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[期刊] 中国农业科学  [作者] 施旅娟  韩惠利  张书霞  
【目的】了解PCV-2感染仔猪后,病毒在腹股沟淋巴结中的位置、凋亡细胞的类型及其两者之间的关系。【方法】选用9头32日龄PCV-2抗体阴性的普通断奶仔猪,随机分为3组,即对照组、PCV-2攻毒组(PCV-2组)、PCV-2攻毒后再用钥匙孔血蓝蛋白(KLH)刺激组(PCV-2+KLH组),每组3头。感染后32d采集腹股沟浅淋巴结制作石蜡切片。采用免疫组织化学方法对病毒进行定位,用末端标记法(TUNEL)进行细胞凋亡的定位测定,并用流式细胞法对细胞周期和细胞凋亡进行定量检测。【结果】PCV-2组和PCV-2+KLH组仔猪淋巴结的主要病变为皮质和副皮质区淋巴细胞严重缺失,上皮样巨噬细胞浸润,巨噬细胞...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 华利忠  张书霞  孙运  代蕾  陈耿  吕春子  
为探讨猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染仔猪的淋巴结和脾脏淋巴细胞内钙信号变化在细胞凋亡中的作用,选取19头PCV2抗原和抗体均为阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分成对照组(4头)和试验组(15头),试验组仔猪通过滴鼻接种PCV2,并于接种后14、21和35 d分别扑杀5头,对照组仔猪滴鼻同量PBS后当天扑杀。所有仔猪扑杀时均取腹股沟淋巴结及脾脏,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光分光光度法检测细胞内Ca2+浓度,孔雀绿比色测定法检测Ca2+-ATP酶的活性,荧光定量RT-PCR检测钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA转录水平。结果表明:所有接种病毒仔猪腹股沟淋巴结及脾脏细胞凋亡率均极显著高...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 韩惠利  张书霞  施旅娟  
选用4头猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取脾脏,分离淋巴细胞,分为对照组和试验组进行体外培养。试验组在培养体系中加入一定量的PCV2。分别在培养后的0、2、4、6、12、24、36和48 h收获淋巴细胞。用电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳对细胞凋亡进行定性测定,用流式细胞术对细胞周期和细胞凋亡率进行定量测定,同时测定了凋亡相关蛋白半胱天冬酶3(Caspase-3)的表达情况。结果显示,PCV2作用后不同时间,DNA电泳均呈现出具细胞凋亡特征的梯形条带;电镜下出现细胞凋亡各期的形态学变化。从培养后4 h开始,试验组淋巴细胞凋亡率...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 华利忠  陈耿  张书霞  
选用5头猪圆环病毒2型(PCV2)及猪呼吸和繁殖综合征病毒(PRRSV)抗体阴性普通断奶仔猪,无菌分离脾脏淋巴细胞和巨噬细胞(macrophage,M),分别以PCV2和PCV2+M与淋巴细胞相互作用,同时设M和淋巴细胞对照组。培养0、6、12、24 h后分别收取各组淋巴细胞,用流式细胞术对细胞凋亡率进行测定,半定量RT-PCR法测定淋巴细胞Fas和FasLmRNA的转录情况。结果显示:PCV2+M组的淋巴细胞凋亡率在24 h时显著高于其他3组(P<0....
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 李晓琳  郭华  刘子臣  段滇宁  张亚群  韩俊源  张书霞  
选取6头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原及抗体均为阴性的普通断奶仔猪,无菌取脾脏,制成单个细胞悬液进行体外培养,并分为PCV2组和对照组,PCV2组用PCV2与脾细胞共同培养,对照组加等量RPMI-1640培养液。分别于培养0、6、12、24和48 h后收取悬浮的淋巴细胞,用间接免疫荧光法检测PCV2感染淋巴细胞的情况,相对定量RT-PCR法检测淋巴细胞中TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA的表达量,Western blot检测TLR3和TLR4的蛋白表达情况。结果显示:PCV2感染后,TLR2和TLR9 mRNA的表达量在1...
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 刘玉锋  佘锐萍  李慧姣  梁明珍  彭芳珍  
为探究IBDV强毒BC6 / 85株感染SPF鸡后 1~ 9d内法氏囊淋巴细胞中Bcl 2和Bax蛋白的动态表达与淋巴细胞凋亡的关系 ,通过透射电镜观察及TUNEL法检测凋亡的淋巴细胞 ,用免疫组织化学方法检测Bcl 2和Bax蛋白。研究结果表明 :感染后 3~ 5d可见到大量凋亡的淋巴细胞 ,Bcl 2和Bax蛋白表达量显著高于同时点的对照组 (P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 刘永祥  崔锦  程伟  朱宽佑  姜东风  
【目的】研究日粮中添加共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)对仔猪外周血T淋巴细胞的细胞毒活性影响,为将CLA作为免疫调节剂调控动物机体的免疫力和应用于畜禽乃至人类的营养实践提供参考。【方法】30头21日龄杜长大断奶健康仔猪按体质量相近、性别比例一致原则两两配对,随机分为对照组和CLA日粮组,分别喂给基础日粮和2%CLA日粮,每组5个重复,每个重复3头猪,63日龄时用肝素抗凝真空管前腔静脉采取血样,测定外周血T淋巴细胞亚群、细胞毒活性、穿孔素和颗粒酶B mRNA表达及脂肪酸组成。【结果】日粮添加CLA不影响仔猪外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+的数量(P>0.0...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 郁晓梅  聂其灼  
采用组织学和酶组织化学方法对16头猪的空肠淋巴结、腹股沟浅淋巴结和颈浅背侧淋巴结的组织结构进行了综合研究.结果表明,猪淋巴结组织结构并不完全属于皮质和髓质倒置,而是皮质可以位于外周,髓质可以位于中央,通常是皮质沿小梁分布.皮质由淋巴小结和弥散性淋巴组织构成;髓质无明显的髓索和髓窦,淋巴细胞数量少,T、B 淋巴细胞的分布类似于其他哺乳动物;树突状细胞、交错镶嵌型细胞、巨噬细胞和网状细胞的形态、分布以及组化反应也与其他哺乳动物相似.此外,在髓质中还发现一种特殊的网状细胞.
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 张传茂  聂其灼  
应用光镜和透射电镜技术对17头猪的淋巴结髓质进行了研究.结果显示:猪淋巴结的化质主要由粗细两种网状纤维及常与其伴行的成纤维型风状细胞和特殊型网状细胞、淋巴细胞和浆细胞、巨噬细胞以及一种强嗜酸伊红性的颗粒细胞组成,但其中淋巴细胞和浆细胞的数量远少于其他哺乳动物淋巴结髓质.无明显的髓素,髓窦小且不明显.
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 张传茂  聂其灼  
报道了猪淋巴结内一种特殊的嗜伊红性颗粒细胞(暂定名)的超微结构和几种酶的电镜细胞化学特征.该细胞主要分布于猪淋巴结的髓质和皮质一髓质交界区,呈圆形或椭圆形,核也呈圆形或椭圆形,细胞质中含有较多的特殊颗粒,其它类型的细胞器较少.特殊颗粒有单层膜包裹.内容物电子致密度高,Mg2+-腺苷三磷酸酶(Mg2+-ATPase)、酸性磷酸酶(ACPase)、非特异性脂酶(NSE)、5'-核苷酸酶(5'-AMPase)细胞化学反应均呈阳性.Mg2+-ATPasc主要定位于细胞膜,ACPase均匀分布于特殊颗粒内,NSE分布在特殊颗粒膜和颗粒内,5'-AMPase主要定位于颗粒膜。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 段滇宁  郭华  李晓琳  陈萌萌  张亚群  韩俊源  张书霞  
选取8头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗原、抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取其脾脏制成单细胞悬液后,随机分为4组:对照组、NF-κB抑制剂组(抑制剂组)、PCV2组和NF-κB抑制剂-PCV2组(抑制剂-PCV2组),体外培养24 h后收获淋巴细胞及培养上清液。ELISA方法检测培养上清液中IL-4和IL-12的含量;间接免疫荧光定位检测PCV2感染淋巴细胞的情况和核因子κB(NF-κB)蛋白入核情况,Western blot定量检测细胞浆中髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化抑制性核因子кB(p-IкB)及NF-κB/p65和细胞核中NF-κB/p65蛋...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 韩志涛  李金磊  陈红英  王淑娟  耿静微  翟阿官  魏战勇  崔保安  
【目的】了解猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对PK-15细胞抗病毒相关因子转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】运用荧光定量PCR技术,测定和分析PCV-2感染PK-15细胞后0(未接种病毒),1,6,12,24,48,72 h时病毒DNA含量及细胞因子IFN-βI、FN-γI、FNAR-1I、FNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、MX1、NOS、RNaseL和IRF-3 mRNA转录水平的变化。【结果】PCV-2感染PK-15后1 h就可以检测到病毒DNA,在感染后24 h病毒开始大量迅速增殖,于感染72 h时达到最高峰。与0 h相比,PCV-2感染后IFN-βI、RF-3的...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 吕琼霞  张书霞  赵茹茜  
为研究运输应激对猪肠系膜淋巴结中IL-2、IL-6、IL-10及其受体mRNA转录的影响,并探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和核因子κB(NF-κB)对其转录的调控作用,用荧光定量RT-PCR方法对肠系膜淋巴结中3种细胞因子及其受体mRNA进行定量检测,用ELISA方法检测猪肠系膜淋巴结组织匀浆液中P38MAPK含量的动态变化,用激光扫描共聚焦显微镜观察运输前后NF-κB在肠系膜淋巴结细胞中的分布。结果显示:经1、2和4 h的运输应激,肠系膜淋巴结中3种细胞因子的转录均发生了显著变化,且均是4 h时达到最大值,并极显著高于对照组、1 h组和2 h组(P<0.01),而其相应受体的...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 孙岩  胡健  温俊歌  郜原  薄联锋  徐志坤  吴耀丽  张德礼  
【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段...
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 陈明勇  陈德威  高齐瑜  张冰  
研究了传染性法氏囊病病毒 (IBDV)变异 E株人工感染体外培养法氏囊细胞的凋亡。电镜观察和DNA电泳分析表明 ,IBDV感染后 4~ 2 4 h,法氏囊培养细胞呈现典型细胞凋亡的形态学特征和生化特征。经流式细胞计检测、荧光染色观察和统计学分析表明 ,IBDV感染后 4~ 2 4 h,法氏囊培养细胞凋亡数量显著增加 (P
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