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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
汪明 孔繁瑶 肖兵南 董海涛 张长弓
采用 RAPD 方法对水牛梭形住内孢子虫、待定种及黄牛枯氏住内孢子虫缓殖子基因组 DNA 进行了分析,待定种 PCR 产物的电泳带型与枯氏住肉孢子虫的差异较梭形住内孢子虫大,这与二者表型性状一致的研究结果不吻合.对3种包囊种特异性的 PCR 指纹进行了筛选,回收和纯化了3种包囊种特异性的 DNA 片段,待定种0.7kb 片段经α-~(32)PdATP 标记后用作探针,只与同源 DNA 杂交,不与其它包囊、宿主细胞和艾美耳球虫杂交,用 pGEM-T Easy Vector 对该片段克隆成功,并测出其全长序列,为进一步设计特异引物建立标准 PCR 诊断方法和用作核酸探针奠定了基础。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘群 蒋金书
采用 RAPD 技术对 E.tenella 早熟株、鸡胚株、亲本毒抹和田间分离的抗药株进行研究,发现本研究选育的 E.tenella 早熟株与亲本毒株间 DNA 多态性存在着差异,证实该早熟侏已发生了遗传变异,但变异程度不大;而鸡胚株及抗药株却比早熟株的变异程度大。建议 RAPD 技术可用于艾美耳球虫株间差异及其球虫株间关系距离的检测.对经细胞培养的 E.acervulina 早熟株及其毒株和抗药株的基因组 DNA 进行多态性比较研究,发现该3株球虫间的变异程度大于 E.tenella 各虫株间的变异,即不同来源的 E.ac-ervulina 各虫株间的相似性小于 E.tenella 各虫株间...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王彩霞 林祥梅 邓俊花 吴绍强
为适应口岸单孢子虫快速、准确、高通量检测的需求,建立一种基于PCR及焦磷酸测序技术平台的单孢子虫鉴定方法。以OIE推荐的PCR扩增方法获得单孢子虫特异基因,根据此基因的保守序列利用焦测序软件PyroMarkQ96ID设计专用引物进行PCR扩增及焦磷酸测序,测得序列经比对分析确定为单孢子虫序列。同时采用PCR焦磷酸测序方法和OIE推荐的PCR方法对牡蛎样品进行检测。结果表明,所建立的检测方法可从基因序列水平上准确鉴定牡蛎样品中的单孢子虫,且检测结果与OIE方法的检测结果一致。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
汪明 刘海虹 陈刚 肖兵南
利用电镜下包囊的超微结构从绵羊鉴别出3种住肉孢子虫,它们是巨型住肉孢子虫、绵羊犬住肉孢子虫、羯犬住肉孢子虫。巨型住肉孢子虫的包囊壁由次生壁和原囊壁组成,原囊壁形成的突起呈花椰菜样,突起内含有管状纤丝和致密颗粒。绵羊犬住肉孢子虫的原囊壁向表面形成栅栏样的突起,突起内无纤丝和致密颗粒。羯犬住肉孢子的原囊壁向表面皱褶形成条带状突起,突起内无纤丝,含少量致密颗粒。在绵羊体内还发现一待定种,其原囊壁向表面形成指形突起,突起内不含纤丝和致密颗粒。
关键词：
住肉孢子虫属 超微结构 绵羊
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李建华 张西臣 尹继刚 杨举 李德昌
本研究应用聚合酶链反应(PCR)建立了一种检测人及牛粪便中隐孢子虫卵囊 DNA 的方法.以蔗糖梯度离心法纯化鼠源 C.muris 卵囊;甘油漂浮-G_3耐酸漏斗过滤法纯化牛源 C.muris、牛源 C.parvum 和鼠源C.parvum 卵囊.结果发现甘油漂浮-G_3耐酸漏斗过滤法纯化隐孢子虫卵囊具有纯度高、回收率达96%、介质便宜及操作简便等优点.纯化卵囊经液氮冻融后按常规法提取 DNA 作为 PCR 模板.根据 GenBank 中C.muris 和 C.parvum 18SrRNA 基因序列,应用计算机辅助设计合成一对 PCR 引物(上游引物:5′-AAACCCAACTTTGCG...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张长弓 肖兵南 周望平 雷梦珍
运用对流免疫电泳(CIE)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对梭形住肉孢子虫和巨型住肉孢子虫的包囊壁、包囊液、缓殖子及全色囊抗原的免疫特性进行了比较研究。结果表明:缓殖子抗原对抗血清的免疫反应最强.
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
汪明 刘海虹 马俊华 肖兵南 张守发
依据电镜下包囊的超微结构从黄牛肌肉中鉴别出 3种住肉孢子虫 :枯氏住肉孢子虫、毛形住肉孢子虫和人住肉孢子虫。枯氏住肉孢子虫超微结构的特点是 ,原囊壁向表面突出形成倒伏的指形突起 ,突起内无纤丝、微管和致密颗粒。毛形住肉孢子虫与人住肉孢子虫的年轻包囊很难区别 ,其包囊突起均为栅栏样构造 ,突起内有纤丝 ,而老包囊在毛形住肉孢子虫与人住肉孢子虫之间有明显区别 ,前者突起的壁平滑 ,突起内有纤丝 ,而后者突起壁呈波浪形 ,突起内有微管和致密颗粒
关键词：
住肉孢子虫属 超微结构 黄牛
[期刊] 中国农业科学
[作者]
扈鸿霞 马宇轩 王艳红 林峻 李占武 季荣
【目的】建立一种灵敏、快捷的检测蝗虫微孢子虫（Ｐａｒａｎｏｓｅｍａ ｌｏｃｕｓｔａｅ）的套式Ｐｃｒ方法，为运用微孢子虫防治蝗虫提供技术支持。【方法】以ＧｅｎＢａｎｋ数据库中公布的保守性高的微孢子虫小核糖体亚单位ｒｎａ为目的基因，采用Ｐｒｉｍｅｒｓｅｌｅｃｔ软件设计两对特异的套式Ｐｃｒ引物Ｐ．ｌ．－Ｆ１／Ｐ．ｌ．－ｒ１和Ｐ．ｌ．－Ｆ２／Ｐ．ｌ．－ｒ２，将微孢子虫液用０．２ ｍｏｌ·ｌ～（－１） ｋｏＨ处理后得到的发芽液作为模板进行Ｐｃｒ扩增，建立以Ｐ．ｌ．－Ｆ１／Ｐ．ｌ．－ｒ１为外侧引物、Ｐ．ｌ．－Ｆ２／Ｐ．ｌ．－ｒ２为内侧引物的套式Ｐｃｒ，扩增产为分别为２９８和２４２ ＢＰ。对引物浓度、退火温．．．
关键词：
蝗虫微孢子虫 套式PCR 检测
[期刊] 中国农业科学
[作者]
肖淑敏 李国清 李韦华 周荣琼 杨建伟
【目的】建立牛源环孢子虫套式PCR检测方法并初步应用于临床检测。【方法】根据牛源环孢子虫18S rDNA序列,设计1对保守引物和1对特异性引物,建立牛源环孢子虫套式PCR检测方法。通过阳性参照摸索出该检测方法的最佳反应条件,进行特异性和敏感性试验。并对168份临床样品进行了检测。【结果】该套式PCR能特异性地扩增出牛源环孢子虫基因组DNA中相应片段,与艾美耳球虫、隐孢子虫、贾第虫等10种相关原虫基因组DNA无交叉反应;最低能检测到2.85×10-2fg的阳性参照DNA;对临床样品检测结果表明PCR技术检查阳性者显微镜检查都为阳性。【结论】建立的套式PCR方法具有高度的特异性和敏感性,有较好的临...
关键词：
环孢子虫 奶牛 套式PCR 检测
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杨娜 邢蒙恩 王大为 吴元华
以采自辽宁省某屠宰场2 063头猪的血清和心脏组织为试验材料,采用改良凝集试验(MAT)对血清进行定量检测和弓形虫虫株分离,结果显示:2 063份猪血清中阳性血清(滴度≥25)共计233份,阳性检出率为11.3%;选取阳性抗体滴度≥100所对应的67份猪心脏组织进行弓形虫虫株分离,结果从猪心脏组织中共分离出23株弓形虫虫体,分离率为34.3%。此结果提示,辽宁地区猪弓形虫感染率较高,对该地区人们的健康存在潜在威胁。
关键词：
弓形虫 猪 虫株分离 MAT PCR
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘明远 徐克成
由中国人民解放军农牧大学、东北农业大学、首都医科大学、中国医科大学及军事医学科学院协作攻关,对我国不同地域及不同动物的旋毛虫分离株,从生物学特性和基因方面,进行了全面系统的鉴定与分析,在国内首次对我国旋毛虫分离株进行了确切的种类鉴定,结果显示在我国已有的12株旋毛虫分离株中存在2个旋毛虫种,即 Trichinella spiralis 及 T.nativa,从而为我国旋毛虫流行病学、诊断及疫苗等基础研究提供了坚实理论基础与实验基础。日前意大利国际旋毛虫鉴定与保藏中心传来最新消息,由我国自行
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
周春娜 谢辉 马以桂 王金成 李云 徐春玲
运用PCR技术,实现了对相似穿孔线虫单条虫ITS区域的扩增,通过基因测序以及与GenBank中rDNA序列的比较,结果显示GFCh、HANh、GZll和GZlbs 4个种群的序列与GenBank中Radopholus similisThrone序列具有高度同源性。聚类分析表明,这4个种群可能有着不同的地理来源。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋慧群 张德林 廖申权 翁亚彪 林瑞庆 朱兴全
【目的】首次对中国来源于不同宿主、不同地域的9个弓形虫虫株(ZS1人株、PY猪株、GY猪株、ZC猪株、NT猪株、ZS人株、SH人株、CN猪株、QHO绵羊株)以及国际标准强毒RH株之间在529bp重复序列的变异进行研究,从而为进一步的分子诊断和分子遗传学研究以及弓形虫病的防制奠定基础。【方法】抽提基因组DNA后,用PCR方法对10个虫株的529bp重复序列进行扩增;扩增产物经纯化后克隆于pGEM-TEasy质粒载体,再经菌落PCR及酶切鉴定阳性克隆,然后对阳性克隆进行测序及序列分析。【结果】10个弓形虫虫株的529bp重复序列都不完全相同,它们之间的核苷酸序列变异范围为0.8%～2.9%。变异主...
[期刊] 水产学报
[作者]
习丙文 李鹏 陈凯 章晋勇 谢骏
鲫养殖中粘孢子虫病非常严重，为掌握其病原的感染传播途径，实验通过粘孢子虫生活调查研究，在底栖寡毛类苏氏尾鳃蚓体内发现了一种放射孢子虫。该放射孢子虫的孢子无孢柄；孢体顶面观和侧面观都呈近卵圆形，长（１９．８±１．３）μｍ，宽（１８．２±１．１）μｍ；３个极囊梨形，呈点状聚集分布在孢体顶端，极囊长（４．５３±０．４）μｍ，宽（３．４±０．４）μｍ；３个尾柄几乎等长，刺状，从孢体基部向下伸展，尾柄间夹角＞１００°，尾柄长（１９５．０±１５．７）μｍ，宽（１１．５±０．８）μｍ。根据形态特征将其划归为橘瓣放射孢子虫集合类群。１８Ｓ ｒ ＤＮＡ序列分析表明该放射孢子虫与鲫体表寄生武汉单极虫为同一物种，序．．．
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