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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李冉 王尧尧 李运生 方富贵 李福宝
【目的】探讨ＮｅｓｆａｔｉＮ－１在大鼠生长轴（下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、肌肉）中的定位及其ｍＲＮａ的表达情况。【方法】对雌性大鼠进行深度麻醉灌注后，采集下丘脑、腺垂体、肝脏、胰腺、腓肠肌肌肉组织，放入４％多聚甲醛溶液中固定，采用免疫组化ＰＶ－９０００二步法、ＤａＢ显色技术检测ＮｅｓｆａｔｉＮ－１在生长轴上的分布，另取雌性大鼠断头处死，取相同组织用荧光定量ＰＣＲ方法检测其中ＮｅｓｆａｔｉＮ－１ｍＲＮａ的表达情况。【结果】ＮｅｓｆａｔｉＮ－１主要分布于下丘脑的室旁核、背内侧核、室周核、外侧区、弓状核、视上核、腺垂体、胰腺的胰岛和腺泡及肝脏与肌肉中。平均光密度分析显示，ＮｅｓｆａｔｉＮ－１在室周核．．．
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王尧尧 李冉 李运生 蒋书东 王勇 时代 岳晓琳 方富贵 李福宝
为探究侧脑室注射Nesfatin-1对雌性大鼠促性腺激素水平及其mRNA表达的影响,对初情期前雌性大鼠的侧脑室注射Nesfatin-1,采用实时荧光定量PCR法检测促黄体素(Luteinizing hormone,LH)和促卵泡素(Folliclestimulating hormone,FSH)mRNA在垂体中的变化,采用酶联免疫分析法检测血清LH和FSH的浓度。结果表明:在初情期前的雌性大鼠中,Nesfatin-1可促进初情期启动、增加卵巢重量、血清LH水平、垂体LH mRNA和FSH mRNA的表达增加(P<0.05);但Nesfatin-1对FSH水平的影响不突出,注射后15min时增加...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王尧尧 李冉 李运生 蒋书东 王勇 时代 岳晓琳 方富贵 李福宝
为探究侧脑室注射ＮｅｓｆａｔｉＮ－１对雌性大鼠促性腺激素水平及其ｍＲＮａ表达的影响，对初情期前雌性大鼠的侧脑室注射ＮｅｓｆａｔｉＮ－１，采用实时荧光定量ＰＣＲ法检测促黄体素（ＬｕｔｅｉＮｉｚｉＮｇ ｈｏＲｍｏＮｅ，Ｌｈ）和促卵泡素（ｆｏＬＬｉＣＬｅｓｔｉｍｕＬａｔｉＮｇ ｈｏＲｍｏＮｅ，ｆｓｈ）ｍＲＮａ在垂体中的变化，采用酶联免疫分析法检测血清Ｌｈ和ｆｓｈ的浓度。结果表明：在初情期前的雌性大鼠中，ＮｅｓｆａｔｉＮ－１可促进初情期启动、增加卵巢重量、血清Ｌｈ水平、垂体Ｌｈ ｍＲＮａ和ｆｓｈ ｍＲＮａ的表达增加（Ｐ＜０．０５）；但ＮｅｓｆａｔｉＮ－１对ｆｓｈ水平的影响不突出，注射后１５ｍｉＮ时增加．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王琳 方富贵 章孝荣 刘亚 王索路 蒲勇 李运生
取成年SD大鼠的下丘脑、垂体、卵巢组织制成石蜡切片,采用PV-9000两步法免疫组织化学检测GHS-R1a在下丘脑-垂体-卵巢轴上的定位。实时荧光定量PCR检测GHS-R1a mRNA在不同发情周期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴上的表达。结果表明:GHS-R1a主要分布在下丘脑的弓状核、腹内侧核、正中隆起等,腺垂体的嗜色细胞,卵巢的黄体细胞内、卵母细胞、卵巢门间质细胞内。GHS-R1a mRNA在不同发情周期大鼠的下丘脑、垂体中均有表达,且受发情周期的控制,在整个发情周期大鼠的卵巢中均未检测到GHS-R1a mRNA的表达。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
何书海 赵慧英 乐涛 曾伟伟 李燕丽 周旭 张发
为了探索干扰素-γ受体(IFN-γR)和雌激素受体(ER)在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中的相互关系,用免疫组化Max Vision双标法,对正常成年雌性SD大鼠下丘脑、垂体、卵巢中IFN-γR和ER共表达情况及分布特点进行了研究。结果表明,IFN-γR和ER双标记阳性细胞广泛存在于大鼠下丘脑多个核团中,并且也分布在垂体和卵巢组织中;IFN-γR阳性产物主要存在于细胞质中,少数为全细胞着色;ER阳性产物主要存在于整个细胞中,部分为核表达。推测γ-干扰素(IFN-γ)和雌激素在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中,以其各自的受体为介导进行两种物质间的信息传递,以此共同参与机体的神经免疫内分泌调节。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
谷文峰 李新华 刘希颖 胡兰
用RT-PCR扩增含有XhoI/EcoRI酶切位点的Sirt1片段,克隆、测序后,构建真核荧光表达载体pEGFP-N1-Sirt1、脂质体介导转染293细胞,最后利用SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果表明,经脂质体介导重组体pEGFP-N1-Sirt1可成功转染293细胞;转染48h后,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达;SDS-PAGE证明表达的融合蛋白相对分子质量约为41kD。该结果为进一步研究Sirt1在哺乳动物细胞中的作用奠定了基础。
关键词：
Sirt1 基因克隆 真核表达
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈正礼 罗启慧 程安春
目的探讨大豆异黄酮对去卵巢大鼠脾脏IL-2mRNA表达及分布的影响。方法在成功造模60只去卵巢青年大鼠的基础上,分别皮下注射补充大豆异黄酮高、中、低剂量(1.5、1.0、0.5mg·kg-1BW)和溶媒剂,补充至第2、4和6周时每组各宰杀5只,运用原位组织杂交方法,对大鼠脾脏IL-2mRNA的表达和分布变化进行观察。结果IL-2mRNA主要分布于被膜下方的红髓区,在白髓区的脾小结外周、边缘区、动脉周围淋巴鞘外层等处也有分布。大鼠去卵巢后脾脏中IL-2mRNA的表达强度和阳性细胞数目均显著下降,并且随着去除卵巢时间的延长更趋明显;而补充大豆异黄酮高、中、低剂量后,各组IL-2mRNA的表达强度和...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
曹满湖 贺建华 方热军 陈娟
【目的】本试验旨在研究低磷条件下VD3对磷吸收的调节作用。【方法】选择40只断奶后大白鼠(雄),随机分为0.2%(低磷组)和0.6%(正常磷组)两磷(总磷)水平组,每组5个重复,每重复4只大白鼠,试验期7d。试验前6d,每组每只大白鼠肌注VD3代谢抗干忧药物EHDP(二磷酸盐);宰前的12h,每组2只老鼠以600ng/kg.wt剂量注射VD3,为试验组;另2只不注射,为对照组。第7天早晨屠宰、取样。测定血清和骨组织中钙磷及小肠NaPi-Ⅱb载体蛋白mRNA表达量和磷的吸收等指标。【结果】(1)低磷水平对照组骨钙、骨磷分别比正常磷水平低3.33倍(P<0.01)和3.03倍(P<0.01)。两磷...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨洋 李宗帅 董伟韬 胡俊杰 赵兴绪 张勇
[目的]克隆分析绵羊联会复合中心组分蛋白1 (synaptonemal complex central element protein 1,SYCE1)基因,检测其在雄性生殖轴系中的表达,探索SYCE1对雄性动物生殖发育的调控机制。[方法]以雄性绵羊(小尾寒羊)为研究对象,通过RT-PCR技术克隆SYCE1基因序列,并对该序列及其编码的蛋白进行生物信息学分析;利用qRT-PCR、Western blotting技术分析SYC E1在绵羊下丘脑-垂体-睾丸生殖轴及不同发育阶段(40日龄、3月龄和12月龄)睾丸中的表达情况;采用免疫组织化学染色方法检测SYCE1蛋白在不同发育阶段睾丸组织中的分布情况。[结果]核苷酸序列分析表明,SYCE1基因CDS全长972 bp,编码274个氨基酸。进化树结果表明,绵羊SYCE1氨基酸序列与山羊、欧洲普通牛、野牛、白尾鹿等的氨基酸同源性高;不同物种之间同源性分析发现,SYCE1基因在进化中高度保守;qRT-PCR、Western blotting检测结果表明,SYCE1 mRNA及其蛋白在绵羊的下丘脑、垂体、睾丸及附睾组织中均有表达,其中睾丸组织表达量极显著高于其他组织(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
宋爽 崔培 王尧尧 蒋书东 章孝荣 方富贵 李福宝
【目的】探究初情期启动前、启动中、启动后大鼠下丘脑、垂体和卵巢中神经激肽B(Neurokinin B,NKB)的表达变化。【方法】以SD雌性大鼠为研究对象,分别取大鼠的下丘脑、垂体和卵巢组织制作冰冻切片,运用免疫荧光染色法检测SD大鼠下丘脑、垂体和卵巢上NKB的分布。【结果】NKB主要分布于各时期大鼠下丘脑的弓状核、腹内侧核、室旁核、腺垂体以及卵巢的黄体细胞、间质细胞。但NKB在不同时期表达水平不同,在初情期启动前(出生后25d)和启动后(出生后60d)表达最强,在初情期启动中最弱(P<0.05)。同一时期不同核团之间NKB表达水平也不同,初情期启动前和启动中室旁核最强,弓状核次之,腹内侧核最...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
屠云洁 陈国宏 耿照玉 苏一军 王克华
【目的】研究急性冷应激处理时,HSP70基因mRNA在下丘脑、垂体和甲状腺(HPT轴)中的表达规律。【方法】以7日龄皖西白鹅为研究对象,利用实时荧光定量逆转录PCR技术,分析(12±1)℃室温条件下雏鹅HSP70 mRNA在HPT轴中的动态表达规律。【结果】下丘脑HSP70 mRNA转录量在冷应激1.5、6和9h显著升高,其它时间点均恢复到正常水平;在应激结束后6h内HSP70 mRNA转录水平均显著升高,应激结束后6h转录水平最高,随后又迅速下降到室温下的转录水平。垂体HSP70 mRNA转录量在冷应激0.5、1.5、6和12h时显著降低,其它应激时间均升高到应激前的水平,应激结束后0.5、...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杜学海 曹蕊 萧鹏 李伯江 吴望军 刘红林
为研究低氧诱导因子1α(HIF1α)及其下游基因胰岛素样生长因子2(IGF-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在注射孕马血清促性腺激素(PMSG)(促排组)的促排卵巢与注射生理盐水(对照组)的普通卵巢组织中的mRNA转录水平,构建小鼠HIF1α基因真核表达载体,观察其转染的小鼠颗粒细胞中HIF1α基因的表达情况,以探讨HIF1α与小鼠卵泡发育的关系。用荧光定量PCR检测不同处理组织中HIF1α、VEGF及IGF-2 mRNA转录水平,免疫组化技术定位HIF1α在卵泡中的表达,基因重组技术构建HIF1α-pcDNA3.1真核表达载体并将其转染小鼠颗粒细胞,荧光定量PCR与Western blot...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
田光明 范光丽 田海霞 阿依木古丽 张永德 张燕 何玉龙 聂聪 王冠魁 李定强
利用免疫组化SP法,检测了去势及去势后补充雄激素大鼠嗅球中雄激素受体(A ndrogen recep-tors,AR)和神经生长因子(N erve grow th factor,NGF)蛋白的表达情况,探讨了雄激素对嗅球的作用机制。结果表明,睾丸摘除组大鼠嗅球内AR与NGF蛋白的表达显著减少;睾丸摘除并用睾酮替代组大鼠嗅球内2种蛋白的表达接近正常水平。说明去睾丸大鼠由于缺乏内源性雄激素,会引起嗅球内AR和NGF蛋白表达减少,而补充外源性雄激素可缓解或抑制这一变化。
关键词：
雄激素 嗅球 去睾丸 AR NGF
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
陈苹 罗启慧 黄超 李立科 李一帆 陈晓林 刘文涛 陈正礼
【目的】研究大豆异黄酮（Soy isoflavone，SIF）对大鼠肝脏中大麻素1型受体(CB1R)、脂肪酰胺水解酶(FAAH)和二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT1)表达的影响，为ＳＩＦ活性的研究与应用提供参考。【方法】试验选取40只6周龄SD大鼠，随机分为正常组和低、中、高剂量组，每组10只，分别按0,50,250,500 mg/kg的剂量经口灌胃含SIF的羧甲基纤维素钠溶液4周后，麻醉，采血收集血清，全自动生化仪进行血液生化检测。解剖大鼠取肝脏组织制备石蜡切片，HE染色进行病理分析，油红O检测脂滴沉积情
[期刊] 中国农业科学
[作者]
胡艳 徐文娟 刘宏祥 宋卫涛 宋迟 陶志云 单艳菊 李慧芳
【目的】选择生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验模型,3种不同品种鸭胚胎期和出雏早期下丘脑垂体生长轴相关基因的表达规律及其与体重和肝重的相关性。【方法】采用实时荧光定量PCR方法研究鸭13、17、21、25、27胚龄和出雏后7日龄下丘脑生长激素释放激素(growth hormone release hormone,GHRH)与生长抑素(somatostatin,SS)、垂体生长激素(growth hormone,GH)和肝脏生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)与胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)mRNA的表达规律...
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