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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
田绍泽 王雨 岳远征 杨赵楠 胡惠蓉
为鉴定在矮牵牛中筛选到的花药发育早期特异表达基因PhGRP的功能,构建了该基因的RNAi干涉载体,同源转化矮牵牛并进行了表型观测。与野生型对照相比,转基因矮牵牛植株的整体外观形态没有发生明显的变化,但其花器官的大部分形态指标均显著增大;花粉粒染色及离体培养表明其育性(包括活力和萌发力)显著降低;扫描电镜观察发现花粉粒大都畸形,外壁纹饰粗大;半薄切片结果显示,花药绒毡层发达且降解缓慢,推测绒毡层的发育异常为导致花粉粒败育的主要原因。
关键词：
矮牵牛 RNAi 花粉粒 育性 绒毡层
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
金晓玲 胡莹 李冰华
将矮牵牛Petunia hybrida Vilm的茎段接种在MS附加不同激素的培养基上进行愈伤组织诱导.结果表明:在MS+BA1.0 mol.L-1+NAA1.0 mol.L-1的培养基上可以形成愈伤组织,而且经过继代培养仍可形成愈伤组织;茎段或愈伤组织接种在MS+BA1.0 mol.L-1+NAA0.1 mol.L-1的培养基上可以形成不定芽,且诱导率达100%;健壮的高1.5~2.0 cm的不定芽接种在1/2MS+IBA0.5 mol.L-1+AC1.0 g.L-1的培养基上,其生长根状况良好,生根率达100%.
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
周琴 史杰玮 包满珠 刘国锋
为研究SPL(SQUAMOSA-promoter binding protein-like)转录因子在矮牵牛成花转换中的作用，克隆矮牵牛PhSPL9b基因，并将该基因对应的miR156/157靶位点进行点突变获得rPhSPL9b，将PhSPL9b和rPhSPL9b分别构建超量表达载体，转化矮牵牛和拟南芥，最终获得拟南芥35S∶∶PhSPL9b与35S∶∶rPhSPL9b转基因植株以及矮牵牛35S∶∶PhSPL9b转基因植株。研究结果显示，过表达PhSPL9b和rPhSPL9b导致拟南芥莲座叶显著减少，花期明显提前，其中35S∶∶rPhSPL9b转基因表型更为明显；过表达PhSPL9b促进矮牵牛提前开花。RT-PCR和qRT-PCR分析结果显示，表型明显的转基因株系中，PhSPL9b基因表达量均显著高于对照。转录激活实验结果表明，PhSPL9b是一个具有转录激活活性的转录因子。以上结果表明，矮牵牛PhSPL9b基因对开花时间具有重要调控作用，其功能具有保守性，同时，它可能是通过转录激活下游基因的表达而影响植物开花。
[期刊] 华北农学报
[作者]
田莉莉 牛良
为探讨RNAi策略在抗GFLV基因工程中的效果,通过RT-PCR克隆获得了310 bp的GFLV外壳蛋白基因保守片段,采用Gateway技术将该基因片段连入目标载体p HELLSGATE12构建了RNAi植物表达载体,并通过农杆菌介导法转入烟草中,RT-PCR检测表明目的基因片段已整合到烟草基因组中并在RNA水平上得到表达,病毒接种结果显示阳性植株的发病率明显低于对照,说明在转基因植株中dsRNA表达可干涉GFLV侵染过程。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
张颖 罗凤霞 曾会明 李智辉 张丽
以3个香型矮牵牛品种的带叶茎尖为外植体,研究了不同BAI、BA及NAA配比对初代培养、继代培养和生根的影响。结果表明:供试的3个基因型诱导成苗和继代培养所需的培养基激素浓度差异较大,BA浓度变化在0.1～1mg.L-1之间;但对于同一基因型而言,高浓度的BA可以直接从茎和叶上诱导出愈伤组织,由愈伤组织形成不定芽苗;中浓度的BA使其形成定芽和不定芽两种苗;低浓度的BA基本为顶芽和侧芽两种定芽成苗。3个品种在1/2MS+0.25mg.L-1NAA+0.25mg.L-1IBA培养基上都能生根,且生根迅速,生根效果较好。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宁国贵 白三平 包满珠 黄文俊
【目的】实现矮牵牛细胞的长期离体培养和再生,不但可以获得矮牵牛体细胞突变体,从中选出优良株系,而且可以为研究外源基因在矮牵牛细胞增殖与分化过程中的稳定性提供技术体系。【方法】以重瓣矮牵牛叶片为外植体,使用不同浓度BA与NAA的组合在黑暗条件下诱导愈伤组织。在不同光条件下,将愈伤组织在MS+BA2.0mg·L-1+0.5mg·L-1NAA+200mg·L-1CH与MS+BA0.5mg·L-1+0.5mg·L-1NAA+200mg·L-1CH两种培养基进行愈伤组织3年多的继代培养,并利用筛选的8个引物对20个再生植株的总DNA进行ISSR分析。【结果】不同的生长素与分裂素配比诱导的愈伤组织状态明显...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯嘉玥 邹志荣 文颖强 陈修斌
以当年现蕾盆栽大花类矮牵牛(Petuniahybrida)为材料,研究了不同基质中IBA与NAA对矮牵牛扦插生根的影响。结果表明,基质中添加激素可提高矮牵牛扦插成活率,促进生根,提高根冠比、叶绿素、根系活力、还原糖和可溶性糖。500mg/LIBA或200mg/LNAA+300mg/LIBA处理可明显促进矮牵牛扦插生根,扦插成活率高,生长良好。泥炭∶沙=1∶3和泥炭∶蛭石∶沙=1∶1∶1两种基质对矮牵牛扦插生根均有作用,但差异不明显。
关键词：
矮牵牛 扦插 激素 植株再生
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
宁露云 李蓓 包满珠 张蔚
利用矮牵牛基因表达谱芯片筛选出应答低温胁迫的关键基因，从中发现 1 个CCCH型的锌指蛋白基因PhTZF1。通过RT-PCR分离获得该基因的cDNA全长为2 085 bp，预测其编码694个氨基酸，含有2个CCCH型锌指蛋白保守结构域。系统进化树分析发现，PhTZF1与拟南芥AtSZF1相似度最高。利用半定量RT-PCR检测其在根、茎、叶和花中的表达特性发现，正常生长条件下该基因在各组织中的表达都较弱；利用实时定量PCR检测其在低温、干旱、ABA、MeJA、高盐和高渗胁迫处理下的表达情况发现，PhTZF1表现出不同程度的上调，其中对低温胁迫最为敏感且上调倍数最高，初步推测该基因与矮牵牛应答低温...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘正杰 张园 王玉美 梁伟 华金平
二酰基甘油酰基转移酶(DGAT)是生物体内三酰甘油(TAG)合成过程中的关键酶。本研究克隆陆地棉GhDGAT1基因308bp片段,构建了该基因含内含子结构的hpRNA干涉载体;应用花粉管通道法转化棉花,研究内源基因GhDGAT1沉默对棉花油分含量的影响。结果表明:1)经PCR及Southern杂交鉴定,转基因种子中GhDGAT1基因表达量受到显著抑制,种仁含油量下降,最多下降3.13%。2)种子油脂量显著减少的株系中,总蛋白含量及可溶性糖分含量,分别相对提高4.31%～9.77%和11.67%～23.01%。3)与野生型相比,转基因株系幼胚在发育后期鲜重降低,而可溶性蛋白含量升高。4)与对照相...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吕海燕 宁国贵 胡惠蓉 包满珠
以一个突变矮牵牛自交系离体根、叶与花瓣为外植体,实现了它们的离体再生。结果表明:在基本培养基MS+0.1 mg/L NAA的基础上,根在添加浓度为3~4 mg/L的BA时,芽分化率可达84%以上;花瓣在添加2 mg/L的BA时分化率为92.5%;叶片在添加2~3 mg/L的BA时,分化率高达97%。并且在芽诱导中,伴随着一定数量的茎线形联合异常苗的产生,其特征在植株的生命周期里一直得以维持。
关键词：
矮牵牛 离体再生 再生 遗传稳定性
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
蔡红 李小林 孔宝华 陈海如
应用植原体 16SrRNA基因通用引物,分别对表现矮化和扁茎症状的矮牵牛植株进行巢式PCR检测,均得到约 1. 2kb的特异片段。将此特异片段与pGEM -TEasy载体连接并转化到大肠杆菌JM109感受态细胞中,通过PCR鉴定,序列测定及同源性比较分析,结果表明:这 2个植原体株系 16SrDNA片段G+C含量分别为47. 1%和 47. 0%,具有其他柔膜菌纲原核生物 16SrRNA基因碱基组成特征;与 16Sr组中的代表株系 (西方翠菊黄化,SAY)同源率达到最高,分别为 99. 1和 98. 6%,故认为这 2个株系为该组成员之一。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高永峰 刘继恺 范晶 彭奕 黄科 张敦房 刘永胜
【目的】穗发芽是种子在收获前遇到阴雨潮湿环境时,在田间母体植株上发芽的现象,是水稻生产中的一个重要限制因素。水稻穗发芽的表现性状和玉米种子特异的viviparous1(vp1)突变体表型非常相似。VP1是种子成熟和休眠所必须的脱落酸信号转导途径中的重要转录因子,因此利用转基因技术研究水稻同源基因OsVP1的生物学功能对有效控制杂交水稻穗发芽的发生和危害具有重要意义。【方法】将水稻OsVP1片段导入到植物表达载体pHB,构建OsVP1的RNA干涉植物表达载体pHB-OsVP1RNAi;通过根癌农杆菌介导转入水稻品种日本晴,并获得阳性植株。【结果】半定量RT-PCR分析显示,转基因植株胚中的OsV...
关键词：
OsVP1 RNA干涉 农杆菌 水稻
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张进忠 孙嘉曼 李朝生 刘挺燕 范燕萍
【目的】AGPase基因可在百合鳞茎膨大发育过程中影响淀粉的合成代谢,从而调控鳞茎发育,构建干扰AGPase基因RNAi载体并遗传转化进行反向下调作用研究,可为该调控机制的研究提供更多信息。【方法】克隆300 bp的AGPase基因保守序列,利用Gateway技术通过BP反应将该序列插入入门载体p DONR221,进行LR反应将该序列正反向插入干扰载体p Jawohl8-RNAi中,经过酶切鉴定所构建RNAi载体的正确性;并通过农杆菌介导法转入百合组培苗中,PCR检测RNAi载体转化农杆菌,荧光定量PCR检测农杆菌转化植株的AGPase相对表达量变化。【结果】成功构建p DONR221-AGPase入门克隆与p Jawohl8-RNAi-AGPase表达载体,遗传转化百合愈伤诱导出AGPase表达量下调的转化植株。【结论】采用Gateway技术可方便构建RNAi表达载体,选择的AGPase保守序列能作为干扰片段对百合AGPase自身转录的mRNA进行下调。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王妍 沈向群 关柏丽 郭春 李青
【目的】初步探索矮牵牛雄性不育性状的遗传规律,选育雄性不育两用系。【方法】从矮牵牛328自然群体后代中发现并选择不育株,以不育株(08A328)为母本,以7份不同来源的材料为父本进行杂交,杂交后代(F1)自交获得F2,选择F2分离出的不育株与F1回交,同时对F2不育株进行人工自交结实率试验和花粉生活力测定。在F2中优选不育株与经济性状优良的父本进行回交转育,转育后代自交,子代兄妹交,筛选可育株与不育株数量按1∶1分离的株系。【结果】F1后代全可育,F2后代可育株与不育株数量按15∶1分离,回交后代可育株与不育株数量按3∶1分离。不育株花药干瘪微黄,花粉无活力,自交不结实。回交转育后代均可育,自...
关键词：
矮牵牛 雄性不育 遗传
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李宁毅 王吉振 时彦平
为明确烯效唑提高矮牵牛植株抗盐性的生理机制,研究了烯效唑(30mg.L-1)对200mmol.L-1盐胁迫下矮牵牛幼苗生长状况及可溶性糖、Pro、可溶性蛋白和MDA含量的影响。试验结果表明:30mg.L-1烯效唑处理可以显著降低矮牵牛的盐害指数,增加植株的冠幅和鲜重;随着盐胁迫时间的延长,经烯效唑处理的植株叶片中可溶性糖、Pro及可溶性蛋白含量增加,分别比未经烯效唑处理增加24.6%、23.9%和46.04%,提高了植株在盐胁迫下的渗透调节能力;烯效唑处理可以缓解盐胁迫下叶片膜脂过氧化作用,减少MDA在叶片内部的积累,其降幅可达40.32%。因此烯效唑可以增加矮牵牛的抗盐性。
关键词：
矮牵牛 烯效唑 盐胁迫 生理效应
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