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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨慧 杨世湖 王庆 周彤 万建民
将Pib结构基因克隆到双元载体,构建了3个植物表达载体pNAR501、pNAR502和pNAR503,这3个载体分别携带由35S驱动Pib结构基因的外显子2外显子3、5′端部分缺失外显子1和5′端部分缺失的外显子1外显子2外显子3的不同片段。应用农杆菌介导法获得水稻品种日本晴转基因植株30株,经PCR、Southern b lot和后代潮霉素抗性分离检测确定外源基因已整合进水稻基因组。T0代转基因植株分蘖期大苗离体叶片抗稻瘟病鉴定结果表明,含3个不同载体的转基因植株对稻瘟病E1、F1、G1生理小种的抗性都显著高于对照日本晴。T1代3至4叶期幼苗活体接种鉴定结果与T0代离体叶片鉴定结果不同,对E...
关键词:
水稻 稻瘟病 Pib基因
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈志雄 戴双凤 夏昌选 谢海媚 李亚娟
为研究水稻SAND结构域蛋白的序列和功能,利用BlASt在水稻基因组中搜索编码SAND结构域的基因,然后构建增强表达载体并通过遗传转化研究基因功能。结果表明,水稻基因lOC_OS01g57240(命名为OSUlt1)编码的氨基酸序列含有SAND结构域和UltB-BOx共有序列,与其他植物Ult氨基酸序列相似性为49.3%~92.3%,具有较好的保守性;35S::OSUlt1转基因株系部分颖花发育异常,出现内稃发育滞缓或退化、浆片过度发育或数目变多、雄蕊数目3~7枚、雌蕊2枚的现象;颖花内产生多余的小花,表明OSUlt1对水稻花分生组织正常分化具有重要的调控作用。
关键词:
水稻 花发育 SAND结构域 基因 序列
[期刊] 华北农学报
[作者]
王俊 董海冉 常宏 王伟 包冬芳 赵孝岳 赵雪 韩英鹏
UGT是一类糖基转移酶,它对黄酮类化合物进行糖基化修饰,合成异黄酮糖苷,在异黄酮的合成、转运、存储等方面发挥了重要的作用。为了探索UGT功能,通过RT-PCR方法从中豆27中克隆获得GmUGT73基因的CDS全长序列。利用ProtParam tool等在线软件对GmUGT73蛋白序列及理化性质进行分析,预测结果表明,GmUGT73基因的编码区编码464个氨基酸,分子质量为51.186 5 ku,理论等电点(pI)为6.27,总原子数为7 176,分子式为C_(2281)H_(3580)N_(608)O_(685)S_(22)。GmUGT73蛋白总正电和负电残基数分别为37和41,蛋白的不稳定系数为36.93,表明该蛋白较稳定,蛋白的脂溶指数为86.19,GRAVY值为-0.111,说明该蛋白为亲水性蛋白。将线性植物表达载体与目的片段进行连接,成功构建pCambia3300-GmUGT73植物表达载体,通过发根农杆菌介导法转化大豆毛状根并获得转基因阳性根系,利用高效液相色谱(HPLC)对根系进行异黄酮含量测定,结果表明,转基因阳性根中异黄酮含量与对照相比极显著提高(P<0.01),说明该基因可能具有促进合成大豆异黄酮的功能。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张斌 李小慧
为探究氨基酸转运蛋白(AAT)的功能和可能的分子机制,首先,通过建立隐马尔可夫新模型对水稻AAT家族成员进行鉴定,构建系统进化树分析水稻与拟南芥AAT成员之间的进化关系;其次,利用生物信息学手段对水稻多胺转运蛋白基因1(OsPUT1)的启动子、蛋白结构和功能结构域进行了分析;再次,构建了OsPUT1-GFP载体在水稻原生质体中表达以确定其亚细胞定位,利用荧光定量PCR检测OsPUT1基因在不同组织以及不同逆境胁迫下的表达模式;最后,采用水稻OsPUT1基因过表达(OE)、日本晴(Nip)和RNA干扰(RNAi)株系初步研究了基因的功能。结果显示:在水稻中含有96个OsAAT蛋白家族成员,分为13个亚家族;PUT亚家族含有6个OsPUT成员,其中OsPUT1和AtPUT3遗传距离最近且分布在同一个分支;OsPUT1基因启动子中含有涉及生长发育、光调节、植物激素和胁迫响应的顺式作用元件;OsPUT1蛋白含有多胺转运蛋白结构域PotE,亚细胞定位试验表明其位于细胞膜上;在叶片中OsPUT1基因表达量相对较高,在花中表达量相对较低;基因表达受JA、甘露醇和ABA抑制;低温胁迫下,基因表达先下降后恢复正常;在SA、亚精胺和百草枯处理下,基因表达先上升后降低;在氯化钠处理下,基因表达量先上升,在1 h达到最高,之后下降,在12 h达到最低,在24 h恢复到正常水平;OE株系显著降低了对0.2μmol/L百草枯的抗性,而RNAi株系则显著增强了对0.2μmol/L百草枯的抗性。综上说明,OsPUT1蛋白可能具有运输多胺和参与胁迫响应的功能。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
唐贤礼 张月 张盾 夏新莉 尹伟伦
本研究从毛果杨基因组中克隆一个NRT2家族的新基因PT NRT2.7。生物信息学分析显示,其编码的蛋白不存在信号肽及切割位点,属于非分泌蛋白;具有11个跨膜结构域,亲水区与输水区交替分布,主要分布于细胞膜,而且该基因的亚细胞定位分析显示该蛋白定位于细胞膜,综合以上结果可判断此蛋白为膜蛋白。对其在毛果杨的表达特征分析显示,PT NRT2.7基因主要在叶片中表达,其中成熟叶中的表达量最高;PT NRT2.7基因受硝酸盐诱导并在1 h时达到表达峰值;SA、JA、GA或IAA激素处理可诱导PT NRT2.7基因表达,而在ETh、ABA或NA Cl处理下该基因的表达受抑制。利用农杆菌花序侵染法转化野生型...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
张立军 弓雪 汪澈 冀宇奇
酯酶(esterase)是催化酯键水解的一大类酶的总称,广泛存在于动物、植物和微生物中。它种类繁多,功能和所催化的底物多样。酯酶通过催化蛋白质的去磷酸化来调节酶、转运蛋白、转运因子和细胞信号转导通路中的蛋白活性参与生物体内的物质代谢和能量代谢,酯酶还直接催化细胞信号物质的合成和转化。酯酶大多由多基因家族编码,同一家族成员在不同种生物和同一生物不同亚种中存在差异,因此是进化关系分析和品种鉴定的重要靶酶。酯酶自身活性受酶蛋白的磷酸化和糖基化的调节。本研究扼要综述酯酶种类、功能、编码基因、基因进化和功能调节多样性方面的研究进展。
关键词:
酯酶 分类 功能 编码基因 基因进化
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
胡新喜 易自力
以番茄愈伤组织和水稻愈伤组织为转化受体,以pBG和pBI121为外源DNA,以蔗糖和甘露醇为渗透剂,对植物高渗转基因技术进行了研究.结果表明高渗转化后愈伤组织GUS基因瞬间表达率为38.9%,经抗性筛选,获得番茄和水稻Basta抗性愈伤组织,番茄Basta抗性愈伤组织经分化培养后,共得到29个Basta抗性芽,证明植物高渗转基因技术得到初步建立.
关键词:
高渗转化 转基因 番茄 水稻 GUS表达
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
周小龙 符策纠 李冰 丁晓雯 林晋军 刘雄伦 刘釐灵
为了解稻瘟菌无毒基因AvrPii在水稻病原菌相关分子模式诱导的免疫反应(PTI)抗病分子信号调控中的功能,对AvrPii基因编码蛋白的分子结构特性进行分析,构建了AvrPii基因的植物表达载体幵进行遗传转化。结果表明:AvrPii蛋白由70个氨基酸组成,相对分子质量约为7 500,等电点为6.0,总平均亲水性值为–0.159;AvrPii蛋白包含1个信号肽、1个跨膜结构域和2个基序为LxAR和CxxCxxxxxxxxxxxH的保守结构域;利用农杆菌侵染转化法,获得AvrPii基因全长序列和不含信号肽AvrPiinsp的转基因株系13个,PCR扩增和实时荧光定量PCR鉴定结果表明,AvrPii和AvrPiinsp基因已成功转入受体品种日本晴幵得到稳定表达。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王宏鹏 曹高燚 李明 丁博 包曙光 王俊斌 谢晓东 陈小强
为了对大麦气孔发育转录因子基因HvMUTE的功能进行初步鉴定,并对其生物学特性及表达模式进行分析,通过生物信息学分析、PCR扩增及qRT-PCR等方法来对大麦气孔发育转录因子基因HvMUTE进行研究。由于大麦G1614为大麦MOREX品种的姊妹系,且大麦MOREX品种公布了参考基因组数据,所以通过将短穗二柄草BdMUTE基因同大麦G1614基因组进行序列同源比对,得到大麦HvMUTE基因序列。从大麦材料G1614幼芽中的第1片叶片中取样,克隆得到大麦HvMUTE基因651 bp的编码区。生物信息学分析结果表明,HvMUTE蛋白是位于细胞核中的无明显亲水疏水性的不稳定蛋白质,并且其蛋白质三维结构含有螺旋-环-螺旋(HLH)结构。系统进化树分析结果表明,HvMUTE蛋白同小麦和山羊草的MUTE-Like蛋白亲缘关系较近。qRT-PCR结果显示,在干旱条件下,HvMUTE基因表达量无明显变化,这一结果同前人研究有所不同,猜测与大麦为单子叶植物,气孔结构中存在副卫细胞同双子叶植物气孔结构形态不同有关。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
关晓溪 许涛 梅伟利 李天来
作为一种重要的植物激素,生长素在植物体内的作用与其生物合成密切相关,并受其信号转导中的转录因子调控。ARF是一类关键的生长素响应因子,近年来其分子机理的研究逐渐成为热点,其在植物各组织器官和多种生理活动中的功能探究取得了很大进展。利用Gateway克隆技术构建了ARF14的RNAi载体,并通过测序和酶切方法均验证了其正确性。在已建立的中蔬6号番茄高效再生体系的基础上,根据实际情况稍加改进,利用农杆菌介导的遗传转化法将目的载体导入植株,获得了一部分阳性转化植株,转化率均高于30%。组织特异性表达分析结果表明:Sl ARF14基因在大部分组织器官中均有表达,尤其是雌蕊、花蕾、叶片以及膨大期的果实。...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曾强 关钦泽 王思琪 李齐发 杜星
[目的]本文旨在扩增猪CYP11A1基因编码区,鉴定并分析其核心启动子区,探究猪CYP11A1基因的转录调控机制。[方法]通过基因克隆测序技术获得猪CYP11A1基因编码区全序列,并对其序列特征进行分析;利用荧光素酶活性试验鉴定猪CYP11A1基因核心启动子区,并通过生物信息学分析猪CYP11A1基因核心启动子区上潜在的甲基化位点与转录因子结合位点;同时,利用Western blot、qRT-PCR以及染色质免疫沉淀(ChIP)等分子生物学手段解析转录因子NR2C1对猪CYP11A1基因的转录调控功能。[结果]猪CYP11A1基因的编码区序列全长为1 563 bp,在哺乳动物的进化过程中高度保守;猪CYP11A1基因的核心启动子区为-398 bp~-108 bp(转录起始位点为+1),序列特征分析发现猪CYP11A1基因核心启动子区上包含多个潜在的转录因子的结合元件,包括NR2C1、SOX10、NFIX和ELF5等;另外,转录因子NR2C1可促进猪CYP11A1基因核心启动子区活性,同时显著上调体外培养的猪卵巢颗粒细胞中CYP11A1基因的表达。[结论]哺乳动物CYP11A1基因在进化过程中高度保守,NR2C1作为转录因子能够促进猪卵巢颗粒细胞中CYP11A1基因的转录。
[期刊] 华北农学报
[作者]
周宏专 覃湘婕 杨兵 徐福洲 满坤 苏霞 张晓东 刘爵 罗绪刚 王金洛
通过原核表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因不同编码区,以鉴定不同编码区表达产物与TGEV抗体的结合能力。在对TGEV S蛋白抗原位点分析的基础上,针对S蛋白N端的4个抗原位点C、B、D和A,设计引物分别扩增含C、B位点的TCB片段(411 bp)、含D位点的TD片段(441 bp)和含A位点的TA片段(456 bp),经克隆测序后分别插入原核表达载体p ET-32a中进行表达,SDS-PAGE电泳显示各片段均高效表达,表达的TCB片段、TD片段和TA片段融合蛋白大小分别为34.6,35.1,36.1 k Da。Western Blot结果表明,表达蛋白与TGEV感染猪阳性血清和H...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
Usha Barwale Zehr 吴昊
印度政府于2002年批准转基因棉花商业化种植。截至2014年,单价或双价的转基因棉在印度大约占棉花种植面积的95%。Bollgard和BollgardⅡ两种转基因棉花的推广对整个印度的棉花产业带来了巨大的影响,给农场、农民乃至国家都带来了利益。虽然印度转基因棉花取得了巨大成功,然而其他转基因作物在印度并没有实现商业化种植。本文就当前印度一些新的转基因作物研究进展、政府对转基因作物的监管及面临的挑战进行论述。
关键词:
转基因作物 转基因作物的监管 印度
[期刊] 世界农业
[作者]
樊龙江 周雪平
[期刊] 林业科学
[作者]
陈军 杜孟芳 尹新明 王学聘 卢孟柱
从拟谷盗虫尸中分离到一株对鞘翅目害虫光肩星天牛幼虫毒杀作用明显的Bt菌株Bt886。幼虫死亡率高达 6 0 % ,存活者生长明显受到抑制。经过晶体形态特征和杀虫谱分析 ,初步确认该菌株属于cry3类。比较cry3类基因的保守序列 ,利用一对cry3特异引物成功地从Bt886菌株中克隆到了一段基因片段并克隆至pGEM -T载体上。测序分析发现该片段与cry3Aa1基因具有很高的同源性 ,确定来自毒蛋白编码基因。Southern杂交分析表明该基因位于该菌株的质粒上。
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