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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王尧尧 李冉 李运生 蒋书东 王勇 时代 岳晓琳 方富贵 李福宝
为探究侧脑室注射Nesfatin-1对雌性大鼠促性腺激素水平及其mRNA表达的影响,对初情期前雌性大鼠的侧脑室注射Nesfatin-1,采用实时荧光定量PCR法检测促黄体素(Luteinizing hormone,LH)和促卵泡素(Folliclestimulating hormone,FSH)mRNA在垂体中的变化,采用酶联免疫分析法检测血清LH和FSH的浓度。结果表明:在初情期前的雌性大鼠中,Nesfatin-1可促进初情期启动、增加卵巢重量、血清LH水平、垂体LH mRNA和FSH mRNA的表达增加(P<0.05);但Nesfatin-1对FSH水平的影响不突出,注射后15min时增加...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王尧尧 李冉 李运生 蒋书东 王勇 时代 岳晓琳 方富贵 李福宝
为探究侧脑室注射ＮｅｓｆａｔｉＮ－１对雌性大鼠促性腺激素水平及其ｍＲＮａ表达的影响，对初情期前雌性大鼠的侧脑室注射ＮｅｓｆａｔｉＮ－１，采用实时荧光定量ＰＣＲ法检测促黄体素（ＬｕｔｅｉＮｉｚｉＮｇ ｈｏＲｍｏＮｅ，Ｌｈ）和促卵泡素（ｆｏＬＬｉＣＬｅｓｔｉｍｕＬａｔｉＮｇ ｈｏＲｍｏＮｅ，ｆｓｈ）ｍＲＮａ在垂体中的变化，采用酶联免疫分析法检测血清Ｌｈ和ｆｓｈ的浓度。结果表明：在初情期前的雌性大鼠中，ＮｅｓｆａｔｉＮ－１可促进初情期启动、增加卵巢重量、血清Ｌｈ水平、垂体Ｌｈ ｍＲＮａ和ｆｓｈ ｍＲＮａ的表达增加（Ｐ＜０．０５）；但ＮｅｓｆａｔｉＮ－１对ｆｓｈ水平的影响不突出，注射后１５ｍｉＮ时增加．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
王磊 李响 柳峰松 刘利平
为评估不同激素诱导花鳗鲡卵巢发育的效果并探究促性腺激素在花鳗鲡发育过程中的作用,实验比较了不同激素组合处理后花鳗鲡性体指数(gonadosomatic index,GSI)的变化,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对处于不同发育阶段雌鱼脑垂体中促性腺激素基因Gt Hα(促性腺激素亚基),LHβ(促黄体生成素亚基)及FSHβ(卵泡刺激素亚基)的表达进行了定量研究。结果发现,鲤脑垂体萃取液(CPE)与人类绒毛膜促性腺激素(h CG)组合能够有效促使雌性花鳗鲡性腺发育成熟,GSI平均达22.9%,与对照组相比差异显著。单独注射雄烯二酮(ADSD)和注射ADSD、CPE、h CG混合制剂诱导效...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李冉 王尧尧 李运生 方富贵 李福宝
【目的】探讨ＮｅｓｆａｔｉＮ－１在大鼠生长轴（下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、肌肉）中的定位及其ｍＲＮａ的表达情况。【方法】对雌性大鼠进行深度麻醉灌注后，采集下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、腓肠肌肌肉组织，放入４％多聚甲醛溶液中固定，采用免疫组化ＰＶ－９０００二步法、ＤａＢ显色技术检测ＮｅｓｆａｔｉＮ－１在生长轴上的分布，另取雌性大鼠断头处死，取相同组织用荧光定量ＰＣＲ方法检测其中ＮｅｓｆａｔｉＮ－１ｍＲＮａ的表达情况。【结果】ＮｅｓｆａｔｉＮ－１主要分布于下丘脑的室旁核、背内侧核、室周核、外侧区、弓状核、视上核、腺垂体、胰腺的胰岛和腺泡及肝脏与肌肉中。平均光密度分析显示，ＮｅｓｆａｔｉＮ－１在室周核．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
张逛 王武 段征宇 桂朗 苏冒亮 牟幸江 张俊彬
为了解金钱鱼促性腺激素受体基因(GtHRs)在金钱鱼性腺发育中的作用,采用反转录PCR(Rt-PCR)与cDNA末端快速克隆(RACE)首次克隆了金钱鱼卵泡刺激素受体(FSHR)和促黄体生成素受体(LHR)的cDNA序列全长。FSHR的cDNA全长2538 bp,编码702个氨基酸,LHR的cDNA全长3315 bp,编码722个氨基酸,它们都含有属于糖蛋白激素受体(GHR)家族的典型跨膜螺旋结构区域(TM helix)。同源性分析显示金钱鱼GtHRs与欧洲鲈的相似性最高,且GtHRs在进化中具有一定的保
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
曹丽萍 丁炜东
促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。本研究通过RT-PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约400 bp的目的序列GnRH,并将其克隆到T载体中,经酶切鉴定、序列测定分析后表明其与尼罗罗非鱼和乌颊海鲷具有较高的同源性,处于同一个进化分支上;而与日本青、金鱼、拟鲤、壁虎等的同源性较低。将此cDNA片段定向克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,转化到大肠杆菌TB1中,0.3M IPTG诱导4 h后成功表达出与预期大小相符的约56 kD的融合蛋白。表明大肠...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
柳学周 徐永江 廖梅杰 潘传燕 王妍妍
采用RACE技术,在圆斑星鲽(Verasper variegatus)脑中克隆到3种GnRH基因的cDNA序列:cGnRH-Ⅱ、sGnRH和sbGnRH。每种GnRH都包括1个信号肽、1个Gly-Lys-Arg连接序列和1个GnRH相关肽。其中,cGnRH-Ⅱ的cDNA全长为568 bp,编码85个氨基酸,ORF为255 bp,5′UTR为141 bp,3′UTR为169 bp。sGnRH的cDNA全长为457 bp,编码90个氨基酸,ORF为270 bp,5′UTR为41 bp,3′UTR为143 bp。sbGnRH的cDNA全长为381 bp,编码98个氨基酸,ORF为294 bp,5′U...
关键词：
圆斑星鲽 GnRH 分子克隆 表达特性
[期刊] 水产学报
[作者]
陈圣毅 柳学周 史宝 徐永江 李晓晓 王珊珊 臧坤
采用同源性克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了条石鲷GtHβcDNA序列,并分析了GtHβmRNA在条石鲷组织中的表达差异和在卵巢发育不同时期的垂体、卵巢、脑中表达水平变化。结果发现,条石鲷FSH cDNA全长554 bp,ORF长363 bp,编码了120个氨基酸,前18个氨基酸为信号肽。条石鲷LH cDNA全长857 bp,ORF长450 bp,编码了149个氨基酸,前24个氨基酸为信号肽。FSH和LH包含了12个保守的半胱氨酸残基(Cys)和一个N-糖基化位点,在LH的第4和第5个Cys之间存在着硬骨鱼类特异性的Cys-Ser-Gly-His(CSGH)区域。同源性比较和进化...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李晓晓 柳学周 史宝 徐永江 王珊珊 刘芝亮 王妍妍
采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,从半滑舌鳎脑垂体中克隆了促性腺激素α亚基(CGα)全长cDNA(GenBank序列登录号:JQ364953)。半滑舌鳎CGα基因全长685bp,其开放阅读框384bp,编码含127个氨基酸的蛋白,N端33个氨基酸为信号肽。半滑舌鳎CGα成熟肽与其他脊椎动物CGα成熟肽结构特征相似,具有10个半胱氨酸残基和两个N-糖基化位点。CGα成熟肽序列分析表明,半滑舌鳎CGα与鲽形目和鲈形目鱼类CGα同源性为60%~70%,与鲤形目鱼类CGα同源性为55%~60%。实时荧光定量RT-PCR结果表明,半滑舌鳎CGαmRNA在被检测的12个组织中均有表达,除头肾和脾...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张金勇 柳学周 史宝 徐永江
采用qRT-PCR方法分析性成熟半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)不同发育时期卵巢卵母细胞的孕酮受体膜组分1(PGRMC1)mRNA的表达,研究发现,在发育Ⅳ期的卵巢,处于第Ⅳ时相的卵母细胞PGRMC1 mRNA表达量最高(P<0.05),表明PGRMC1主要在卵母细胞成熟阶段发挥作用。PGRMC1对HCG调控作用的正向应答效应预示其参与了卵母细胞成熟调控,为进一步探讨PGRMC1在半滑舌鳎繁殖过程的功能提供重要基础资料。
[期刊] 水产学报
[作者]
马广智 林浩然 张为民
采用ＣｄＣｌ２浸没法处理鲤，研究镉对鲤血清促性腺激素（ＧｔＨ）和生长激素（ＧＨ）水平的影响。结果表明：较高浓度镉（ＣｄＣｌ２９ｍｇ／Ｌ）处理引起血清ＧｔＨ水平降低，ＧＨ水平升高；提高水中钙浓度，能使由镉引起的ＧｔＨ水平的降低恢复到正常水平，并对镉引起的ＧＨ水平升高起延迟作用；镉处理使鲤对ＬＨＲＨ－Ａ刺激ＧｔＨ分泌的反应性下降，提高水中钙浓度也不能恢复正常。实验结果提示：镉引起的ＧｔＨ和ＧＨ的变化可能主要是镉干扰了钙的生理作用。
关键词：
镉,鲤,促性腺激素,生长激素
[期刊] 水产学报
[作者]
汪小东 林浩然 谢刚
雄鳗注射 5～ 6次、雌鳗注射 9～ 10次鲤脑垂体匀浆液 (CPE) +人绒毛膜促性腺激素 (HCG)能分别诱导精巢和卵巢发育成熟。在雌雄鳗鲡 ,注射CPE +HCG可显著增加端脑、间脑、中脑和下丘脑mGnRH的含量 ,而对后脑和延髓mGnRH的影响较小 ;注射CPE +HCG增加雄鳗后脑和延髓cGnRH -Ⅱ含量 ,对雌鳗脑区cGnRH -Ⅱ则无显著影响。雌雄鳗鲡每次注射CPE +HCG后 1天 ,血清促性腺激素 (GtH)急剧上升 ,10天后逐渐下降 ,但雌鳗在注射 7次后 10天血清GtH水平仍然显著高于相应对照组。雄鳗注射CPE +HCG 1～ 4次后 ,血清睾酮浓度无显著变化 ;雌...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
曲宪成 崔严慧 周正峰 曲学伟 金一春 胡萍华 尚晓莉 程翠 张开岳 张勇 蒋骄云
利用改进的锚定PCR方法克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)促性腺激素Ⅱβ(GtHⅡβ)亚基基因5′端侧翼序列,并在生物信息学方法分析的基础上构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的GtHⅡβ亚基基因5′端侧翼序列长度为1354bp,其中包括TATA盒、ERE、ARE、PRE、GRE、LHX3、SF-1、Sp1、Pit-1、NF-Y和AP1等可能对GtHⅡβ亚基基因转录调控起重要作用的功能转录因子结合位点;转录起始位点位于-40～10bp。进一步利用PCR方法扩增得到了811bp(-771～+40bp)、601bp(-561～+40bp)、386bp...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈正礼 罗启慧 范光丽 阿依木古丽 方静 潘康成 袁朝富
【目的】探讨雌激素对大鼠小脑内雌激素受体(ER)、神经生长因子(NGF)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达的影响。【方法】运用超敏感的免疫组织化学SP法,以老年SD大鼠小脑为研究对象,通过补充17β-雌二醇对ER、NGF和ChAT在小脑中的表达和分布变化进行研究。【结果】ER、NGF和ChAT免疫阳性反应物分布于小脑的蒲肯野氏细胞层、小脑齿状核、小脑间位核和小脑室顶核,ER阳性产物主要定位于细胞胞浆和突起中,也存在于胞膜和胞核中。老年大鼠小脑皮质及小脑核中ER、NGF和ChAT的表达强度及阳性细胞数量总趋势是显著降低,而补充17β-雌二醇后三种阳性产物的强度和阳性细胞数目显著回升,蒲肯野氏细胞的...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王月影 范光丽 杨国宇 王艳玲 张永德
为了探讨不同发育时期大鼠乳腺中雌激素受体α(Estrogen receptor,ERα)的表达情况,采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的ERα进行了半定量研究。结果表明,妊娠和泌乳期大鼠乳腺组织中的ERα表达水平均低于处女期,且差异显著(P0.05)。表明ERα可能参与了乳腺细胞的发育和凋亡。
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