蛋白质组学研究的瓶颈问题之一是低丰度蛋白的检测,这些低丰度蛋白往往发挥多种重要的生理功能,如细胞防御、基因表达调节、信号传导等,因此低丰度蛋白的检测尤为重要。在双向电泳试验时,有2个因素限制了低丰度蛋白的检测:第一,IPG胶条的上样量有限;第二,高丰度蛋白的位置效应(王旭,2007)。例如,植物叶片中高丰度蛋白Rubisco含量超过50%(Gutteridge et al.,1995),这些高丰度蛋白的存在影响低丰度蛋白的分析。应用PEG分级提取法对水稻(Oryza sativa)叶片蛋白提取发现,

天冬氨酸蛋白酶在天女木兰种子萌发过程中发挥着重要作用。以天女木兰种子为试验材料,利用同源克隆法RACE技术,从天女木兰种子中克隆得到天冬氨酸蛋白酶基因,全长1 545 bp,可以编码514个氨基酸残基。同源性分析显示,目的序列推导的氨基酸序列与其它植物中已知的天冬氨酸蛋白酶基因的氨基酸序列的同源性都在85%以上;采用生物信息学的方法进行分析,初步预测该基因编码的蛋白属于跨膜的分泌蛋白,大部分区域属于疏水结构;结构域的预测分析显示,此类蛋白包含约100个植物组织蛋白酶所特有的区域,该区域可能在植物液泡中发挥着重要作用。本研究为下一步系统、全面地研究天女木兰种子休眠的分子机理奠定了基础。

【目的】探索一套适用于天女木兰种子蛋白的双向电泳体系,为研究其种子萌发过程中的蛋白表达差异奠定基础。【方法】比较蛋白的不同提取方法(酚提取法、三氯乙酸-丙酮-酚提取法、三氯乙酸-丙酮法和Tris-HCl法)、IPG胶条pH梯度(pH3～11NL、pH3～10和pH4～7)、裂解液中的尿素浓度(6,7,8,9mol/L)和分离胶浓度(10%和12.5%)等条件,对天女木兰种子蛋白双向电泳结果的影响,筛选适宜的双向电泳条件。【结果】以Tris-HCl法提取种子蛋白,在IPG胶条pH为4～7、裂解液中尿素浓度为9mol/L、分离胶浓度为12.5%的条件下,可以获得分辨率高、背景清晰、重复性好的天女木...

为寻找一种廉价、快捷的方法选育转谷氨酰胺酶(MTG)菌株,采用平板稀释法分离土壤放线菌,根据转谷氨酰胺酶催化反应结果的特性,设计了一种蛋白质交联—絮凝沉淀性能测定方法对分离菌株进行复筛,用比色法测定MTG酶活,并用插片法进行复筛菌株的初步鉴定。结果表明:从土壤中分离出16株放线菌,经复筛后有6株放线菌产生沉淀,即具有MTG酶活性,且其中LH-011的MTG酶活最大,达0.76u·mL-1。经初步鉴定,6株放线菌均属于放线菌科链霉属。可见,用蛋白交联—絮凝沉淀性能测定的方法可以筛选出产MTG菌株。

【目的】对斜卧青霉转录调控因子Hac1进行染色质免疫共沉淀(CHIP)试验,为其调控机制及生物学功能研究奠定基础。【方法】以斜卧青霉为材料,DTT诱导转录调控因子Hac1表达,用交联Buffer处理菌丝,使Hac1与靶基因交联,超声破碎染色质后,进行解交联染色体检验,研究不同交联时间(5,10,20,30,40min)、不同菌丝用量(10mL CHIP缓冲液中分别添加0.25,0.50,1.00,1.50g菌丝)及不同超声功率(15,20,25,30 W)、超声时间(1,3,5s)、超声间隔时间(10,2

【目的】黑水（粪污废水）污染物质量浓度高，较难处理，并且容易导致水体富营养化，同时黑水中氮磷元素含量高，具有很高的资源回收和利用价值。对体积小且氮、磷质量浓度高的黑水单独收集处理，更容易实现资源化利用。目前对氮磷资源的回收处理主要集中在养殖废水领域，鲜少有对居民黑水进行单独回收氮磷资源的研究，且多数研究处于实验室规模或中试规模，如何在无害化处理黑水的同时，尽可能回收黑水中可再生资源是我们研究的重点。【方法】本研究利用磷酸铵镁沉淀法回收黑水中氮磷元素，通过单因素试验、正交试验比选、吸附材料试验、扫面电镜和XRD图谱分析。【结果】1）最佳的回收工艺条件为Mg∶N∶P=1.5∶1∶1,pH值9.5，磷初始质量浓度200 mg·L~(-1)，最佳工艺条件下氨氮回收率为69.14%，磷回收率94.04%；各因子重要程度排序为：磷初始质量浓度>氮磷比> pH值>镁磷比。2）最佳吸附材料为钙基膨润土，静态吸附试验后氨氮和磷的回收率分别为84.37%和98.68%。3）磷酸铵镁沉淀法可有效回收黑水中的高质量浓度氮磷，通过XRD图谱分析可知所得鸟粪石纯度很高，主要成分为MgNH_4PO_4·6H_2O。【结论】采用磷酸铵镁沉淀法与膨润土吸附相结合的方式，氨氮的回收率从最佳试验条件下的69.14%提升到了84.37%，磷的回收率从94.04%升至98.68%。与传统的磷酸铵镁沉淀法或单一的膨润土吸附法相比，该方法能在保证磷的高回收率不变的情况下，提高氨氮的回收率。

为了制备具有高电化学活性和高堆积密度的Ni(OH)2正极材料,以尿素和硝酸镍为原料,采用均匀沉淀法制备了纳米级Ni(OH)2。通过设计正交试验,找出了最佳工艺条件。以红外光谱、XRD和SEM等测试手段,对纳米级Ni(OH)2的粉体结构及形貌进行了研究。结果表明,在95℃以上温度下,n尿素:nNi2+=3∶1时,可得到粒度较细,平均粒径在0 4～0 5μm左右的Ni(OH)2粉体,且收率较高。图6参5

采用酸水解—乙醇沉淀法从柚子白皮中提取果胶,研究提取过程中酸解液pH和醇沉液pH对果胶提取率、色差、粘度、半乳糖醛酸含量和酯化度的影响,并对各指标进行相关性分析,同时通过电镜扫描观察其表观形貌.结果表明:酸解液pH与柚皮果胶的粘度、酯化度呈极显著正相关(P<0.01),与色差、提取率呈极显著负相关(P<0.01),与半乳糖醛酸含量呈显著负相关(P<0.05);醇沉液pH与柚皮果胶的品质特性无显著相关性,但与提取率呈极显著正相关(P<0.01);低酸解液pH和高醇沉液pH有利于提高柚皮果胶的提取率.扫描电子显微镜下观察显示,经真空冷冻干燥的果胶呈比较完整的不规则片状,厚薄度均匀,表面裂纹少.

【目的】黑水(粪污废水)污染物质量浓度高,较难处理,并且容易导致水体富营养化,同时黑水中氮磷元素含量高,具有很高的资源回收和利用价值。对体积小且氮、磷质量浓度高的黑水单独收集处理,更容易实现资源化利用。目前对氮磷资源的回收处理主要集中在养殖废水领域,鲜少有对居民黑水进行单独回收氮磷资源的研究,且多数研究处于实验室规模或中试规模,如何在无害化处理黑水的同时,尽可能回收黑水中可再生资源是我们研究的重点。【方法】本研究利用磷酸铵镁沉淀法回收黑水中氮磷元素,通过单因素试验、正交试验比选、吸附材料试验、扫面电镜和XRD图谱分析。【结果】1)最佳的回收工艺条件为Mg∶N∶P=1.5∶1∶1,pH值9.5,磷初始质量浓度200 mg·L-1,最佳工艺条件下氨氮回收率为69.14%,磷回收率94.04%;各因子重要程度排序为:磷初始质量浓度>氮磷比> pH值>镁磷比。2)最佳吸附材料为钙基膨润土,静态吸附试验后氨氮和磷的回收率分别为84.37%和98.68%。3)磷酸铵镁沉淀法可有效回收黑水中的高质量浓度氮磷,通过XRD图谱分析可知所得鸟粪石纯度很高,主要成分为MgNH4PO4·6H2O。【结论】采用磷酸铵镁沉淀法与膨润土吸附相结合的方式,氨氮的回收率从最佳试验条件下的69.14%提升到了84.37%,磷的回收率从94.04%升至98.68%。与传统的磷酸铵镁沉淀法或单一的膨润土吸附法相比,该方法能在保证磷的高回收率不变的情况下,提高氨氮的回收率。

为了解天女木兰种子后熟期间生理生化变化,探讨解除种子休眠机理及寻找种子快速催芽技术提供参考和依据,将天女木兰种子分别用250mg/L赤霉素(GA3)溶液和清水浸种48h,然后进行室外自然低温层积、室内低温层积(5℃)和室内人工控制变温层积(5℃、20d和10～15℃、10d交替变换)催芽处理。在层积过程中定期取样测定天女木兰种子的胚长占种子长的比例、呼吸速率、过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性、可溶性糖含量等指标。结果表明:采用GA3浸种变温(10～15℃和5℃)层积处理有利于种胚的生长发育;GA3浸种变温处理能提高种子内过氧化氢酶、过氧化物酶的活性,促进种子中可溶性糖含量升高,并能促使形态后熟提...

从天女木兰(Magnolia sieboldiiK.Koch)种子的形态、种皮电镜观察、种子各部分抑制物质的生物测定和种子成熟过程中激素含量的变化等方面研究种子的休眠特性。结果表明:天女木兰种子秋季采收后其种胚尚未发育完全,是导致天女木兰种子深休眠的主要原因,但其种皮透性良好;种子不同部位存在不同程度的发芽抑制物质,主要存在于假种皮和胚乳中;种子成熟时胚乳中高浓度的ABA、IAA及低浓度的GA3是导致种子休眠的又一原因。

为了解花饮料中化学沉淀的本质 ,寻求防止花饮料产生沉淀的方法和措施 ,试验对复合花饮料生产中所用的浸提液、多道过滤液及成品中可能导致沉淀的蛋白质、单宁、果胶及矿质元素等成分进行了跟踪分析。结果表明 ,引起花饮料产生沉淀的主要成分是蛋白质、单宁和果胶 ,且蛋白质、单宁、果胶的沉淀具有明显相关性 ,而小分子有机物和矿物质不会引起花饮料产生沉淀 ;在浸提时加入 0 .15 g/ kg蛋白酶、0 .2 5 g/ kg果胶酶 ,可使蛋白质和果胶彻底分解 ;在浸提液中加入 0 .6 0 g/ kg聚乙烯吡咯烷酮可去除单宁 ,同时结合超滤可充分防止花饮料产生沉淀。

【背景】随着规模化、集约化生产程度的不断提高，养殖过程中饲养空间受限、冷热环境不适等因素常使猪处于应激状态。内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）可能是最早期的应激反应，与细胞凋亡、代谢等方面有密切联系。肝脏是机体的主要代谢器官，猪养殖过程中由于人工操作（如断奶）、饲料霉变、温度变化和吸入有害气体等因素都会造成猪肝脏的ERS，不仅会造成肝脏损伤，还会引发肝脏的脂肪代谢紊乱和广泛的炎症反应，影响生产性能和繁殖性能。因此，深入探讨缓解ERS的有效措施，有助于减少猪养殖过程中的隐性损失。【目的】利用免疫沉淀联合质谱技术，从猪肝星状细胞中筛选在ERS条件下与葡萄糖调节蛋白94(GRP94)相互作用的细胞蛋白，为进一步探讨GRP94对猪肝星状细胞生物学功能的保护作用机理奠定基础。【方法】首先将GRP94抗体固定在谷胱甘肽亲和磁珠上，用亲和磁珠与ERS条件下或正常条件下猪肝星状细胞总蛋白进行孵育，与GRP94诱饵蛋白结合的蛋白复合物洗脱收集后，进行SDS-PAGE凝胶电泳验证。将验证成功的样品洗脱液进行液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测，鉴定出正常条件和ERS条件下GRP94的互作蛋白。运用生物信息学在线软件对筛选的互作细胞蛋白进行GO富集、KEGG信号通路注释和蛋白互作网络分析，并对其中的互作蛋白之一波形蛋白（vimentin）进行免疫共沉淀验证。【结果】筛选到正常条件下与GRP94存在互作关系的蛋白146个，ERS条件下与GRP94存在互作关系的蛋白76个，在两种情况下都存在互作关系的蛋白44个。ERS条件下有互作关系的76个蛋白质主要参与凋亡过程负调控、肽段交联、泛素依赖型ERAD(endoplasmic reticulum associated degradation)过程和过氧化氢分解代谢等过程。其中参与凋亡过程负调控的GRP94互作蛋白有albumin、catalase、filament A、heat shock protein family A member 5、keratin 18和prohibin 2，说明GRP94可能与这些蛋白共同发挥抗凋亡作用。除此之外组成中间丝纤维的vimentin蛋白参与多个GO富集的通路，可能与GRP94有重要的互作关系。进一步的免疫共沉淀试验也证实，ERS条件下vimentin和GRP94之间确实存在互作关系。此外，某些ERS条件下特异性表达的GRP94互作蛋白（如peroxiredoxin、death inducer obliterator 1、catalase、glandular kallikrein、pyruvate kinase等）与抗凋亡有密切联系。【结论】ERS条件下，猪肝脏GRP94互作蛋白主要参与抗凋亡、对未折叠蛋白进行折叠和维护细胞内稳态相关的信号通路。该结论为下一步开展GRP94参与肝脏ERS调控机制的研究打下基础。

研究了金属Al3+沉淀茶多酚净化茶叶基质的条件,探索茶叶中呋虫胺、烯啶虫胺、噻虫嗪、吡虫啉、噻虫胺、氯噻啉、啶虫脒和噻虫啉烟碱类农药多残留的液相色谱测定方法。茶叶经乙腈提取,以200 g·L-1AlCl3为沉淀剂,并用1 mol·L-1NaOH调节pH值,再经Carb-PSA柱净化,乙腈洗脱,最后用甲醇-水(体积比为1∶9)溶解,高效液相色谱紫外检测器检测,验证该方法的可行性。结果表明:在添加0.1~1.0 mg·kg-1的水平下,除烯啶虫胺外,7种烟碱类农药的平均回收率为75%~110%,相对标准偏差(RSD)≤12.3%。本方法操作简单,可满足茶叶中烟碱类农药多残留分析的要求。

[目的]吸附法去除水中氨氮通常是采用固体吸附剂吸附后采用固液分离法去除。本文采用具有一定可溶性的天然高分子物质与水中氨氮结合,形成可溶的结合物,然后采用沉淀剂一步沉淀去除的新方法,探索其影响因素。[方法]以天然植物多酚类物质Y(以下简称"植物多酚Y")为吸持剂,以硫酸铁为沉淀剂,研究了模拟的氨氮废水的p H值、初始氨氮浓度、温度、植物多酚投加量和共存阳离子等因素对吸持沉淀法去除氨氮的影响。[结果]在含单一氨氮的模拟废水中植物多酚Y对氨氮吸持量在本试验条件下可高达到31.9 mg·g(-1),模拟计算最大吸