以肉食性鱼类翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)为研究对象,对其肽YY(peptide YY,PYY)基因进行鉴定和分析,并通过中枢注射人工合成的鳜PYY多肽,研究PYY对翘嘴鳜摄食量的影响。氨基酸序列多重比对结果发现,sc-PYY与各个物种的氨基酸序列高度保守,鱼类中与狼鲈(Dicentrarchus labrax)、红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)一致性较高;实时荧光定量PCR检测sc-PYY mRNA表达的组织分布,结果显示,sc-PYY mRNA在脑中表达量最高,在肠道、肌肉、眼睛中亦有较高的表达;翘嘴鳜中枢注射PYY后,摄食量在4 h相比于对照组(PBS)显著性下降。这表明PYY可能在减少鳜的食物摄入量中发挥着重要的作用。

为研究中枢神经对营养物的直接感知及外周组织的间接感知，以翘嘴鳜（Siniperca chuatsi）为试验对象，通过脑室注射和饲料缺乏方式探索组氨酸或缬氨酸对翘嘴鳜摄食的影响。脑室注射试验中，对照组注射磷酸盐缓冲液（PBS），试验组注射组氨酸或缬氨酸或同时注射一般性调控阻遏蛋白激酶2(general control non-derepressible-2,GCN2)的抑制剂GCN2iB，检测注射后1 h和4 h翘嘴鳜的摄食量变化。饲料缺乏试验中，对照组投喂氨基酸完全饲料，试验组投喂组氨酸或缬氨酸缺乏饲料，检测翘嘴鳜的摄食量、GCN2信号通路相关因子及食欲基因的变化。结果显示，与对照组相比，注射组氨酸或缬氨酸均显著降低了翘嘴鳜的摄食量；同时注射GCN2iB和组氨酸可使翘嘴鳜的摄食量恢复至正常水平。与对照组相比，投喂缺乏组氨酸或缬氨酸的饲料，翘嘴鳜的摄食量显著减少，且GCN2信号通路下游激活转录因子4(activating transcriptional factor 4,atf4)mRNA表达水平显著降低，下丘脑中食欲因子神经肽Y基因（neuropeptide Y,npy）的mRNA表达水平显著降低，但刺鼠相关蛋白（agouti-related protein,agrp）、促黑素细胞皮质素原（pro-opiomelanocortin,pomc）、可卡因-苯丙胺转录调节肽（amphetamine-regulated transcript,cart）基因的mRNA表达水平无显著变化。综上所述，组氨酸和缬氨酸通过脑室注射和饲料缺乏的方式均可抑制翘嘴鳜摄食，且翘嘴鳜摄食行为的变化与GCN2信号通路有关，饲料缺乏组氨酸或缬氨酸可能是通过下调促食欲因子npy基因的表达起到抑食作用。

利用生物能量学的方法研究翘嘴鳜[Siniperca chuatsi(Basilewsky)]幼鱼(初始体质量2.52～3.79 g,平均体质量3.11 g)在不同摄食水平(饥饿、1%、2%、3%、4%、饱食)下的体组成、生长、排泄、排粪及氮收支,建立生长、氮排泄、排粪与摄食水平的回归方程。试验水温为26.5～28.0℃,平均水温27.3℃。试验结果表明,随着摄食水平的增加,鱼体干物质、蛋白质、脂肪含量呈增加趋势,灰分含量呈降低趋势。随着摄食水平的增加,食物转化效率呈增大趋势,吸收效率略微增加,特定生长率呈线性增长趋势。排泄氮(UN)、粪便氮(FN)随着摄食水平增加显著增加,排泄氮、粪便氮与摄食...

为探究三种不同饵料对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)生长性能、体成分和消化酶的影响,实验选取初始体重为(113.56±11.82)g的翘嘴鳜900尾,随机分成3组,分别投喂活饵料鱼、冰鲜饵料鱼和商品饲料,进行60 d的养殖试验。结果显示:(1)冰鲜组、活饵组和饲料组翘嘴鳜的成活率、增重率、特定生长率和蛋白效率均无显著性差异。饲料组翘嘴鳜肥满度显著小于其他两组,肝体比和脏体比均显著大于其他两组。(2)三组翘嘴鳜体成分中的水分、蛋白质、粗脂肪和粗灰分均没有显著性差异。(3)翘嘴鳜肌肉各种氨基酸含量和总氨基酸量在三组之间的差异均不显著。饲料组翘嘴鳜肌肉中不饱和脂肪酸中的棕榈油酸、油酸、亚油酸、花生烯酸、EPA、神经酸、DHA的含量及总饱和脂肪酸、总单不饱和脂肪酸、总多不饱和脂肪酸均显著高于其他两组。(4)肝脏脂肪酶、肠道淀粉酶的活性在三组翘嘴鳜之间均没有显著性差异。冰鲜组翘嘴鳜肝脏淀粉酶、肠道脂肪酶活性均显著高于其他两组。结果表明:翘嘴鳜经过驯化可以摄食配合饲料,且不影响其生长性能。翘嘴鳜摄食饲料后,其肌肉氨基酸没有发生显著性的变化,不饱和脂肪酸的含量显著升高。

为阐明黄条鰤幼鱼摄食消化特性构建最佳胃排空数学模型，确立最适摄食投喂间隔，实验检测了黄条鰤幼鱼（63.96±5.63）g胃排空过程中内容物重量、肝脏和肠道中消化酶活性变化，分析了垂体中摄食调控相关基因的表达，比较了线性模型、平方根模型、立方模型3种数学模型对胃排空曲线的拟合程度。结果显示，黄条鰤在摄食后瞬时胃内容物湿重呈阶段性降低，18 h后降为0，属于直线下降型胃排空类型。胃排空过程中，肝脏淀粉酶、脂肪酶和糜蛋白酶活性呈先上升后下降、随后又上升接着下降的“M”型变化趋势，淀粉酶活性在摄食后0～6 h显著上升，脂肪酶和糜蛋白酶活性在0～9 h显著上升，三种酶活性在9～12 h均呈显著下降趋势，在15～18 h显著上升，且在18 h活性达到最高；肠道中的淀粉酶在0～6 h显著上升，随后下降，9～12 h呈上升趋势，12 h活性达到最高，随后逐渐下降，其脂肪酶和糜蛋白酶活性则是在摄食后0～12 h显著上升，12 h活性达到最高，随后逐渐下降。神经肽Y（Neuropeptide Y， NPY）和食欲素（Orexin， Ore）mRNA表达水平呈先上升后下降趋势，NPY在摄食后12～15 h内表达水平显著上升，Ore在9～15 h内表达水平显著上升，NPY、Ore二者mRNA表达水平均在摄食后15 h达到最高，随后显著下降。胃内容物残余百分比与胃排空时间、NPY mRNA的表达呈显著负相关，NPY mRNA的表达水平与胃排空时间呈显著正相关。研究结果将有助于明确黄条鰤最佳摄食间隔，为工厂化养殖模式下黄条鰤投喂提供理论依据。

采用荧光定量PCR技术,检测翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)快肌和慢肌中与糖代谢相关的16个基因的表达情况,并比较其表达差异性,分析翘嘴鳜肌肉糖代谢调控特点。结果显示:在快肌和慢肌中,与葡萄糖摄取和磷酸化相关的基因存在显著性差异表达的各有4个;与糖原代谢相关的基因有显著性差异表达的有2个;PI3K、MAPK5、MAPK63个基因在快肌中的相对表达量极显著高于在慢肌中的,表明与这3个基因相关的葡萄糖的摄取和利用快肌强于慢肌;而MEF2α、PGC–1α、PGC–1β、PDK1、MAPK4、GYS1、GSK3β7个基因在慢肌中的相对表达量显著高于快肌,表明与这7个基因相关的葡萄糖的摄取和利用慢肌强于快肌。

为研究crh (Corticotropin-releasing hormone)基因对鱼类摄食的调控作用,首次克隆了银鲫(Carassius auratus gibelio) crh基因c DNA全长序列。运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测crh基因m RNA在不同组织的表达及餐前、餐后和禁食对其表达的影响。结果显示,银鲫crh基因的c DNA序列全长为920 bp,其中,5’-UTR为53 bp,3’-UTR为378 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为489 bp。推导银鲫crh基因的ORF区编码蛋白由162个氨基酸组成,其中,含有11个氨基酸的保守区,24个氨基酸的信号肽,41个氨基酸的成熟肽。氨基酸序列的多重比较分析显示,银鲫crh基因与金鱼(Carassiusauratus)的同源性为99%,与鲤(Cyprinuscarpio)的同源性为96%。荧光定量PCR表达分析显示,银鲫crh基因在下丘脑中的表达量最高,其次是端脑和心脏。crh基因的表达量在餐前与餐后没有显著变化(P>0.05),在禁食第5天、第7天出现极显著降低(P<0.01),而在复投喂后第9天、第11天出现极显著升高(P<0.01)。以上结果显示,crh基因在银鲫摄食调控方面可能扮演着重要角色。

镉(Cd)是一种具有高度细胞毒性的重金属,其生物半衰期长,不易降解,水体中即使很低浓度镉也能对鱼类造成较大损伤。过氧化物酶体增殖物激活受体共激活因子1(peroxisomeproliferatoractivatedreceptor-γco-activator-1,pgc1)是一种转录共激活因子,其通过激活PPARγ等转录因子活性而参与一系列基因表达调控,在生物能量代谢、线粒体生物合成、抗氧化等生理过程中起着重要的调控作用。为了阐明鳜(Siniperca chuatsi) pgc1基因序列特征、组织表达及重金属镉胁迫对其昼夜节律性表达的影响,本研究对鳜pgc1α、pgc1β基因启动子顺式调控元件、序列特征、组织表达以及水体镉暴露下鳜脑组织中pgc1α和pgc1β基因表达的昼夜节律进行了分析。结果表明,鳜pgc1α和pgc1β启动子中存在NF-E2、IRF1等能量代谢相关转录因子结合位点, pgc1β启动子上存在节律转录因子KLF9结合位点。鳜pgc1α、pgc1β基因都包含完整的LXXLL基序和RRM结构域,与斑马鱼(Danio rerio) pgc1α和pgc1β基因同源性分别为51.6%和59.7%,与人类基因同源性分别为41.5%和28.4%,序列保守性较低。鳜pgc1α和pgc1β基因表达具有明显的组织特异性,均在脑、肾脏、心脏中特异性表达。自然条件下,鳜脑组织中pgc1α和pgc1β表达具有显著的昼夜节律性,均为昼高夜低的表达趋势,其基因表达峰值相位分别为ZT 7.07 h和ZT 8.25 h。重金属镉胁迫导致鳜脑组织pgc1α和pgc1β基因表达昼夜差异减小,振幅下降,基因表达峰值相位分别提前至ZT3.71h和ZT 5.65 h,表明水体镉暴露对鳜脑组织pgc1α、pgc1β基因昼夜节律性表达具有显著的扰乱作用。

本文采用RT-PCR和RACE法分离、克隆了翘嘴红鲌G6Pase催化亚基基因全长cDNA,共1900 bp[不含poly(A)],包括49 bp 5′非翻译区,1068 bp阅读框以及含Poly(A)信号AATAAA的778 bp 3′非翻译区[不包括Poly(A)]。阅读框共编码355个氨基酸,分子量为39.89 ku。序列比对分析表明翘嘴红鲌G6Pase与斑马鱼G6Pase的相似性高达95%,与鼠、狗、人G6Pase的相似性为63%,和光滑爪蟾、金头鲷、河豚等G6Pase的相似性分别为69%、55%、76%,并具有G6Pase特有的3个保守基序。为了研究摄食以及饲料中碳水化合物对G6Pas...

【目的】克隆异齿裂腹鱼肽YY基因(PYY)的编码区(CDS)全长序列,对其生物信息学进行分析,并研究PYY基因在异齿裂腹鱼组织中的分布情况,以及餐前餐后和禁食复喂对PYY基因表达量的影响,为异齿裂腹鱼摄食调控机制研究提供依据。【方法】以采集于西藏雅鲁藏布江的7～12龄,体质量为(1.22±0.20) kg/尾的异齿裂腹鱼为对象,采用RT-PCR和Race-PCR技术克隆异齿裂腹鱼PYY基因的CDS全长序列,分析其编码蛋白质的氨基酸序列和蛋白结构;采用实时荧光定量PCR,分析PYY基因在异齿裂腹鱼组织中的分布情况,以及餐前餐后和禁食复喂对PYY基因在异齿裂腹鱼脑组织中表达量的影响。【结果】异齿裂腹鱼PYY基因CDS序列长度为735 bp,其中开放阅读框(ORF)为294 bp,编码98个氨基酸。系统进化分析表明,异齿裂腹鱼PYY基因与同属裂腹鱼属的鱼类亲缘关系最近;氨基酸序列分析表明,PYY蛋白质包括典型的特征序列和信号肽,其蛋白结构中具有亲水性结构和跨膜结构。PYY基因在异齿裂腹鱼脑组织中高度表达,在其他组织中微弱表达;餐前异齿裂腹鱼PYY基因的表达量无显著性差异,但餐后PYY基因的表达量显著升高,且随着餐后时间的逐渐延长,其表达量继续升高;禁食使异齿裂腹鱼脑组织中的PYY基因表达量下降,复喂后PYY基因的表达量极显著升高。【结论】成功克隆了异齿裂腹鱼PYY基因的CDS全长序列,PYY基因在异齿裂腹鱼脑组织中高度表达,但在肠道中微量表达,异齿裂腹鱼PYY基因是餐后饱感信号因子,具有调节动物摄食的功能。

根据GenBank上大眼鳜生长激素cDNA序列(收录号:AY155227)设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术从翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)脑垂体中克隆了生长激素基因(scGH)编码区序列并对其真核表达载体的构建进行了研究。结果显示:扩增片段全长615 bp,共编码204个氨基酸。该序列与GenBank上大眼鳜生长激素cDNA序列同源性为99.84%。将scGHcDNA序列定向插入pYES2/CT真核表达载体中,经过筛选、酶切和测序,证明重组子中确实插入了翘嘴鳜GH片段。

研究了在20.3~24.8℃条件下分别饥饿0 d、4 d、8 d、12 d和16 d后恢复投喂16 d对翘嘴鲌(Culter al-burnus)幼鱼摄食、生长及体成分的影响。结果显示:随着饥饿时间延长,幼鱼体质量损失率显著增大;肝体指数变小,水分和灰分含量逐渐升高;粗脂肪含量在饥饿前期下降较快,饥饿后期下降速率降低,各饥饿组与对照组差异显著(P0.05),饥饿后期下降明显,饥饿12 d、16 d组与对照组有显著差异(P<0.05...

【目的】探究日本医蛭在不同摄食阶段、各个组织（唾液腺、肠、嗉囊、皮肤及精卵巢）中水蛭素基因（hirudin）的时空表达模式，以期为水蛭药材的科学合理利用提供理论依据。【方法】基于课题组前期的水蛭唾液腺转录组数据筛选结果及基因克隆获得的水蛭素基因序列信息，利用实时荧光定量PCR方法，对水蛭关键活性成分的编码基因hirudin在不同摄食阶段、不同组织中的表达量进行检测分析，研究该基因的时空表达模式。【结果】水蛭素基因（hirudin）在日本医蛭的唾液腺、肠、嗉囊、皮肤及精卵巢组织中均有表达，且在唾液腺中的表达量显著高于其他组织；Hirudin基因在不同摄食阶段的唾液腺组织中表达结果显示，摄食后第2天表达量显著升高，之后随着摄食时间的推延而出现下降趋势；Hirudin基因在嗉囊、肠中的表达量呈先升高后下降的趋势，分别于摄食后第1天、第2天达到最高，之后会随着停食时间延长而呈现下降趋势，尤其是在摄食后第7天、第8天的表达量呈现显著性降低；Hirudin基因在皮肤组织中也有表达，并随着停食时间的延长呈先升后降的趋势，最高峰出现在摄食后第2天；在精卵巢组织中，摄食期间hirudin基因的表达量最高，与其他摄食阶段的表达呈现显著性差异。【结论】水蛭素基因hirudin在日本医蛭的唾液腺、肠、嗉囊、皮肤和精卵巢组织中均有不同程度的表达，在唾液腺中的表达量显著高于其他组织。摄食行为及食物刺激可能影响水蛭素基因（hirudin）的表达，在不同摄食阶段的表达量存在显著差异。研究结果可为水蛭药材的科学采收加工、提取部位的科学选取、合理入药提供理论依据和技术支撑，对未来水蛭药材资源的可持续利用具有重要的参考价值。

MicroRNA(miRNAs)是一类长度为18-25nt的内源性非编码单链小RNA,参与细胞增殖与凋亡、免疫、脂肪代谢等过程。本试验以三组投喂不同类型饵料的鲤(Cyprinus carpio)肝脏为研究材料,通过HiSeq 2500深度测序技术和生物信息学分析miRNA,鉴定出235个已知miRNAs。三种饵料组共表达的差异miRNAs有13个,随机挑选5个miRNA并采用qPCR进行验证,表达趋势在qRT-PCR结果和RNA测序结果中高度相似;对13个共表达的差异表达miRNAs进行靶基因预测,共预测到靶基因530个。对预测靶基因进行KEGG通路分析,结果显示参与2-羰基羧酸代谢,糖基磷脂酰肌醇(GPI)-锚定生物合成,柠檬酸循环(TCA循环)等通路的调节。本研究首次了解鲤摄食不同种类饵料的miRNAs表达特征,可以为深入了解miRNA对鲤摄食不同种类饵料过程的调控作用奠定基础。

本研究基于转录组学的分析结果，克隆分析了银鲳(Pampus argenteus)二肽酶(dehydropeptidase， dp1)、羧肽酶A (carboxypeptidases， cpa2l)和磺基转移酶(sulfotransferase， sult2) 3个营养代谢相关基因，并探讨了其在消化吸收水母(Scyphozoa)过程中发挥的功能。通过RACE技术克隆获得了银鲳dp1、cpa2l和sult2基因的cDNA全长序列。dp1基因全长2 522 bp，包含1个1 272 bp的开放阅读框(ORF)，含有1个由23个氨基酸组成的信号蛋白肽和1个典型的酰胺水解酶超家族的结构域。cpa2l基因全长1421 bp，ORF长1260 bp，含有1个由16个氨基酸组成的信号蛋白肽和1个典型的M14金属羧肽酶家族的结构域。sult2基因全长1 834 bp，ORF长714 bp，含有1个典型的磺基转移酶家族的结构域。银鲳Dp1、Cpa2l和Sult2与蓝鳍金枪鱼(Thunnus maccoyii)同源性最高，系统进化树结果也显示，银鲳dp1、cpa2l和sult2和蓝鳍金枪鱼对应基因聚在一个分支上，亲缘关系最近。运用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测了dp1、cpa2l和sult2基因在不同组织中的表达水平及摄食水母对3个基因不同组织中表达规律的影响。结果发现，银鲳dp1基因在肝脏中表达量最高(P<0.05)，与未摄食水母组相比，dp1基因在摄食水母组的脑和鳃中表达量均极显著增加(P<0.01)，在中肠和肾脏中显著增加(P<0.05)，而在肌肉中显著下降(P<0.05)。cpa2l基因在未摄食水母组的中肠的表达量最高，而在摄食水母组的肾脏的表达量最高(P<0.05)，与未摄食水母组相比，摄食水母组cpa2l基因在肝脏中的表达量极显著增加(P<0.01)，而在中肠和肌肉中却极显著下降(P<0.01)。sult2基因在肝脏中表达量最高(P<0.05)，与未摄食水母组相比，sult2基因在摄食水母组的中肠、脑、鳃、肝脏和肾脏中表达量显著增加(P<0.05)。上述结果表明，dp1、cpa2l和sult2基因在银鲳摄食水母后机体营养物质的消化吸收和代谢过程中起重要的调节作用，基于摄食水母后3个基因组织表达模式的比较分析，推测dp1主要参与调控消化吸收和组织中营养素沉积的过程，cpa2l主要参与调控肝脏中营养代谢的过程，而sult2可能在整个消化吸收和代谢过程中均起到重要的调控作用。