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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李晓琳 郭华 刘子臣 段滇宁 张亚群 韩俊源 张书霞
选取6头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原及抗体均为阴性的普通断奶仔猪,无菌取脾脏,制成单个细胞悬液进行体外培养,并分为PCV2组和对照组,PCV2组用PCV2与脾细胞共同培养,对照组加等量RPMI-1640培养液。分别于培养0、6、12、24和48 h后收取悬浮的淋巴细胞,用间接免疫荧光法检测PCV2感染淋巴细胞的情况,相对定量RT-PCR法检测淋巴细胞中TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA的表达量,Western blot检测TLR3和TLR4的蛋白表达情况。结果显示:PCV2感染后,TLR2和TLR9 mRNA的表达量在1...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
韩惠利 张书霞 施旅娟
选用4头猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取脾脏,分离淋巴细胞,分为对照组和试验组进行体外培养。试验组在培养体系中加入一定量的PCV2。分别在培养后的0、2、4、6、12、24、36和48 h收获淋巴细胞。用电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳对细胞凋亡进行定性测定,用流式细胞术对细胞周期和细胞凋亡率进行定量测定,同时测定了凋亡相关蛋白半胱天冬酶3(Caspase-3)的表达情况。结果显示,PCV2作用后不同时间,DNA电泳均呈现出具细胞凋亡特征的梯形条带;电镜下出现细胞凋亡各期的形态学变化。从培养后4 h开始,试验组淋巴细胞凋亡率...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
华利忠 陈耿 张书霞
选用5头猪圆环病毒2型(PCV2)及猪呼吸和繁殖综合征病毒(PRRSV)抗体阴性普通断奶仔猪,无菌分离脾脏淋巴细胞和巨噬细胞(macrophage,M),分别以PCV2和PCV2+M与淋巴细胞相互作用,同时设M和淋巴细胞对照组。培养0、6、12、24 h后分别收取各组淋巴细胞,用流式细胞术对细胞凋亡率进行测定,半定量RT-PCR法测定淋巴细胞Fas和FasLmRNA的转录情况。结果显示:PCV2+M组的淋巴细胞凋亡率在24 h时显著高于其他3组(P<0....
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
段滇宁 郭华 李晓琳 陈萌萌 张亚群 韩俊源 张书霞
选取8头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗原、抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取其脾脏制成单细胞悬液后,随机分为4组:对照组、NF-κB抑制剂组(抑制剂组)、PCV2组和NF-κB抑制剂-PCV2组(抑制剂-PCV2组),体外培养24 h后收获淋巴细胞及培养上清液。ELISA方法检测培养上清液中IL-4和IL-12的含量;间接免疫荧光定位检测PCV2感染淋巴细胞的情况和核因子κB(NF-κB)蛋白入核情况,Western blot定量检测细胞浆中髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化抑制性核因子кB(p-IкB)及NF-κB/p65和细胞核中NF-κB/p65蛋...
[期刊] 水产学报
[作者]
樊廷俊 史振平
利用PEG介导的细胞融合方法 ,将已成系的牙鲆鳃细胞与中国对虾淋巴细胞进行细胞杂交 ,对所获得的杂交细胞用MEM∶MPS( 1∶1)混合培养液进行体外培养。培养 5天后发现 ,杂交细胞长成了单层 ,传代培养后仍可继续生长和分裂。通过逐渐提高混合培养液中MPS的所占比例所筛选出的杂交细胞 ,目前已传 12代 ,生长和分裂势头仍然十分旺盛。通过接种对虾杆状病毒发现 ,10天后杂交细胞出现了明显的病变特征 (细胞收缩变圆、脱落、死亡 ) ,至 14天细胞便几乎完全脱壁死亡。取病变细胞的培养上清 0 .3mL再加入到一瓶已长成单层的杂交细胞中 ,结果 5天后杂交细胞也出现了明显的病变特征 ,而未接种病...
关键词：
牙鲆 中国对虾 杂交细胞 体外培养
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王桂芹 芦洪梅 韩宇田 牛小天 李子平 赵朝阳 秦贵信
【目的】探讨丙氨酰-谷氨酰胺(Ala-Gln)对免疫抑制和应激建鲤体外培养淋巴细胞增殖的调控作用。【方法】通过对建鲤注射环磷酰胺和皮质醇来建立免疫抑制和应激模型,以注射生理盐水为对照,分离头肾、脾脏和外周血淋巴细胞进行体外培养,测定培养液中不同浓度Ala-Gln(0.0,2.0,4.0,6.0,8.0和10.0mmol/L)对淋巴细胞转化率的影响。【结果】免疫抑制模型及应激模型中,建鲤头肾、脾脏和外周血的淋巴细胞转化率均显著低于对照组(P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
华利忠 张书霞 孙运 代蕾 陈耿 吕春子
为探讨猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染仔猪的淋巴结和脾脏淋巴细胞内钙信号变化在细胞凋亡中的作用,选取19头PCV2抗原和抗体均为阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分成对照组(4头)和试验组(15头),试验组仔猪通过滴鼻接种PCV2,并于接种后14、21和35 d分别扑杀5头,对照组仔猪滴鼻同量PBS后当天扑杀。所有仔猪扑杀时均取腹股沟淋巴结及脾脏,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光分光光度法检测细胞内Ca2+浓度,孔雀绿比色测定法检测Ca2+-ATP酶的活性,荧光定量RT-PCR检测钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA转录水平。结果表明:所有接种病毒仔猪腹股沟淋巴结及脾脏细胞凋亡率均极显著高...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘永祥 崔锦 程伟 朱宽佑 姜东风
【目的】研究日粮中添加共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)对仔猪外周血T淋巴细胞的细胞毒活性影响，为将CLA作为免疫调节剂调控动物机体的免疫力和应用于畜禽乃至人类的营养实践提供参考。【方法】30头21日龄杜长大断奶健康仔猪按体质量相近、性别比例一致原则两两配对，随机分为对照组和CLA日粮组，分别喂给基础日粮和2%CLA日粮，每组5个重复，每个重复3头猪，63日龄时用肝素抗凝真空管前腔静脉采取血样，测定外周血T淋巴细胞亚群、细胞毒活性、穿孔素和颗粒酶B mRNA表达及脂肪酸组成。【结果】日粮添加CLA不影响仔猪外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+的数量(P＞0.0...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李晓亮 李翔 张征 雷治海
[目的]本文旨在研究神经介素U(NMU)对猪外周血淋巴细胞(PBL)的免疫调节作用。[方法]以小梅山猪为研究对象,用半定量RT-PCR方法研究了猪PBL中NMU及其受体(NMUR1和NMUR2)基因的表达,用免疫组织化学染色方法检测了猪PBL中NMU及其受体蛋白的分布,用Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞计数法研究了NMU对猪PBL细胞和NK细胞活性的影响。[结果]NMUR1 mRNA在猪PBL中表达,NMU和NMUR1蛋白在猪PBL的胞膜及胞浆均有分布。用不同浓度(0.01、0.1
[期刊] 中国农业科学
[作者]
施旅娟 韩惠利 张书霞
【目的】了解PCV-2感染仔猪后,病毒在腹股沟淋巴结中的位置、凋亡细胞的类型及其两者之间的关系。【方法】选用9头32日龄PCV-2抗体阴性的普通断奶仔猪,随机分为3组,即对照组、PCV-2攻毒组(PCV-2组)、PCV-2攻毒后再用钥匙孔血蓝蛋白(KLH)刺激组(PCV-2+KLH组),每组3头。感染后32d采集腹股沟浅淋巴结制作石蜡切片。采用免疫组织化学方法对病毒进行定位,用末端标记法(TUNEL)进行细胞凋亡的定位测定,并用流式细胞法对细胞周期和细胞凋亡进行定量检测。【结果】PCV-2组和PCV-2+KLH组仔猪淋巴结的主要病变为皮质和副皮质区淋巴细胞严重缺失,上皮样巨噬细胞浸润,巨噬细胞...
[期刊] 农业现代化研究
[作者]
李丽立 张彬 朱南山 印遇龙 彭慧珍 邱细敏 唐志如
为探讨多糖对早期断奶仔猪淋巴细胞增殖与细胞因子的影响,选用21d龄健康杜×长×大断奶仔猪(5.30±0.25kg)25头,随机分为5个组,每组5头,分别饲喂玉米-豆粕型基础日粮(CR)、基础日粮+0.3%白术纯多糖(PPAM)、基础日粮+0.6%复合粗多糖(CCP)、基础日粮+0.6%白术粗多糖(CPAM)、基础日粮+抗生素(15%金霉素150mg/kg+4%黄霉素50mg/kg)(ANT),试验期为14d。结果显示:PPAM、CCP能提高血清中TNF的含量(P<0.05),同时PPAM、CCP、CPAM也有提高淋巴细胞增殖和IL-2的趋势。表明饲料中添加PPAM、CCP能够有效提高早期断奶仔...
[期刊] 华北农学报
[作者]
朱南山 张彬 李丽立 侯德兴
本试验研究了白术多糖对仔猪血淋巴细胞转化率及细胞内信息分子一氧化氮(NO)、环腺苷酸(cAMP)、环鸟苷酸(cGMP)及干扰素γ(IFN-γ)的影响。分离制备仔猪血淋巴细胞悬液,MTT法检测细胞增殖;酶联免疫法测定培养上清液IFN-γ的浓度;放射免疫法测定cAMP、cGMP的浓度;利用硝酸还原法测定NO,发现白术多糖能显著促进仔猪血淋巴细胞转化率I、FN-γ、细胞内NO浓度及cAMP浓度。以上结果提示,白术多糖能显著提高血淋巴细胞免疫功能,其作用是通过改变细胞内信息传导实现的。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周传丽 刘铮铸 俞英 张勤
【目的】阐明产肠毒素大肠杆菌F18(ETEC F18)引发仔猪腹泻的机理,针对其候选基因FUT1的CDS区第307位点处的突变(G→A),建立3个仔猪小肠黏膜上皮细胞系(GG、GA和AA)。【方法】首先以胎鼠和仔猪为试验材料,确定小肠上皮细胞的最佳分离方法。采用XI型胶原酶和I型中性蛋白酶的联酶混合液,将胎鼠小肠组织机械剪碎后用联酶进行消化和直接将联酶灌注到仔猪小肠腔内消化的两种方法进行比较。针对仔猪小肠黏膜上皮细胞体外培养过程中成纤维细胞污染难以消除的问题,本研究采用局部画圈法逐步去除成纤维细胞。最后,用电镜和CK18免疫荧光染色对纯化后的原代仔猪小肠黏膜上皮细胞进行鉴定。【结果】两种小肠上...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
郭松林 关瑞章 冯建军
探讨鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验的最优条件,为鳗鲡的细胞免疫研究提供方法。通过对培养时间、培养温度、小牛血清和刀豆蛋白A(ConA)浓度4个参数的测定,初步确定了鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的培养条件。结果表明,在培养时间60 h和68 h,培养温度为18.0℃、24.0℃、30.0℃,RPMI细胞培养液中小牛血清浓度为5%、10%和15%,ConA浓度为0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL的范围内,淋巴细胞于18.0℃、含10μg/mL ConA和15%小牛血清的营养液中培养68 h后可获得相对最好的淋巴细胞转化效果。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张姣姣 王怡 张会琼 孙思 孙燕 王鲜忠 张家骅
【目的】确定FSH是否能调节支持细胞cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达及可能的机制。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用实时荧光定量PCR检测cyclinD1 mRNA和cyclin E1 mRNA的相对表达量。【结果】不同浓度的FSH(0—100 ng.mL-1)均可促进cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达(P
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