mmol dNTP、上下游引物各11μmol、DNA模版30 ng以及3个单位的Ta...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
王芳 廖柏勇 李培 刘明骞 李俊成 吴琳瑛 林玮 陈晓阳
［目的］借鉴以往楝属文献报道的ＳＳＲ引物，筛选高度多态性、稳定性高、重复性好的苦楝ＳＳＲ引物，为苦楝遗传图谱构建、ＱＴＬ定位和分子标记辅助选择育种等研究领域应用奠定基础。［方法］本研究采用单因素法和正交试验设计进行ＳＳＲ－ＰＣＲ反应体系优化，并利用该体系以８个不同种源的苦楝基因组ＤＮＡ为模板，从１３５对候选ＳＳＲ引物中进行引物筛选。［结果］苦楝ＳＳＲ－ＰＣＲ最优反应体系为：１．０μＬ ５０ Ｎｇ·μＬ～（－１）模板ＤＮＡ，１．２μＬ １００μｍｏＬ·Ｌ～（－１）引物，１．０μＬ １０ ｍｍｏＬ·Ｌ～（－１）Ｄ ＮＴＰＳ，０．８μＬ ２５ ｍｍｏＬ·Ｌ～（－１）ｍｇ～（２＋），０．１５μＬ ５ ．．．
关键词：
苦楝 SSR-PCR 体系优化 引物筛选
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
徐刚红 姜子德 沈万宽 罗明珠 饶得花
以甘蔗黑穗病菌(Sporisoriumscitamineum)交配型菌株基因组DNA为模板,在单因素优化试验的基础上,采用L16(45)正交试验设计,对影响甘蔗黑穗病菌SCo TPCRG反应体系的Mg2+、d NTPs、引物、r Taq DNA聚合酶和模板用量5个因素进行优化,建立优化的甘蔗黑穗病菌SCo TPCRG反应体系:DNA模板12.50ng、d NTPs0.17mmol/L、引物0.46μmol/L、Mg2+1.7 mmol/L、r Taq DNA聚合酶0.85U、1×Buffer(Mg2+free),总体积25μL.应用优化体系从30条SCo T引物中筛选扩增条带清晰且多态性丰富的...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
黄芳芳 何长青 闫丽君 汪灵丹 徐刚标
在单因素试验基础上,采用正交试验优化影响观光木SSR-PCR扩增的5种主要影响因素,获得最佳反应体系(10μL)为:Mg2+1.0 mmol,d NTP 0.20 mmol,引物0.25μmol,Taq DNA聚合酶0.75 U,模板DNA 60ng。利用优化SSR-PCR扩增体系,从12对引物中筛选出5对多态性高、重复性好的引物。这为进一步开展观光木种群遗传多样性研究奠定了前期实验基础。
关键词：
观光木 SSR 体系优化 引物筛选
[期刊] 华北农学报
[作者]
张超杰 徐维华 刘万好 唐美玲
以黑珍珠和砂蜜豆为材料,对AFLP分析过程中模板DNA的制备、酶切与连接、酶切连接产物的预扩增与选择性扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳等过程中易出现的问题及其解决方法作了对比研究,建立了一套适合于甜樱桃的AFLP分子标记体系。共筛选了64对引物,其中30对扩增效果理想,能够得到清晰、稳定的条带,平均每对引物扩增条带为60条。该体系的建立为研究甜樱桃遗传多样性和标记农艺性状的技术平台构建奠定了基础。
关键词：
甜樱桃 AFLP
[期刊] 林业科学研究
[作者]
田胜平 汪阳东 陈益存 占志勇 斯林林
通过对山苍子幼嫩叶片、顶芽、花蕾3种组织的DNA提取效果分析和对影响酶切及选择性扩增效果的4个主要因素(酶切时间、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度)的比较研究,建立了适合于山苍子AFLP分析的技术体系。结果表明,山苍子的顶芽是较好的DNA提取材料;山苍子基因组DNA经5 U EcoR I和5 U Mse I酶切1 h即可完全酶切;最佳的选择性扩增体系为20μL反应体系中含有1.0 U rTaq聚合酶、2.0μL 10×PCR缓冲液、1.8μL 25mmol.L-1MgCl2、1.4μL 2.5 mmol.L-1dNTP、100 ng.μL-1引物各1.0μL。使用该反应体系获得了清晰、稳...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
黄树军 黄婷 肖永太 荣俊冬 杨阳 何天友 陈凌艳 郑郁善
采用单因素试验方法,建立了适合大明竹属25个竹种的ISSR-PCR反应体系,优化了各影响因子的用量,筛选出18条有效引物,并确定它们的退火温度,最后对体系进行了检验.优化后大明竹属植物ISSR-PCR的20μL反应体系含2.0μL10×PCR Buffer、2.5 mmol·L-1Mg2+、0.15 mmol·L-1dNTPs、0.5μmol·L-1引物、1.0 U Tap DNA聚合酶、50 ng模板DNA、10.6μL灭菌ddH2O.扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性60 s,55℃复性45 s,72℃延伸90 s,循环40次;72℃延伸7 min,4℃保存.该ISSR-PCR...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
徐刚红 姜子德 沈万宽 罗明珠 饶得花
以甘蔗黑穗病菌(Sporisorium scitamineum)交配型菌株基因组DNA为模板,在单因素优化试验的基础上,采用L16(45)正交试验设计,对影响甘蔗黑穗病菌SCoT-PCR反应体系的Mg2+、dNTPs、引物、r Taq DNA聚合酶和模板用量5个因素进行优化,建立优化的甘蔗黑穗病菌SCoT-PCR反应体系:DNA模板12.50ng、dNTPs 0.17mmol/L、引物0.46μmol/L、Mg2+1.7 mmol/L、r Taq DNA聚合酶0.85U、1×Buffer(Mg2+free),总体积25μL。应用优化体系从30条SCoT引物中筛选扩增条带清晰且多态性丰富的10条...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
何长青 王红霞 付甜 黄芳芳 闫丽君 徐刚标
利用单因素与正交设计试验,对影响观光木cpDNA-PCR扩增的主要因子进行优化,建立了观光木cpDNA-PCR最适反应体系(20μL),为:50 ng模板DNA、1×PCR buffer、0.2μmol·L-1引物、2 mmol·L-1MgCl2、0.3 mmol·L-1dNTP以及1 U Taq DNA聚合酶;筛选出了适合观光木分子谱系地理学研究的非编码区序列引物,为rpl32-trnL、psbJ-petA、3′rps16-5′trnK、atpI-atpH、petL-psbE。
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
