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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
朱小甫 吴旭锦
【目的】建立一种能够区分猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）经典株和变异株的ＲＴ－ｎＰＣＲ诊断方法，能够从病料组织、血清或精液中直接进行目的基因检测，达到快速诊断的目的。【方法】根据ＧｅｎＢａｎｋ上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒基因序列，设计并合成了２对引物，通过改变不同的反应体系和反应条件，建立ＰＲＲＳＶ经典株和变异株的ＲＴ－ｎＰＣＲ诊断方法，并通过灵敏性试验、特异性试验、病料组织和血清或精液样品检测，验证建立ＲＴ－ｎＰＣＲ方法的适用性。【结果】建立了ＰＲＲＳＶ经典株和变异株的ＲＴ－ｎＰＣＲ诊断方法，该方法检测的ＣＤｎａ含量极限为１．３×１０－７ ＰＧ／μＬ；且仅能从ＰＲＲＳＶ毒株中扩增到目的．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
朱小甫 吴旭锦
【目的】建立一种能够区分猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）经典株和变异株的RTnPCR诊断方法，能够从病料组织、血清或精液中直接进行目的基因检测，达到快速诊断的目的。【方法】根据GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒基因序列，设计并合成了2对引物，通过改变不同的反应体系和反应条件，建立PRRSV经典株和变异株的RTnPCR诊断方法，并通过灵敏性试验、特异性试验、病料组织和血清或精液样品检测，验证建立RTnPCR方法的适用性。【结果】建立了PRRSV经典株和变异株的RTnPCR诊断方法，该方法检测的cDNA含量极限为1.3×10-7 pg/μL；且仅能从PRRSV毒株中扩增到目的条带，...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
秦毅斌 卢冰霞 段群棚 何颖 李斌 梁家幸 苏乾莲 周英宁 蒋冬福 卢敬专 赵武
为建立猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法，根据ＧＥｎ Ｂａｎｋ中公布的ＰＥＤＶ变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株的Ｓ基因和ＯＲＦ３基因，设计合成２对特异性扩增引物，用以扩增ＰＥＤＶ Ｓ基因和ＯＲＦ３基因，通过目的片段的数量和片段大小来判断ＰＥＤＶ的毒株类型；通过对退火温度等反应条件的优化，建立了检测不同ＰＥＤＶ毒株类型的多重ＲＴ－ＰＣＲ鉴别检测方法。结果显示，所建立的多重ＲＴ－ＰＣＲ鉴别检测方法能特异性区分ＰＥＤＶ变异毒株、经典毒株和弱毒疫苗株；ＰＥＤＶ变异毒株扩增出２条目的条带，分别为２３４ ＢＰ的ＯＲＦ３基因片段和８２６ ＢＰ的Ｓ基因片段；ＰＥＤＶ经典毒．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李艳 仇华吉 王秀荣 张守发 朱庆虎 李娜 李国新 童光志
【目的】建立一种能区分猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法。【方法】根据GenBank上登录的现有CSFV基因组全序列,选择高度保守区设计了一对CSFV通用引物,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗和强毒特异性引物,建立了一种能区分猪瘟强毒和弱毒的RT-nPCR鉴别诊断方法。【结果】应用该方法从猪瘟兔化弱毒疫苗和石门强毒株基因组中扩增出了大小分别为447和343bp的一条特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447和343bp的两条特异性片段,但对牛病毒性腹泻病毒和其它常见猪源病...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
吴玉璐 程群 虞凌雪 侯怡轩 王康 刘光清 童光志 周艳君
【目的】利用RT-PCR技术建立一种在临床上便于区分猪流行性腹泻病毒(PEDV)自然感染与疫苗免疫毒株的方法。【方法】根据GenBank公布的PEDV ORF3基因序列,在其存在基因缺失区两端的保守区域设计特异性引物,对近两年采集的仔猪腹泻样品进行检测,分析流行毒株的ORF3基因,选择部分阳性样品利用鉴定引物进行RT-PCR扩增,优化其反应体系、Tm值等条件,进行鉴别诊断方法的特异性、敏感性试验,并对大量临床样品进行检测验证。【结果】从新发仔猪腹泻临床样品中克隆获得了11株PEDV的ORF3基因,序列分析显示新分离的9株ORF3基因不存在缺失,属于自然感染野毒,其与疫苗株的核苷酸同源性为95....
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭抗抗 邓力 井勇 张彦明 王晶钰 宁蓬勃
【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李建侠 刁有祥 刘霞 李宏梅
【目的】建立快速、准确检测鸭副粘病毒病的方法。【方法】根据GenBank中发表的新城疫F基因序列设计1对引物,扩增鸭副粘病毒融合蛋白基因727bp的特异性片段,进行特异性试验和敏感性试验,建立了鸭副粘病毒病的RT-PCR诊断方法。应用建立的诊断方法,对从山东不同地区分离的20株疑似鸭副粘病毒毒株和150份疑似感染副粘病毒鸭的病变组织进行了检测。【结果】特异性试验表明,建立的RT-PCR检测方法能够从鸭副粘病毒SDFCH株中扩增到727bp的特异性片段,而对鸭瘟病毒、H9N2亚型禽流感病毒、鸭肝炎病毒的扩增结果均为阴性;敏感性试验表明,该法最低检出量的cDNA质量浓度为3pg/μL;山东不同地区...
关键词：
鸭 副粘病毒 RT-PCR
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
吕世华 罗秦 刘学军 张福锁
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吴旭锦 朱小甫
【目的】建立一种基于E0基因高保守性的猪瘟病毒（CSFV）RT-nPCR检测方法，为临床诊断提供一种可靠方法，同时对获得的陕西猪瘟病毒E0基因进行序列分析，揭示猪瘟病毒基因的分子衍化特征，为防控猪瘟提供参考。【方法】根据GenBank中的猪瘟病毒参考序列，设计并合成了2对引物，建立猪瘟RT-nPCR检测方法，并对该方法的灵敏度和特异性进行检测。用该方法对采自陕西部分猪场的32份疑似猪瘟病料进行检测，并对获得的8株流行毒株E0基因进行测序及同源性分析。【结果】建立了猪瘟病毒RT-nPCR检测方法，该方法检测CSFV cDNA含量的最低极限为6.7×10-5 ng/L，从BVDV、PRRSV、PC...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吴旭锦 朱小甫
【目的】建立一种基于E0基因高保守性的猪瘟病毒(CSFV)RT-nPCR检测方法,为临床诊断提供一种可靠方法,同时对获得的陕西猪瘟病毒E0基因进行序列分析,揭示猪瘟病毒基因的分子衍化特征,为防控猪瘟提供参考。【方法】根据GenBank中的猪瘟病毒参考序列,设计并合成了2对引物,建立猪瘟RT-nPCR检测方法,并对该方法的灵敏度和特异性进行检测。用该方法对采自陕西部分猪场的32份疑似猪瘟病料进行检测,并对获得的8株流行毒株E0基因进行测序及同源性分析。【结果】建立了猪瘟病毒RT-nPCR检测方法,该方法检测CSFV cDNA含量的最低极限为6.7×10-5 ng/L,从BVDV、PRRSV、PC...
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵同科 曹云者 张国印 李广敏
采用多点氮肥单因素多水平试验研究了河北省不同土壤类型不同地力水平条件下,冬小麦拔节期茎基部 NO_3~-含量与产量的相关关系,发现拔节期茎基部 NO_3~-浓度随施肥水平的提高呈直线增加。小麦拔节期茎基部NO_3~-含量与其收获期籽实产量密切相关,在土壤肥力高中低三种不同条件下,相应最高产量分别为 7639,6762,4241 kg/hm~2,最高产量之氮肥施用量分别为 207,194,100 kg/hm~2,相应拔节期植株茎部的 NO_3~-含量分别为1600,1145,671 mg/kg,较好地显示了氮肥的丰缺临界浓度。研究表明,在河北省冬小麦主产区,冬小麦拔节期茎基部NO_3~-含量可以...
关键词：
冬小麦 植株诊断 氮肥推荐 施肥 指标
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吴旭锦 朱小甫
【目的】对新城疫(ND)国标RT-PCR诊断方法进行改进和优化,建立一种灵敏度高、特异性好、能直接从组织病料中进行目的基因检测的NDV套式RT-PCR(nest RT-PCR,RT-nPCR)方法。【方法】根据GenBank上发表的新城疫病毒基因序列,设计并合成了2对引物,通过筛选最佳RT-nPCR条件,建立了NDV RT-nPCR检测方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料检测对比试验等,验证了RT-nPCR方法的可靠性和适用性。【结果】建立的NDV RT-nPCR方法灵敏度较高,检测的极限为5.6×10-5 ng/L;特异性较好,仅能从NDV中扩增到目的条带。从6份疑似组织病料中能直接检测出...
关键词：
新城疫 诊断方法 RT-PCR
[期刊] 水产学报
[作者]
李新辉 吴淑勤 李凯彬 白俊杰 潘厚军 罗建仁 简清
从RAPD扩增的鳜鱼病毒 (SCV)核酸电泳带中回收了二个片断 ,克隆子pUC19质粒 (称为SCVE36 9和SCVE45 0 )。序列分析表明插入片段分别为 36 9bp和 45 0bp与GenBank序列没有显著的同源。根据克隆序列设计两对引物P1/ P2 和P3 /P4 ,在健康鳜鱼、病鳜以及提纯的SCV核酸中进行PCR试验。结果表明 ,P1/P2 组引物在SCV基因组中扩增出特异性核酸片段 ,可作为鳜鱼病毒PCR诊断 ,检测片段为 36 9bp。
关键词：
鳜 鳜鱼病毒 多聚酶链反应 快速诊断
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
徐雪 高冬生 王川庆 陈陆 杨霞 皇甫和平 刘慧敏 郑鹿平 杨猛 张金来 李昆明 张九洲
【目的】建立基于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的反转录-复合PCR方法,为IBV流行毒株和呼吸型疫苗株的分型鉴定提供技术支持。【方法】根据IBVN基因序列设计合成1对特异性通用引物,建立IBV的分子生物学检测方法,用以对IBV进行检测。通过对GenBank上公布的IBVS1基因全序列的分析比对,找出呼吸型疫苗株和地方肾型流行毒株相对保守的差异序列,设计合成2对引物,建立可以对这2类IBV毒株进行鉴别的反转录-复合PCR方法,同时对该方法的敏感性和重复性进行检测,并对该方法进行了实际应用。【结果】建立了区别IBV肾型毒株和呼吸型毒株的分型方法,该方法敏感性好,能检出经106稀释后的基因组...
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