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[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨玛丽 彭宏 陈天子 张保龙 赵统敏 余文贵 赵丽萍
本研究将TYLCV的AC1和AC2基因中的保守序列嵌合并构建反向重复序列的RNAi载体p BI121-AC1-AC2,通过农杆菌介导法转化番茄获得13株再生植株。结果表明,PCR及RT-PCR检测发现有3株转基因番茄成功表达T-DNA插入的外源基因片段。利用侵染性克隆农杆菌注射及烟粉虱传毒两种接种方法对其进行了抗性鉴定,表明2株转基因番茄植株对TYLCV表现抗性,为抗TYLCV育种提供了新的种质资源。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘晶 周树峰 陈华 韩和平 李银心
植物的耐盐性是一个多基因控制的复杂性状,将多个耐盐相关基因导入同一植物更有助于提高植物的耐盐能力。运用农杆菌介导法向转AtNHX1(拟南芥Na+/H+逆向运输蛋白编码基因)的番茄(Lycopersicumesculentum L.Moneymaker’)株系X1OEA1自交二代植株(T2)中转入山菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)。PCR、Southern、RT-PCR和甜菜碱含量分析结果表明,BADH已经整合到番茄基因组中,并在转基因植株中转录和翻译表达。叶绿素荧光(Fv/Fm)、相对电导率(Rc/Rc’)、叶绿素含量(Chla+b)、叶绿素a/b比(Chla/b)、光合速率(Pn)测定结果...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
于力 郭世荣 阎君 朱为民
以番茄‘1479’和‘2300’为材料,研究了苯并噻二唑(BTH)诱导番茄对番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的抗病性,并测定BTH处理对番茄幼苗叶片光合特性和几种防御酶活性的影响。结果表明:0.10～2.00 mmol·L-1BTH均有不同程度的诱抗效果,其中0.50 mmol·L-1BTH处理效果明显,诱导效果可达42.7%。BTH可以提高番茄叶片的净光合速率(Pn)和气孔导度(Gs),能缓解由TYLCV侵染带来的净光合速率和气孔导度下降的趋势。喷施BTH或接种TYLCV均可提高番茄叶片过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性,但喷施BTH诱导并接种TYLCV...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李洪志 刘洁婷 郭冉 金立波 李海燕 李校堃
【目的】应用基因工程技术,获得表达血管内皮生长因子(VEGF)的转基因番茄植株,为以番茄作为生物反应器生产药用蛋白奠定基础。【方法】利用植物偏好的密码子改造合成VEGF基因全长,构建植物表达载体p1390R-VEGF,通过农杆菌菌株EHA105介导将其T-DNA区转入到番茄细胞中,再生后获得转基因番茄植株,对其进行分子和蛋白水平检测。【结果】成功构建了植物整株表达载体p1390R-VEGF,建立了高频的番茄再生培养体系;PCR检测、Southern blot和Western blot检测结果表明,VEGF基因已经转入番茄中,并成功得到了表达。【结论】得到了转基因番茄植株和果实,且VEGF蛋白有...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
乔亚红 田桂英 郑银英 崔百明 李诗林 向本春
【目的】利用农杆菌介导法将抗CMV和ToMV的RNAi表达载体pBi35STC12转入红番3号加工番茄,获得抗CMV和ToMV的加工番茄植株,为加工番茄病毒病的防治奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增,选取新疆加工番茄CMV分离物NS0-4 1a复制酶第1 051-1 350bp序列和ToMV分离物SCS-2 130/180ku复制酶第1 920-2 200bp序列,作为干扰片段CR12和To12。通过T克隆载体将CR12和To12连接成拼接片段TC12,构建成含反向重复结构拼接片段的RNAi表达载体pBi35STC12。通过农杆菌介导法,用其转化红番3号加工番茄,经过筛选、PCR检测得到转...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
关晓溪 许涛 梅伟利 李天来
作为一种重要的植物激素,生长素在植物体内的作用与其生物合成密切相关,并受其信号转导中的转录因子调控。ARF是一类关键的生长素响应因子,近年来其分子机理的研究逐渐成为热点,其在植物各组织器官和多种生理活动中的功能探究取得了很大进展。利用Gateway克隆技术构建了ARF14的RNAi载体,并通过测序和酶切方法均验证了其正确性。在已建立的中蔬6号番茄高效再生体系的基础上,根据实际情况稍加改进,利用农杆菌介导的遗传转化法将目的载体导入植株,获得了一部分阳性转化植株,转化率均高于30%。组织特异性表达分析结果表明:Sl ARF14基因在大部分组织器官中均有表达,尤其是雌蕊、花蕾、叶片以及膨大期的果实。...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
欧阳波 李汉霞 张俊 叶志彪
通过根癌农杆菌介导转化番茄 (LycopersiconesculentumMill.)下胚轴 ,将外源双价基因导入番茄 ,获得了一批卡那霉素抗性苗 ,经PCR检测证明外源基因已经整合到番茄基因组中。研究表明番茄下胚轴是良好的遗传转化受体 ,具有操作简便 ,节省番茄材料和再生速度快的特点。烟草细胞看护培养能够提高外植体的转化效率和减少农杆菌对外植体的污染
关键词：
番茄 下胚轴 转化再生
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
罗云波 郝四平 生吉萍
反义 ACC合成酶 (ACS)基因番茄的采后生理性状与普通番茄不同 ,该番茄的果实和叶片乙烯以及果实呼吸强度受到抑制 ,果实乙烯释放量为 0 ,没有出现呼吸高峰 ,呼吸强度在 10～ 14 mg.kg-1.h-1之间波动 ,极显著低于对照 (高峰时为 2 4 .55mg.kg-1.h-1)。反义番茄的叶绿素降解和番茄红素的合成亦受阻 ,果实在采后和贮藏期间逐渐变为黄色或桔黄色而番茄红素的合成很少 ,到采后 30 d仅有 0 .0 4 A.g-1(fw)。乙烯催熟采后 30 d的反义番茄 ,番茄红素增加 6 0倍。反义番茄 PG酶活性在采后缓慢上升 ,到采收后的第 4 5天达到最高为 4 5.1...
关键词：
转基因番茄 ACC合成酶 PG 成熟
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
裴延飞 刘廷利 连梓伊 杨郁文 陈天子 王金彦 张保龙 柳李旺*
[目的]研究TETRASPANIN3基因在抗番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)病中的作用及对番茄生长发育的影响。[方法]通过软件MEG5.0构建进化树,分析TETRASPANIN3基因的进化;采用荧光定量PCR检测TETRASPANIN3在番茄各个器官中的表达量及对TYLCV诱导的响应;通过病毒诱导的基因沉默技术(VIGS),将番茄中的TETRASPANIN3沉默,测定基因沉默后番茄的抗病性并观测沉默植株表型。[结果]番茄的TETRASPANIN3基因与葡萄VITIS VINIFERA基因在一个独立的进化分支上;TETRASPANIN3基因在各器官中均有表达,在茎、老叶、花中表达量较高,在根、果实...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
裴延飞 刘廷利 连梓伊 杨郁文 陈天子 王金彦 张保龙 柳李旺
［目的］本文旨在研究ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ３基因在抗番茄黄化曲叶病毒（ｔＹＬＣＶ）病中的作用及对番茄生长发育的影响。［方法］通过ＭｅＧ ５．０软件构建进化树，分析ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ３基因的进化；采用实时荧光定量ｐＣｒ（ｒｔ－ｑ ｐＣｒ）检测ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ３在番茄各个器官中的表达量及对ｔＹＬＣＶ诱导的响应；通过病毒诱导基因沉默技术（ＶｉＧｓ）将番茄中的ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ３沉默，测定基因沉默后番茄的抗病性并观测沉默植株表型。［结果］构建的进化树显示：番茄的ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ３基因与葡萄同源基因在一个独立的进化分支上。ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ３基因在各器官中均有表达，在茎、老叶、花．．．
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
申琳 生吉萍 罗云波
本文结合反义ACC基因向番茄中的导入，就番茄外源基因转化系统建立中的几个问题做了研究。结果表明，转基因番茄的组织培养比普通番茄更复杂和困难，需要对其培养基的激素配比做系统研究，以选择更适合的培养基；抗生素的使用要掌握好剂量，在番茄的子叶上以50mg／L为宜；叶盘法转化番茄子叶时采用的菌液浓度及处理时间对转化也有很大的影响，以农杆菌过夜培养液用MS液体培养基稀释10倍、浸泡时间为5min为宜；转基因植株的鉴定可以从分子杂交及性状检测多方面进行，以保证鉴定结果的准确性。
关键词：
番茄 外源基因 转化 激素 抗生素
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈国菊 赵爽 雷建军 曹必好 曾国平
以中国商陆(Phytolacca acinosa)叶片为材料,经PCR从基因组扩增克隆缺失无毒型抗病毒蛋白基因。采用叶盘法转化番茄,对转基因植株T1代摩擦接种TMV,50 d后统计发病情况。结果表明:克隆得到缺失无毒型PAP基因PacPAP,大小为714 bp,与美洲商陆抗病毒蛋白基因的同源性为99.7%,GenBank登陆号为AY603353;得到PacPAP整合入番茄基因组中的阳性植株11株,检测的4个转基因番茄株系均达到抗病级别,对照为感病。
[期刊] 华北农学报
[作者]
袁亮 胡俊 高润蕾 苏高升
为了筛选出对番茄溃疡病菌有拮抗作用的内生细菌,从健康番茄茎样本中分离得到186株内生细菌。用抑菌圈法测定,其中9株内生细菌对番茄溃疡病菌有拮抗作用。通过形态特征观察、生理生化特性测定和16 S rDNA序列分析,对拮抗作用较强的7个菌株进行了鉴定。结果表明,BM-31、BT-10、BT-9、BT-7、BT-3为微杆菌(Microbacteriumspp.),QB-22和QB-8为假单胞菌(Pseudomonasspp.)。
关键词：
番茄 内生细菌 溃疡病菌 拮抗作用
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘琳琳 田荣荣 郭萧 廖雄 王爽 姚丽萍 赵迪 王彦涛 李天红
以Ｍｉｃｒｏ－ＴｏＭ番茄（ＳｏｌａｎｕＭ ｌｙｃｏｐｅｒＳｉｃｕＭ ｌ）为材料，构建ＳｌＭｙＢ１２ ｒｎａｉ载体，利用农杆菌介导法导入番茄；对转基因植株评价发现，ＳｌＭｙＢ１２基因被干扰后植株出现了植株矮化、果实变小、种子数减少和转色期提前等变化；实时荧光定量ｐｃｒ检测表明干扰植株果实中类黄酮路径相关基因ＳｌｃＨＳ、ＳｌＦ３Ｈ、ＳｌＦ３’Ｈ表达量下降，ＳｌｃＨｉ基因表达量上升。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李亚茹 王银磊 赵丽萍 杨玛丽 姜静 赵统敏 余文贵
对抗病基因进行抗性评价是番茄抗病育种的重要环节。选用６种抗病番茄材料和２种感病番茄材料，利用携带番茄黄化曲叶病毒（ＴｏｍａＴｏ ｙｅｌｌｏｗ ｌｅａｆ ｃｕｒｌ ｖｉｒｕｓ，Ｔｙｌｃｖ）的烟粉虱对所选番茄材料幼苗接种病毒，统计分析各材料的病情指数、病株率和带毒率，鉴定不同基因型番茄材料的抗性水平。结果表明，所有接种材料中均可以检测到携带Ｔｙｌｃｖ，其中含有Ｔｙ－２和Ｔｙ－５基因的番茄材料对江苏地区Ｔｙｌｃｖ病毒种类抗性较好，Ｔｙ－３次之，Ｔｙ－１抗性相对较弱，Ｔｙ－３ａ在樱桃番茄中抗性强于大果型番茄。本试验为抗病育种过程中对抗病基因的选择提供了一定的参考依据。
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