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[期刊] 中国农业科学
[作者]
聂瑞强 杨玉静 谢建山 范瑞文 许冬梅 于秀菊 段志成 董常生
【目的】高度保守的ＰＡＸ转录因子家族在黑色素细胞的分化和黑色素的生成中起重要的作用，其家族共有的ＰＤ结构域是其与下游基因结合的主要位点，而ＰＤ结构域氨基端的ＰＡＩ亚结构域在其与下游基因的结合过程中发挥重要的作用。研究表明ＰＡＸ６在视网膜上皮黑色素细胞的分化中发挥至关重要的作用，本试验借助研究ＰＡＸ６ ＰＡＩ亚结构域的功能来对ＰＡＸ转录因子家族共有的ＰＤ结构域和ＰＡＩ亚结构域进行研究。【方法】首先通过ＰｓＩＰｒｅＤ对ＰＡＸ６ ＰＤ结构域的结构进行分析，使用ＮＣＢＩ对ＰＡＸ６ ＰＤ结构域与下游基因的结合位点进行分析，使用ＪＡｓＰＡｒ对ＭＩＴＦ、ＴＹｒ、ＴＹｒＰ１和ＴＹｒＰ２启动子中ＰＡＸ６ ＰＤ结．．．
关键词：
PAI亚结构域 Pax6 黑色素
[期刊] 中国农业科学
[作者]
聂瑞强 杨玉静 谢建山 范瑞文 高文俊 董常生
【目的】ＭＩＴＦ和β－ｃａＴｅｎＩｎ是黑色素生成通路中重要的调节基因，而Ｐａｘ６通过调控ＭＩＴＦ和β－ｃａＴｅｎＩｎ来调控黑色素细胞的黑色素生成，通过对只含有正常Ｐａｘ６ ＰａＩｒｄ ｄｏＭａＩｎ的前１０２个氨基酸的Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）的研究，来探究Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）是否还有生物学功能，以及Ｐａｘ６对其下游基因的作用机理。【方法】根据ｎｃＢＩ查找到的Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）基因序列设计Ｐｃｒ引物，克隆Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ），收集所得基因片段送华大基因测序确认。后通过对Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）和慢病毒表达载体的序列分析来筛选合适的酶切位点，通过分析选取Ｓａｌ Ｉ和ｘＢａ Ｉ作为酶切位．．．
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
陈洁 鲍宝龙
在眼睛发育过程中,Paired Box 6(pax6)和T-Box Transcription Factor 3(tbx3)界定了视网膜发生区域,Retinal Homeobox Protein 1(rx1)确定了视杯的形成范围。本研究调查了pax6、tbx3和rx1基因是否在左右眼睛发生区域的表达范围存在差异。荧光定量PCR显示,牙鲆pax6、tbx3和rx1基因从受精后20 h开始表达。RNA整体原位杂交检测发现pax6基因在牙鲆胚胎左右眼睛发生区域表达,左侧表达范围较右侧略大,同时pax6在前脑以及神经管处也有表达;tbx3和rx1基因在牙鲆胚胎左右眼睛发生区域表达,左右侧表达范围无明显...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
梁潘霞 李杨瑞
以甘蔗叶片总ＲＮＡ为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增细胞色素ｂ６－ｆ复合体铁硫亚基基因的Ｃ ＤＮＡ，采用生物信息学软件分析所克隆基因的编码蛋白特性，并用荧光定量ＰＣＲ分析该基因的表达情况。结果表明：克隆得到的Ｃ ＤＮＡ片段长度为７９６ ｂＰ，包括１个５７９ ｂＰ的开放阅读框，编码１９２个氨基酸。甘蔗与高粱ＣＹＴ基因Ｃ ＤＮＡ序列的同源性为９４．０％，氨基酸序列同源性为９９．０％；该基因推导的蛋白分子量大小为２０．６７ＫＤ，等电点为６．２４，疏水性分值在０．５０～２．１１；蛋白二级结构中α－螺旋占１７．１９％，随机卷曲占５３．１２％，延伸链占２１．５３％，β－转角只占８．３３％，ＧｅＮ ｂＡＮＫ登录号．．．
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
王吟方亭 任婷 朱松会 梁世日 何珂 赵阿勇
生肌调节因子家族(myogenic regulatory factors,MRFs)在胚胎期和出壳早期的骨骼肌分化过程中发挥重要作用;PAX家族中的2个转录因子Pax3和Pax7,被认为在肌纤维的生长发育过程中,指导众多过程的形成。在鹅胚胎发育过程中这些基因的表达变化规律及在肌肉发育过程中的表达变化规律研究甚少。以浙东白鹅Anser cygnoides domestica‘Zhedong’为研究对象,提取RNA合成c DNA并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)研究MRFs,Pax3和Pax
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈松 杨亦桦 江孝静 吴益东
比较了 6种增溶剂对棉铃虫细胞色素P4 5 0O 脱甲基活性的影响。结果表明 ,在匀浆缓冲液中加入Polyoxyethyleneetherw 1,棉铃虫细胞色素P4 5 0的O 脱甲基活性为 37 80U (mOD·min-1·larva-1) ,是对照的 1 34倍 ;经Chaps、胆酸钠、Emulgen 911、Emulgen 913、Triton X10 0增溶处理后 ,O 脱甲基活性分别为 2 2 7,2 7 5 8,9 6 4 ,14 77和 19 86U ,分别是对照的 97% ,98% ,34% ,5 2 %和 70 %。对照中只有 79 2 %的个体能够被检测到活性 ,而在...
关键词：
棉铃虫 细胞色素P450 增溶剂 抗药性
[期刊] 华北农学报
[作者]
于堃 刘瑞莉 刘贤勋 柏学进 董雅娟
旨在探究bta-miR-133a参与肉牛调控背最长肌发育的分子机制。通过采集布莱凯特黑牛和鲁西黄牛的背最长肌进行sRNA建库,数据筛选与肉牛骨骼肌发育相关的bta-miR-133a,采用生物信息学分析软件鉴定其保守性并预测其靶基因,对其靶基因进行GO富集分析和KEGG通路富集分析,并通过双荧光素酶报告试验对预测的潜在靶基因进行验证;选取C2C12细胞进行功能验证,过表达和敲除bta-miR-133a, 48 h后2%马血清诱导观察肌管分化过程,CCK-8检测细胞增殖率,实时荧光定量PCR检测细胞增殖分化标记基因PCNA、CCND1、Myh1、Myod1以及靶基因的表达量。结果表明,bta-miR-133a的成熟序列在各物种间高度保守,靶基因预测为PAX7,经双荧光素酶报告试验验证,bta-miR-133a与PAX7存在靶标关系。GO富集和KEGG通路分析结果显示,预测靶基因显著富集于肌动蛋白细胞骨架组织的调节、经典Wnt信号通路的负调控、肌动蛋白丝结合等GO条目中和MAPK、Ras、FoxO等与肌肉发育相关的信号通路中。过表达bta-miR-133a促进肌管分化(P<0.01),抑制靶基因PAX7的表达(P<0.01);敲除bta-miR-133a则抑制肌管分化(P<0.05),促进靶基因PAX7表达(P<0.01)。在细胞增殖方面,过表达bta-miR-133a降低其标记基因PCNA、CCND1的表达量(P<0.05),敲除组则相反;在细胞分化方面,过表达bta-miR-133a增加其标记基因Myh1、Myod1的表达量(P<0.01),敲除组则相反。综上表明,bta-miR-133a可能通过靶向负调控PAX7的表达抑制成肌细胞增殖、促进其分化而参与背最长肌的发育过程。
[期刊] 草业科学
[作者]
朱爱文 刘海霞 德庆卓嘎 韩大勇 格桑加措 闫伟 平措班旦 朱戈辉
热休克蛋白A2 (HSPA2)是热休克蛋白HSP70家族重要成员，能够促进睾丸支持细胞增殖；精子发生相关基因6 (SPATA6)能够调控肌球蛋白合成的微丝运输系统，影响精子细胞骨架形成。在雄性哺乳动物生殖过程中，两者均起重要作用。为研究HSPA2和SPATA6在雄性彭波半细毛羊生殖过程中的表达规律和细胞定位，以不同年龄阶段(3月龄、12月龄和3岁龄)彭波半细毛羊睾丸组织为研究对象，运用实时荧光定量PCR (real time quantitative PCR,qRT-PCR)、Western blot和免疫组织化学染色法(IHC)从转录和翻译水平检测了HSPA2和SPATA6在不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的表达水平和分布模式，分析预测HSPA2和SPATA6在彭波半细毛羊睾丸发育和精子发生过程中的调控作用。结果表明：12月龄和3岁龄彭波半细毛羊睾丸组织中HSPA2 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄(P <0.01);12月龄SPATA6 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄(P <0.01)，显著高于3岁龄(P <0.05)。不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的支持细胞和间质细胞中HSPA2和SPATA6蛋白均有分布。初步推断，HSPA2和SPATA6的表达水平变化在调控彭波半细毛羊精子发生过程和促进精子成熟中具有重要作用。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
田甜 李鑫 郭长宁 侯茜 王冠华 于建光
【目的】克隆并鉴定金纹细蛾（Phyllonorycter ringoniella）细胞色素CYP6家族基因，并观察氯氟氰菊酯药剂处理后mRNA相对表达量的变化，为金纹细蛾细胞色素CYP6家族基因全长cDNA的获得，以及防止或延缓金纹细蛾抗药性的产生提供理论依据。【方法】以GenBank上公布的CYP6家族基因编码区序列为基础设计并合成简并引物；利用RTPCR扩增获得序列后在NCBI上进行Blastx对比，根据P450基因命名法进行命名并向GenBank提交序列获得登录号；利用点滴法和qRTPCR技术，将金纹细蛾3龄幼虫在氯氟氰菊酯（LC50=12.88 mg/L）条件下处理24 h后，观察其体...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
胡屹屹 穆祥 胡元亮
为探讨白头翁汤及其主要成分对细菌内毒素(LPS)诱发的病理效应的药理作用,培养内皮细胞至单层融合后加入内毒素,3 h后加入高(10 mg·mL-1)、中(5 mg·mL-1)、低(1 mg·mL-1)3种剂量的8种药物,继续培养21 h后收集细胞上清液,用ELISA方法测定IL-1α、IL-6和ET-1的含量。结果表明:白头翁汤及其成分白头翁皂苷B4、小檗碱、巴马汀可以极显著或显著抑制LPS诱导的IL-1α高水平分泌,白头翁汤及其成分秦皮甲素、秦皮乙素、白头翁素可以极显著或显著抑制LPS诱导的IL-6高水平分泌,白头翁汤及其成分秦皮乙素、白头翁素可以极显著或显著抑制LPS诱导的ET-1高水平分...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
安建平 宋来庆 赵玲玲 由春香 王小非 郝玉金
【目的】克隆苹果细胞分裂素响应因子基因Md CRF6(cytokinin response factor 6),鉴定其在调节花青苷积累和盐胁迫抗性中的作用,揭示Md CRF6的功能,为研究细胞分裂素信号途径和果树生长发育调控提供理论依据。【方法】以‘嘎啦’苹果(Malus domestica‘Gala’)为研究材料,利用同源序列比对和PCR技术,分离细胞分裂素响应基因Md CRF6。使用MEGA 5.0软件构建苹果Md CRF6与拟南芥CRFs间系统进化树;通过SMART软件和DNAMAN软件分析Md C
关键词：
苹果 Md CRF6 花青苷 盐胁迫
[期刊] 草业科学
[作者]
张永峰 顾亚荣 马兰花 阎萍
本研究旨在探究m~6A RNA甲基化酶METTL3和WTAP在牦牛(Bos grunniens)不同组织、前体脂肪细胞增殖与分化过程中的表达模式和前体脂肪细胞分化过程m RNA m~6A的变化水平。采用qRT-PCR检测牦牛皮下脂肪、肌肉、心、肝、脾、肺、肾和皮下脂肪不同时期(18和30月龄) METTL3及WTAP的mRNA表达水平。应用I型胶原酶消化法获取牦牛前体脂肪细胞，油红O染色和脂肪分化标志基因的检测建立牦牛前体脂肪细胞分化模型，以及qRTPCR检测前体脂肪细胞增殖分化阶段METTL3和WTAP的m RNA表达水平。结果表明，肝脏组织中METTL3表达最高(P
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
黄敏 程珂 马春松 王猛 王春芳
为探究6-姜烯酚对鱼类的免疫调节作用,用不同浓度的6-姜烯酚孵育斑马鱼肝脏细胞48 h后,检测其生长率、胞内活性氧(ROS)水平、抗氧化酶活性,并进行抗炎、抗氧化基因表达量的检测。结果显示:高浓度的6-姜烯酚抑制肝脏细胞的增殖(P<0.05),而活性氧ROS和脂质过氧化产物MDA含量最低(P
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郑国华 张贺英
以枇杷品种早钟6号幼果为试材,采用人工降温的方法,研究低温胁迫下枇杷幼果超微结构的变化.结果表明:6、3℃低温胁迫下,幼果果肉细胞质膜、液泡膜清晰,叶绿体、线粒体结构没有明显变化;0℃低温胁迫下,原生质膜、液泡膜结构完整,叶绿体结构受到较为严重的破坏,线粒体双层膜结构依稀可见,但已经没有明显的内脊,内部呈小泡化;-3℃低温胁迫下,原生质膜、液泡膜均破裂,原生质体浓缩,叶绿体扭曲变形、相互融合,线粒体膜结构受损,内脊消失.可见,一定的低温会对枇杷幼果产生不同程度的伤害,尤其在0℃以下的低温胁迫幼果冻害严重.
关键词：
低温胁迫 枇杷 幼果 细胞超微结构
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