- 年份
- 2024(2744)
- 2023(4194)
- 2022(3705)
- 2021(3474)
- 2020(2985)
- 2019(6648)
- 2018(6745)
- 2017(11948)
- 2016(7181)
- 2015(8259)
- 2014(8211)
- 2013(7914)
- 2012(7798)
- 2011(7063)
- 2010(7321)
- 2009(6793)
- 2008(7246)
- 2007(6788)
- 2006(6105)
- 2005(5376)
- 学科
- 济(26086)
- 经济(26044)
- 管理(20031)
- 业(17320)
- 企(14767)
- 企业(14767)
- 方法(12261)
- 数学(10101)
- 数学方法(9868)
- 学(9505)
- 财(7130)
- 农(7116)
- 中国(6993)
- 理论(5777)
- 制(5602)
- 业经(5596)
- 银(4652)
- 银行(4622)
- 务(4504)
- 财务(4492)
- 财务管理(4476)
- 和(4468)
- 地方(4465)
- 融(4464)
- 金融(4462)
- 农业(4450)
- 行(4395)
- 环境(4319)
- 贸(4281)
- 贸易(4277)
- 机构
- 大学(108737)
- 学院(107441)
- 研究(39995)
- 济(36326)
- 经济(35423)
- 管理(35263)
- 理学(30071)
- 理学院(29611)
- 科学(29028)
- 中国(28832)
- 管理学(28718)
- 管理学院(28553)
- 农(25814)
- 京(23818)
- 所(22476)
- 农业(20970)
- 研究所(20808)
- 业大(19960)
- 中心(18056)
- 财(17971)
- 江(17677)
- 范(15710)
- 师范(15431)
- 北京(14562)
- 技术(14201)
- 财经(14129)
- 州(13966)
- 院(13880)
- 省(13593)
- 农业大学(13564)
- 基金
- 项目(71417)
- 科学(55093)
- 基金(51001)
- 研究(47785)
- 家(46528)
- 国家(46158)
- 科学基金(37978)
- 省(29502)
- 社会(28241)
- 基金项目(26863)
- 社会科(26613)
- 社会科学(26599)
- 自然(26403)
- 自然科(25824)
- 自然科学(25812)
- 自然科学基金(25356)
- 划(25205)
- 教育(22859)
- 资助(20826)
- 编号(18920)
- 重点(16947)
- 成果(16791)
- 计划(15549)
- 部(15008)
- 发(14853)
- 创(14723)
- 科研(14177)
- 课题(14093)
- 创新(13883)
- 科技(13794)
共检索到162907条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
王瑶 蒋霞云 邹曙明
鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的PiggyBac(PB)转座子已用于模式生物小鼠的转基因及插入诱变研究,目前,该转座子在养殖鱼类中的转基因效率如何还不清楚。构建了带PiggyBac转座子左臂、右臂、EF1α启动子和绿色荧光蛋白(eGFP)编码框的pPBs-EF1α-eGFP供体质粒。以50 ng/μL供体质粒和100 ng/μL体外转录的PB转座酶mRNA共同显微注射入团头鲂(Megalobrama amblycephala)1~2细胞期受精卵中,团头鲂eGFP的荧光表达率可达58.26%,PCR检测结果显示,该转座系统在团头鲂成鱼基因组中的整合效率为53.04%。表明P...
关键词：
PiggyBac转座子 团头鲂 转基因
[期刊] 中国农业科学
[作者]
白丁平 方堃 杨明明 屈雷 陈玉林
【目的】构建piggyBac(PB)转座子表达载体系统,研究PB转座子在绒山羊基因组中的整合位点。【方法】构建pB-CMV-EGFP-Neo转座载体和pcDNA-Trans辅助载体,利用lipofectamine 2000介导共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得稳定转染的转基因细胞系。提取转基因细胞基因组DNA,利用反向PCR检测piggyBac转座子整合位点。【结果】构建了转座系统并成功介导外源基因在绒山羊成纤维细胞染色体中整合,获得了转基因细胞系;反向PCR检测显示在绒山羊基因组中有21个PB转座子整合位点;整合位点TTAA毗邻一侧的5个碱基组成中,PB转座子3′倾向于插入到富含...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张婷婷 辛颖 张志强 任充华 杨涵江 王令 张智英
【目的】构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通过overlap PCR扩增获得Tet-CMV-SV40 T-T2A-p 53-PolyA基因表达盒,将其插入PB-NIT中,构建载体PB-NIT-STP;最后将转录因子激活域rtTA通过同尾酶连接插入PB-NIT-STP,构建载体PB-rtTA-NIT-STP。【结果】经酶切和测序等鉴定,以上载体均正确;经转座活性鉴定,共转染转座子...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
闫学春 钟莎莎 徐鹏 邹曙明 孙效文
卵泡抑素(follistatin,Fst)蛋白具有拮抗TGF-β超家族许多成员的功能,通过直接的蛋白结合可抑制肌肉抑制素(myostatin)的活性,从而恢复肌肉的生长,表现出增肌效应。参照鲤高通量转录组测序数据的拼接结果,筛选出鲤卵泡抑素Fst1基因的编码框(ORF)序列(全长1 260 bp,编码320个氨基酸),构建了包含金鱼Tgf2转座子左臂(220 bp)、右臂(185 bp)、斑马鱼Mylz2启动子和鲤Fst1基因ORF的供体质粒pTgf2-Mylz2-ccfst1。通过显微注射方法,并在体外合成的Tgf2转座酶5'加帽mRNA的介导下,获得了一批转鲤Fst1基因的转基因鲤。经PC...
关键词：
Tgf2转座子 Fst1 鲤 转基因效率
[期刊] 水产学报
[作者]
胡莹莹 郭学双 周阳 曹广力 贡成良 薛仁宇
为了探讨piggyBac转座子在鲤科鱼类及鳅科鱼类转基因中的适用性,实验通过将PAβ启动子控制的DsRed表达元件插入pigA3GFP中,构建转基因载体pigA3GFP-AβDsRed。用该载体对草鱼肾脏(CIK)细胞转染,结果显示,通过piggyBac转座子可将外源基因导入到CIK细胞的基因组中,来源于家蚕的A3启动子和来源于巨细胞病毒的CMV启动子在CIK细胞均具有活性。将转基因载体pigA3GFP、pigA3GFP-AβDsRed分别与辅助质粒helper-pigA3混合后以精子介导法导入金鱼和泥鳅的受精卵后,经荧光观察、PCR鉴定、Dot blotting鉴定,证实获得了转基因金鱼和转...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
邹雪 刘起 周佳佳 吴天宇 刘露莎 高泽霞
为探究myomaker基因在团头鲂（Megalobrama amblycephala）肌纤维发育中的调控作用，通过RTPCR鉴定其cDNA序列，采用石蜡切片和HE染色分析不同日龄团头鲂肌纤维发育特征，并采用实时荧光定量PCR技术探讨myomaker基因在团头鲂不同发育阶段及不同组织部位的时空表达模式。结果表明：团头鲂myomaker基因全长4 693 bp，包含5个外显子和4个内含子，开放阅读框为663 bp，共编码220个氨基酸，其编码蛋白为7次跨膜蛋白。氨基酸相似度比对显示myomaker基因保守性较高；系统进化树分析显示团头鲂myomaker基因与鲤鱼等鲤科鱼的myomaker基因聚为一支，具有最近的亲缘关系。石蜡切片结果显示团头鲂肌纤维直径在20 d到60 d持续递增，其中在40 d、50 d和60 d均显著递增（P<0.05），且在40 d到50 d时其肌纤维直径递增最快。不同发育阶段肌肉组织荧光定量结果显示myomaker在团头鲂出膜后15 d到30 d表达量逐渐上升，在30 d表达量最高（P<0.05），结合形态学数据，推测myomaker基因在团头鲂30 d后肌纤维的融合中发挥重要作用，从而促进肌纤维的肥大。1月龄团头鲂不同组织的myomaker荧光定量结果显示其在肌肉组织中表达量极其显著高于其它组织（P<0.0001）。这些结果表明，myomaker基因在团头鲂肌纤维肥大过程中发挥重要的调控作用。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孙成飞 董浚键 田园园 余嘉欣 叶星
巨核酸酶I-SceI是由酿酒酵母线粒体中核糖体大亚基上的Ⅰ型内含子编码的一种核酸内切酶,近年已被应用于转基因研究中。I-SceI介导的转基因大多是将I-SceI蛋白和带有其识别位点的质粒共注射于动物的受精卵,但注射酶蛋白前期处理耗时长且工作量大,直接用I-SceI的mR NA代替蛋白进行注射更为简捷。本研究应用I-SceI mR NA介导荧光蛋白基因在斑马鱼中的转植,进一步了解其转基因效率。首先设计合成带有巨核酸酶I-SceI编码序列的辅助质粒(pC S2-I-SceI),并分别构建了带有巨核酸酶I-SceI识别位点、EF1α启动子和荧光蛋白基因(eG FP/RFP)编码序列的供体质粒pI-S...
关键词：
巨核酸酶 I-SceI 斑马鱼 转基因
[期刊] 水产学报
[作者]
陈凯 习丙文 滕涛 秦婷 潘良坤 谢骏
为了解团头鲂糖皮质激素受体(GR)在应激反应中的调控机制,本研究以皮质醇注射模拟应激事件,采集组织样品,常规检测血糖、血清皮质醇水平;利用荧光定量PCR检测了gr在不同组织中的表达丰度及其参与调控的功能基因的表达变化;并通过常规石蜡切片开展了组织病理学研究。结果显示,gr1在脾脏、鳃、头肾等组织中有较高的表达量,gr2则在肝、垂体、肠等组织中具有较高的表达丰度。应激恢复过程中,下丘脑gr1表达量存在波动,gr2在0 h表达显著上调,gr1/gr2值逐渐增大;垂体中gr1和gr2均呈现先升后降的趋势,gr1/gr2值在2 h达到峰值水平;头肾中gr1表达量有波动,而gr2在0 h和2 h的表达量显著低于其他检测点的表达量,gr1/gr2值逐渐减小;肝脏中gr1的表达量在0 h和2 h的表达量显著高于其他检测点,gr2表达有上下波动的现象,gr1/gr2值有减小的趋势,而pepck表达则出现了显著上调,在2 h达到峰值;皮肤中gr1先升高后降低,gr2在0 h和2 h的表达量显著低于其他检测点,gr1/gr2值在2～8 h维持在较大值,而occ表达呈现先增加后降低的变化趋势;鳃中gr1与gr2均在2 h时发生了显著上调,gr1/gr2值在2～8 h维持在较大值,occ表达峰值出现在2 h。组织学研究显示鳃丝有增生现象,肾间组织中类淋巴细胞增多,其他所检视组织无明显病理改变。应激反应过程中gr在不同组织不同亚型间存在不同的表达变化,以及和不同组织器官中相关功能基因的相关性显示了GR在相关调控中的复杂性,而组织学研究结果则表明了应激反应存在诱发病理变化的风险。
[期刊] 水产学报
[作者]
赵连鹏 邵峰 胡竞文 张耀光 彭作刚
为了探讨Tc1/Mariner转座子在4种鲇(沟鲇、黑斑原、鲇和南方鲇)中的特征及在演化过程中的作用,实验使用de novo预测和同源预测两种方法鉴定了4种鲇基因组中的Tc1/Mariner转座子并进行演化分析。通过对所获得序列的统计及分类,结果显示,4种鲇基因组中Tc1/Mariner转座子的含量分别为9.46%、2.70%、7.83%和8.54%,并且分别被分为38、20、43和55个家族。基于转座酶催化区域的结构和系统发育分析的结果,4种鲇的Tc1/Mariner转座子总共可以分为5个不同的亚类群:DD34E(Tc1)、DD35E、DD36E、DD37E和DD35D(pogo)。系统发育分析表明,多数支系中鲇和南方鲇的转座子聚为姐妹群。插入时间分析表明,Tc1/Mariner转座子的插入时间主要分布在0～5百万年前。大多数Tc1/Mariner转座子在0～1百万年前或2～3百万年前有一个突然的扩增。另外,4种鲇的Tc1/Mariner转座子大部分插入到基因的内含子中。本实验通过对4种鲇中Tc1/Mariner转座子的鉴定、比较与演化分析,为Tc1/Mariner转座子的深入研究奠定了基础。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吴文新 曹赞 王凡 徐佳 王卫民 赵玉华
为阐明团头鲂SREBP-1的功能,采用RT-PCR技术克隆获得SREBP-1基因的cDNA序列,利用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SREBP-1基因在不同发育时期及不同组织中的表达情况。生物信息学分析发现,SREBP-1基因cDNA的编码序列(coding sequence,CDS)为3 426bp(GenBank登录号:MH633449),开放阅读框(ORF)编码1 141个氨基酸,与大西洋鲑、斑马鱼、草鱼、鲤、金线鲃SREBP-1的氨基酸序列相似性较高(74%～99%)。保守结构域分析显示,团头鲂SREBP-1蛋白具有SREBPs家族典型的"碱性螺旋-环-螺旋-亮氨酸拉链"(bHLH-Zip)结构域。表达分析结果显示,SREBP-1基因在团头鲂胚胎发育过程中的表达呈现先下降后增高的趋势,在眼囊期最低,至出膜期达到最高。在团头鲂幼鱼中,SREBP-1在脑组织中的表达量最高,其次是眼、肝脏、心脏、肌肉、脂肪组织、肾脏,鳃中表达量最低。在成鱼中,SREBP-1在脑组织表达量最高,其次是性腺组织、肌肉、肝脏、眼,肾脏、脾脏和心脏中的表达量较低。以上结果表明,SREBP-1基因在团头鲂幼鱼和成鱼的不同组织中的表达模式存在差异。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
钟伯雄 危浩 庄兰芳
综述了基于piggyBac转座子的转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白的3个关键环节:(1)外源目的基因高效插入家蚕基因组;(2)转基因家蚕的高效、快捷的检测;(3)具有生物活性的外源目的蛋白的高效表达和纯化。同时介绍了有关转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白的研究进展,为更好地利用转基因家蚕丝腺生物反应器表达外源蛋白提供了参考。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
曲宪成 周正峰 崔严慧 刘颖 胡萍华 金一春 尚婧瑨
首先运用PCR-末端加尾法克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)脑下垂体糖蛋白激素α亚基(Pituitary glycoprotein hormone α subunit,PGPH α)基因5’端侧翼序列;然后利用生物信息学理论对该序列进行了序列分析;最后在序列分析结果的基础上,构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示,克隆所得到的团头鲂PGPH α亚基基因5’端侧翼序列长1399bp;其序列中包含潜在的TATA盒、GC盒,以及ERE、TRE、CRE、PGBE等对PGPH α亚基基因转录调控起重要作用的转录因子结合位点;启动子区域位于-40~10bp处。利用PCR...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王全乐 冀培丰 徐鹏 孙效文
在鲤(Cyprinus carpio)基因组中鉴别出一个新的具有潜在转座活性的Tc1类转座子,并命名为CCTN转座子(Cyprinus carpio Transposon,CCTN)。CCTN转座子全长1 611 bp,由两端约214 bp的反向重复序列(Inverted Repeat,IR)和中间不间断的996 bp的转座酶开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)组成。CCTN转座子推测的转座酶序列中存在完整的DD(34)E结构域,此结构域是Tc1类转座酶作用的必需位点之一。采用实时荧光定量PCR评估CCTN转座子在鲤基因组中的拷贝数约为2.28×103,占全基因组的0.2...
关键词：
Tc1 转座子 鲤 拷贝数 重复序列
[期刊] 水产学报
[作者]
高金伟 习丙文 滕涛 陈凯 秦婷 谢骏
为研究急性应激反应对鱼体铁含量及铁稳态相关基因的影响,以团头鲂为研究对象,通过腹腔注射皮质醇来模拟急性应激,在注射后不同时间点对团头鲂的血液、肠和肝脏进行取样,采用分光光度法测定血清和肝脏中的铁含量,采用实时荧光定量PCR对铁稳态相关基因的表达量进行检测。结果显示,皮质醇注射后血浆皮质醇显著升高,血浆中铁含量在4、8、10和12 h显著高于对照组,而肝脏中的铁含量在4、8、10和12 h时显著低于对照组。团头鲂肝脏中铁调素(hep)基因表达量显著增加,并分别在8和10 h达最大值,随后有所下降。肠道和肝脏
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
朱德杰 吴亚明 陈宇龙 高泽霞
为明确鱼类咽齿发生发育的分子机制，以我国特有的经济鱼类团头鲂（Megalobrama amblycephala）为研究对象，通过团头鲂全基因组序列Blast获得团头鲂分泌型钙结合磷蛋白（secretory calciumbinding phosphoprotein,SCPP）家族基因的cDNA序列，采用实时荧光定量的方法比较分析SCPP家族基因在团头鲂咽齿发生发育关键时期第四、第五鳃弓中的表达情况，以及在1龄团头鲂不同组织中的表达情况，筛选调控咽齿发育的关键调控基因。研究结果显示，团头鲂enam、scpp1、ambn、scpp9、odam、spp1与斑马鱼具有较高同源性，进化树中距离较近；通过比对不同脊椎动物enam与odam这2个基因编码的氨基酸序列，发现在鱼类中均存在2段氨基酸序列的缺失。1龄团头鲂不同组织的SCPP家族基因定量表达结果显示，enam、scpp1、ambn、scpp9和spp1在第五鳃弓（有咽齿）和肋骨里面有很高的表达量，与其他组织中的表达水平大多存在显著性差异（P
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
