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年份: 2022(1); 2018(2)

作者: 丽(2); 何(2); 刘(2); 李(2); 淑(2); 王(2); 上官(1); 云(1); 亮(1); 冯(1); 君(1); 哨(1); 唐(1); 奇(1); 孙(1); 宇(1); 巧(1); 张(1); 忠(1); 斌(1); 易(1); 春(1); 春华(1); 晓(1); 最(1); 有(1); 杨(1); 松(1); 果(1); 柱(1)

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PEDV CH-HeB14株S1蛋白表达及其多克隆抗体的制备

[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版) [作者] 唐青海李晓蓉杨海黎露陈果亮何丽芳刘最王芳宇

【目的】制备猪流行性腹泻病毒（PEDV）CH-HeB14毒株S1蛋白的多克隆抗体，为 PEDV 新流行毒株诊断试剂盒和疫苗研制提供基础材料。【方法】利用RT-PCR扩增PEDV CHHeB14毒株S1基因，对序列特征进行生物信息学分析，用PCR将S1基因截成不同片段（S1A、S1B、S1C、S1C-1和S1C-1），分别克隆至原核表达载体pET28a,转化BL21(DE3)构建重组表达菌株；用IPTG诱导重组蛋白表达，并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。将表达蛋白与佐剂乳化制

关键词：猪流行性腹泻病毒 S1蛋白多克隆抗体

广西部分地区猪群PEDV N基因克隆及序列分析

[期刊] 西南农业学报 [作者] 许瑞胜何奇松李春英冯淑萍易春华韦达有胡丽萍黄胜斌胡巧云熊毅马琳

【目的】了解广西区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染及病毒的遗传变异特点,为更好防控猪流行性腹泻提供科学依据。【方法】应用RT-PCR方法从2012-2016年广西地区25个猪场收集的PEDV病料中扩增出86株PEDV的N基因,并进行序列比对及遗传进化分析。【结果】86株PEDV的N基因核苷酸同源性为94.2%100.0%,与参考毒株核苷酸同源性为94.1%100.0%。N基因遗传进化分析显示广西的PEDV可分为2个群,Cluster2由韩国株DR13、日本株83P-5、中国株CH/S以及本研究的GP35

关键词：猪流行性腹泻病毒 N基因序列分析遗传进化分析

IL20RB、ATP6V0A1和STX10基因对PRRSV和PEDV的增殖作用

[期刊] 华中农业大学学报(自然科学版) [作者] 王金玉上官爱哨孙玉梅蒋金河刘忠柱张淑君

为了明确IL20RB、ATP6V0A1和STX10基因对猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）和猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）的增殖作用，利用CRISPR/Cas9技术在PK15-CD163-Cas9细胞和IPEC-J2-Cas9细胞（笔者所在实验室前期制备）中分别敲除这3个基因，用PRRSV感染基因敲除的3种细胞（PK15-CD163-Cas9-ATP6V0A1、PK15-CD163-Cas9-IL20RB和PK15-CD163-Cas9-STX10），荧光定量PCR检测PRRSV的ORF7基因表达水平，分析PRRSV增殖情况；用PEDV感染基因敲除的3种细胞（IPEC-J2-Cas9-ATP6V0A1、IPEC-J2-Cas9-IL20RB和IPEC-J2-Cas9-STX10），荧光定量PCR检测PEDV的N蛋白基因表达水平，分析PEDV增殖情况。结果显示，在3个基因分别被敲除的PK15-CD163-Cas9-ATP6V0A1、PK15-CD163-Cas9-IL20RB和PK15-CD163-Cas9-STX10细胞中病毒基因ORF7表达水平均显著低于未敲除基因的细胞（PK15-CD163-Cas9-NC，对照组），在3个基因分别被敲除的IPEC-J2-Cas9-ATP6V0A1、IPEC-J2-Cas9-IL20RB和IPEC-J2-Cas9-STX10细胞中PEDV的N蛋白基因表达水平均显著低于未敲除基因的细胞（IPEC-J2-Cas9-NC，对照组），表明敲除这3个基因对PRRSV和PEDV增殖均具有显著的抑制作用，ATP6V0A1、IL20RB和STX10对PRRSV和PEDV增殖均具有重要调控作用。

关键词：基因敲除 CRISPR/Cas9技术猪繁殖与呼吸综合征病毒猪流行性腹泻病毒

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