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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王莉 黄亚楠 郭满园 苏彦华
［目的］本研究以水稻‘日本晴’为遗传转化受体材料，利用ＲＮＡｉ技术对水稻气孔调控型钾吸收通道ＯｓＫＡＴ３进行功能研究。［方法］通过将ＯｓＫＡＴ３与拟南芥和水稻中的ＫＡＴ类钾通道进行同源性比对，找到编码此蛋白基因Ｃ端的一段特异区域，并用于ＯｓＫＡＴ３ ＲＮＡｉ表达载体的构建。设计含有相应酶切位点的引物扩增该特异片段，以ＯｓＫＡＴ３作为模板进行ＲＮＡｉ－ＯｓＫＡＴ３顺式和反式目的片段的ＰＣＲ扩增。经菌落ＰＣＲ鉴定挑选阳性克隆后送测序，测序结果表明：ＲＮＡｉ－ＯｓＫＡＴ３顺式和反式目的片段均已正确连接到Ｐ ＭＤ１９－Ｔ载体上，分别利用ｓＡＣⅠ／ｓＰｅⅠ和ＢＡＭ ＨⅠ／ＫＰＮⅠ酶切ＲＮＡｉ－ＯｓＫＡＴ．．．
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
姜晶 李晓媛 王楚 王芳 姜静
【目的】查耳酮合成酶(CHS)是黄酮类化合物生物合成途径中的关键酶,其高表达可以促进黄酮类化合物积累,增强植物抵抗盐碱、干旱等非生物胁迫的能力,开展转BpCHS3白桦耐盐性分析,为阐明该基因的功能提供参考。【方法】以前期获得的转BpCHS3白桦为试材,进行转基因白桦qRT-PCR及Northern Blot检测,同时测定了叶片中花青素质量分数。NaCl胁迫处理下,分别测定转BpCHS3白桦的盐害指数、叶绿素荧光参数及光合参数。采用qRT-PCR技术,测定转基因株系的类黄酮代谢途径中CHS下游5个关键酶基因以及BpCHS家族成员相对表达量。【结果】qRT-PCR及Northern Blot检测显示,导入的目标基因BpCHS3在mRNA水平能够表达。转基因白桦组培生根苗在0.3%NaCl胁迫第25天,对照(WT)株系盐害指数高达83%,而转基因白桦平均盐害指数仅为39%;白桦转基因盆栽苗在0.4%NaCl胁迫后,叶绿素荧光参数及光合参数测定显示,NaCl胁迫第9天多数转基因株系最大光化学效率(F_v/F_m)仍为正常值,而WT株系降至0.66,胁迫第9天时实际光化学效率(Φ_(PSII))和光化学猝灭系数(qP)呈下降趋势,但WT株系的降幅高于转基因株系;NaCl胁迫6 d时,5个转基因株系的净光合速率(P_n)平均值仍高于WT的43.47%。认为盐胁迫下BpCHS3基因在白桦中的过量表达能够维持其较高的光电子传递活性,提高PSⅡ反应中心原初光能转换效率,同时也能维持较高的净光合效率。分别以转BpCHS3白桦cDNA为模板qRT-PCR分析显示,相对WT株系CHS下游的5个关键酶基因在转基因株系中均呈不同程度的上调表达,BpCHS家族成员中只有BpCHS3表达量显著上调,而BpCHS1和BpCHS2均呈下调表达或与WT株系差异不显著。BpCHS3过表达株系花青素质量分数分析发现,转基因白桦叶片中花青素质量分数均显著低于WT株系,推测BpCHS3的过量表达,对另外2个CHS家族成员产生共抑制,且影响花青素的合成。【结论】转BpCHS3白桦的耐盐性提高,与花青素质量分数多少无关,BpCHS3的过表达可能促进其他黄酮类化合物的积累,从而增强白桦的耐盐能力。
关键词：
白桦 BpCHS3 遗传转化 耐盐性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张德涛 彭正凯 曹琦琦 杨媚 郑丽 周而勋
【目的】研究筛选出的芽孢杆菌(Bacillus sp.)NB12、伯克霍尔德菌(Burkholderiasp.)SD7、卡特拉链霉菌(Streptomyces katrae)NB20在水稻植株上的定殖能力,以及在离体叶片、苗期和分蘖盛期对水稻纹枯病的防治效果。【方法】NB12和SD7两菌株用利福平(Rif)进行抗药性标记,筛选到抗300μg/mL Rif的抗药性菌株用于定殖试验;水稻离体叶片试验用5mm菌丝块接种,苗期和分蘖盛期试验用带菌谷粒接种。【结果】定殖试验结果表明,SD7和NB12菌株在水稻叶片上能以较高密度定殖,第20天仍能检测到106 CFU/g的标记菌株,且10d后在新生叶片中也...
关键词：
拮抗菌 水稻纹枯病 定殖 防治效果
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘影 田振东 宋波涛 柳俊 谢从华
基于马铃薯StERF3超量表达载体转基因株系中出现了部分矮化植株,通过基因表达量检测、组织切片分析和转基因试管苗添加外源生长调节剂等方面对矮化原因进行了初步探讨。结果表明:矮化株中StERF3基因表达比对照降低;矮化株木质部和薄壁细胞明显变小,栅栏组织和海绵组织较致密;培养基中添加0.5mg/mL GA3能够使矮化株明显增高,但添加IAA效果不明显;转基因矮化株含有3～4个拷贝,多拷贝导致了目标基因的沉默;在干涉株系中StERF3基因表达比对照降低,但并未出现矮化株;推测植株矮化并不是由于StERF3表达量引起,很可能是由于多拷贝插入导致与GA3合成或其调控有关基因受到干扰引起。
[期刊] 中国林业科学研究院
[作者]
刘苍伟
通过木质素基因工程能够有效降低杨木细胞壁木质素含量,从而改善人工林杨树作为木质纤维材料的利用现状。细胞壁关键组分木质素含量的变化对转基因杨木组织细胞微观构造以及对细胞壁其它重要化学成分的影响则具有重要研究意义。因此本论文选取转C3H基因银腺杨84K(Populus alba×P.glandulosa cv`84k')和非转基因银腺杨84K为实验材料,利用光学显微镜和电子显微镜观测了两类杨木组织细胞形态特征和木纤维形态参数的差异;利用乙酰溴法、热解-气相色谱/质谱联用和傅里叶变换红外光谱法测定和分析了转基因
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
姚国新 张强 吴建涛 胡广隆 李自超
水稻长芒是从野生稻保留下来的性状,通过人工选择培育的现代品种一般都是无芒类型。到目前为止,还没有关于控制芒的基因精细定位和克隆的报道。本实验利用国家种质资源库中有芒的亲本SLG与无芒亲本日本晴构建回交近等基因系(NILs)群体,从BC4F2回交分离群体中,选择出有芒和无芒呈3∶1分离的群体,从中选择杂合BC4F2单株构建BC4F3定位大群体。利用分离群体分组混合分析法(BSA法),筛选均匀分布水稻染色体组上1 512对SSR标记,将芒基因定位在第3染色体RM6283和RM5685之间,命名为AWN3-1。通过设计和筛选多态性标记,进一步将AWN3-1定位在Y5和Y9标记之间,遗传距离分别为0....
关键词：
水稻 芒 NIL 基因定位
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
黄建平 熊立仲
为探明水稻响应低温的分子机制，改良水稻对低温的抗性，从水稻低温诱导表达谱中挑选了１个受低温诱导的基因ＯｓＬＣＬ３，通过实时定量ＰＣＲ和启动子驱动ＧＵｓ报告基因转化水稻的方法验证其功能。对ＯｓＬＣＬ３进行同源蛋白搜索，发现它属于ＤＵＦ７６１超家族，并对这个超家族中的部分蛋白序列进行了系统树分析；通过水稻原生质体瞬时表达系统，初步确定ＯｓＬＣＬ３蛋白定位于细胞核和细胞质中。在水稻中超量表达ＯｓＬＣＬ３基因，并对转基因植株进行低温胁迫处理，发现超量表达ＯｓＬＣＬ３的植株在低温胁迫下的电导率显著低于野生型对照植株，胁迫后超量表达植株的存活率显著高于野生型对照植株。结果表明，ＯｓＬＣＬ３可能在水稻对低温．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘南南 张文伟 江玲 沈文飚 翟虎渠 万建民
从栽培水稻品种越光中克隆了水稻脂氧合酶-3基因(Lox-3)的启动子,长度为1343bp,其序列与日本晴对应的序列完全相同。生物信息学分析表明,该启动子序列中包含受信号诱导的元件(G-box)、温度响应元件(CCGAAA)和水分胁迫响应元件(CACATG)等顺式作用元件;进一步构建了Lox-3基因启动子与gus和gfp基因的融合表达载体并获得转基因植株,发现报告基因在转基因植株的根、茎、叶、花药、种胚及种皮中均有表达,在萌发种子的胚和胚芽中也有表达,但在胚乳中不表达。此外,经ABA、NaCl及人工陈化处理后对报告基因的表达进行了定量分析,发现这些非生物胁迫可能通过诱导启动子顺式元件致使报告基因...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
胡颖 王春台 覃永华
水稻Os VDAC3是编码一个可能12次跨膜的线粒体基因,芯片数据显示该基因在水稻根和花器官中表达最强,并受干旱、盐及多种激素显著诱导.以T1代Os VDAC3超表达转基因植株为材料,实时荧光定量PCR技术检测植株中基因Os VDAC3的表达水平,筛选超表达家系进行盐胁迫和甘露醇胁迫试验,结果显示超表达Os VDAC3能显著增强水稻的抗逆性,表明Os VDAC3是水稻逆境胁迫中的正调控因子.
[期刊] 华北农学报
[作者]
李银水 余常兵 戴志刚 顾炽明 李越 廖星 谢立华 胡小加 秦璐
为了明确粗糙脉孢菌NC-3菌株在水稻秸秆还田上的应用潜力，采用室内培养和盆栽试验相结合的方法，分析NC-3菌株在水稻秸秆上的定殖，对水稻秸秆降解，纤维素、半纤维素、木质素、总酚酸含量以及油菜发芽率和成苗率的影响。结果表明，NC-3菌株能在灭菌的水稻秸秆上迅速定殖(72 h长满菌丝和孢子)。相比无菌水，培养7,14,21 d, NC-3菌株处理的水稻秸秆降解率分别提高2.3,7.3,3.2百分点；秸秆纤维素、木质素以及总酚酸含量分别下降2.0,10.7,10.4百分点，0.7,0.9,1.3百分点和7.6%,6.9%,6.4%。NC-3菌株对水稻秸秆、纤维素、木质素和总酚酸的降解作用主要发生在培养的前14 d(0～14 d),对半纤维素的降解作用在培养14 d后逐渐增强。添加水稻秸秆会显著降低油菜发芽率和成苗率，且随秸秆用量的增加抑制作用增强，但接种NC-3菌株能显著提高油菜发芽率和成苗率(相比无菌水，分别提高3.3,9.7百分点)。总之，接种脉孢菌NC-3菌株能有效加快水稻秸秆降解和酚酸类物质转化，可有效提高油菜发芽率和成苗率。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈正钢 李春俭 张福锁 毛达如
研究了营养液培养条件下，对缺铁菜豆植株进行去顶、涂抹生长素极性运输抑制剂CFM或生长素类物质萘乙酸（NAA）等处理后，其根系还原酶活性的变化情况；同时对缺铁菜豆茎尖可扩散型IAA和茎尖内源生长素进行了测定。结果表明，缺铁菜豆根系Fe3+还原酶活性在处理后第4天有所增加，第6、8天显著提高。缺铁同时去顶或涂抹CFM处理可抑制缺铁菜豆根系Fe3+还原酶活性，而涂抹NAA则可较明显地提高去顶后缺铁菜豆植株根系Fe3+还原酶活性。在缺铁处理后不同天数对缺铁菜豆进行去顶处理，在第7天其根系Fe3+还原酶活性表现为：在0～2日进行处理的植株其根系还原酶活性完全受到抑制；在4～6天处理的植株去顶的抑制作用逐...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
欧阳乐军 李琼华 黄真池 沙月娥 曾富华
【目的】研究潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化及生根的影响,确立抑制农杆菌生长的头孢霉素质量浓度。【方法】以尾巨桉无菌苗茎段为外植体,先后接种于添加不同质量浓度抗生素的愈伤组织诱导培养基、不定芽诱导培养基以及生根培养基上,统计愈伤组织诱导率、不定芽诱导率和不定芽生根率,观察头孢霉素对农杆菌生长的影响。【结果】(1)培养基中的潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,200mg/L时,尾巨桉外植体的愈伤组织诱导率分别为6.7%,12.1%和26.7%;(2)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250mg/L时,不定芽分化受到明显抑制,不定芽诱...
关键词：
尾巨桉 抗生素 愈伤组织诱导 植株再生
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
韩志平 张海霞 张红利 李侠
【目的】分析盐胁迫下黄花菜体内矿质离子含量的变化,为在盐碱地推广种植黄花菜以及利用黄花菜改良盐碱地提供参考。【方法】以山西大同黄花菜为材料,采用营养液水培法,以正常营养液培养为对照,研究不同浓度Ca(NO_3)_2(50,100,150,200,250 mmol/L)胁迫对黄花菜生物量及植株体内矿质离子含量的影响,探讨黄花菜可能的耐盐机制。【结果】随Ca(NO_3)_2胁迫浓度的提高,黄花菜植株生物量显著降低,根系和叶片Ca~(2+)、Na~+、Fe~(2+)、Zn~(2+)及Cl~-含量均呈"升高-降低"的变化规律,Mg~(2+)含量逐渐降低,Cu~(2+)含量无明显变化规律,NO~-_3含量逐渐增加。除Mg~(2+)含量叶片高于根系、Cl~-含量随Ca(NO_3)_2胁迫浓度的提高出现"根叶相当-根低于叶-根高于叶"的变化外,各处理其他矿质离子含量均表现为根系高于叶片。【结论】可在中度(70～150 mmol/L单价盐)以下盐碱地种植黄花菜,扩大其生产规模;通过每年割除地上部逐渐改良盐碱地,使其成为宜耕良田。
关键词：
黄花菜 盐胁迫 矿质离子 耐盐机制
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
范国成 高芳銮 黄美英 谢荔岩 吴祖建 林奇英 谢联辉
为构建携带水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)主要内层衣壳蛋白S3基因和外层衣壳蛋白S8基因的重组杆状病毒,将目的基因(S3和S8)分别亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual多角体启动子(PH)和p10启动子的下游.经酶切和确证性序列测定,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组杆粒rbpFBDS3-S8,采用脂质体转染法,将rbpF-BDS3-S8转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf9细胞包装病毒,PCR筛选鉴定重组病毒.结果表明:Sf9昆虫细胞被侵染72 h后,倒置显微镜下观察到细胞增大,培养液和细胞内出现颗粒状物...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李玉蓉 邹丽芳 武晓敏 杨娟 陈功友
水稻黄单胞菌白叶枯致病变种(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)和稻生致病变种(X.oryzaepv.oryzicola,Xooc)分别引起水稻白叶枯病(bacterialblight,BB)和水稻细菌性条斑病(bacterialleafstreak,BLS),对中国和世界水稻产量造成较大损失。基因组学揭示,Xoo和Xooc不同小种中存在15～30个数量不等的avrBs3/PthA(avr/pth)家族基因。新近研究结果表明,avr/pth基因既是毒性基因,又是寄主植物先天免疫的抑制因子,还是与抗病基因(R)匹配的无毒基因。Xooc中虽然存在avr/pth基因,但...
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