为探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脓毒血症大鼠肠损伤的影响及对炎症因子表达的影响,选取清洁级SD大鼠30只,体重250300g,随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(SEP组)和N-乙酰半胱氨酸组(NAC组),每组10只;Sham组仅开腹,暴露盲肠,NAC组和SEP组行盲肠结扎穿孔术,再分别静脉给予150mg·kg(-1)NAC和等量生理盐水;3组均于再灌注4h处死大鼠,观察小肠组织病理学结果;ELISA检测血中肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)和D-乳酸浓度;ELISA法和Western blot法检

【背景】双酚A(BPA)广泛应用于塑料材料工业制造，其从塑料制品中渗出，暴露在食物、水、土壤和空气等多种环境介质中，导致动物长期接触，并经过胎盘和母乳传递给后代，干扰动物生长和发育，对动物生长性能和生产效率产生不利影响。N-乙酰半胱氨酸（NAC）作为公认的强效抗氧化剂，能够调节氧化应激、细胞凋亡、炎症等多种病理生理过程。然而，NAC对BPA诱导的猪肾细胞损伤的调节作用尚不清楚。【目的】探究抗氧化剂NAC在BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应中的潜在作用，为NAC在对抗BPA诱导的猪肾细胞损伤中的应用研究提供科学依据。【方法】选取PK15细胞为试验材料，采用相应的抗氧化检测试剂盒分别测定细胞内过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性变化；设置不同浓度NAC(0、2、5和10 mmol·L-1)预处理，并与BPA共处理PK15细胞，CCK-8检测细胞活力以筛选最佳的NAC作用浓度；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测凋亡相关基因（BAX、BCL-2和Caspase3）表达和炎症相关基因（IL-8、IL-6、IL-1β和TNF-α）mRNA相对表达量，蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白（BAX、BCL-2、cleaved-Caspase3）水平；免疫荧光染色检测凋亡细胞数量和核因子κB(NF-κB)核易位。【结果】与对照组相比，BPA处理显著降低了细胞内CAT、T-SOD和GSH-Px活性（P<0.05）。CCK-8结果显示，与对照组相比，BPA显著降低PK15细胞活力，而不同浓度的NAC均能显著促进PK15细胞活力（P<0.05），而NAC预处理抑制BPA诱导增加的炎症相关因子（IL-8、IL-6和IL-1β）mRNA相对表达量，免疫荧光检测NF-κB核易位显示，对照组的NF-κB主要分布在细胞质中，而BPA处理后的NF-κB主要分布在细胞核，NAC预处理明显减少核NF-κB的表达。【结论】NAC显著提高BPA诱导降低的PK15细胞活力，抑制BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应。

[目的]本研究旨在探索叶面喷施N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）对机插水稻缓苗的调节效应。[方法]以常规粳稻‘宁粳7号’为供试品种，于移栽前2d傍晚连续喷施不同浓度NAC；设置4个处理：喷施清水（CK）、20 μmol·L~(-1) NAC（F-NAC_(20)）、200 μmol·L~(-1) NAC（F-NAC_(200)）、2 000 μmol·L~(-1) NAC（F-NAC_(2000)），研究其对水稻分蘖发生、秧苗形态指标（株高、茎基宽、根系形态指标）、叶绿素含量、抗氧化系统（SOD、POD、CAT活性）、AsA-GSH循环（APX和GR活性、AsA和GSH含量）以及MDA、H_(2)O_(2)含量的影响。[结果]NAC显著提高移栽后GR的活性，促进GSH积累，减少H_(2)O_(2)，缓解氧化损伤，维持细胞稳定性，降低MDA含量，使叶绿素降解减少，并显著促进根系生长、伸长，促进秧苗扎根立苗、分蘖发生，显著提高成熟期有效穗数；其中F-NAC_(2000)综合效果较好：栽后2 d时，其与CK相比，GR活性提高6.4%，GSH含量提高92.2%，H_(2)O_(2)减少25.7%，MDA含量降低26.3%，从而减轻光合色素的降解，使叶绿素含量提高19.3%，类胡萝卜素含量提高36.6%，并且使根尖数增加了164.7%，根长提高了101%，根粗增加了26.8%，改善了秧苗栽后生长，栽后7d时单株茎蘖数较CK提高2.3%，成熟期有效穗数比对照多0.4个/株。[结论]叶面喷施NAC能够缓解植伤对机插稻造成的负面影响，缩短缓苗期，促进栽后分蘖发生，其中2000μM效果最好。

探讨外源NO和N-乙酰半胱氨酸对冷藏期间肥城桃果实线粒体抗氧化系统的影响。分别用15μmol/L NO溶液,80 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC,活性氧清除剂)和15μmol/L NO的混合溶液,5μmol/L的c-PTIO(NO清除剂)溶液对肥城桃果实进行浸果处理,测定果实冷藏期间线粒体呼吸、线粒体膜电势、线粒体中丙二醛和活性氧含量及抗氧化酶活性的变化。15μmol/L NO处理显著降低了桃果实线粒体ROS的含量;80 mmol/L NAC-15μmol/

探讨连翘苷对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)增殖及对炎症相关细胞促炎因子和趋化因子基因表达水平的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测连翘苷对鸡胚成纤维细胞DF-1的安全质量浓度为0～125.00μg·mL~(-1),并筛选出最佳的给药方式为：先感染病毒再给药连翘苷.采用半数组织培养感染剂量(TCID_(50))检测MDRV在DF-1细胞中的增殖情况，结果表明，给药24～48 h时，连翘苷能使MDRV滴度极显著下降(P<0.05).综上，连翘苷能抑制MDRV在DF-1细胞中的增殖，并降低细胞炎症因子基因的表达水平，具有良好的抗病毒和抗炎的双活性.

【目的】利用虾青素较强的抗氧化特性,通过探讨黏膜屏障重塑对脂多糖(LPS)诱导的牛子宫内膜细胞炎症的影响,为牛子宫内膜细胞炎的预防和治疗提供理论基础。【方法】培养液中添加1μg·mL~(-1) LPS,培养子宫内膜细胞6 h,检测培养液中炎症因子TNF-α和IL-6含量,建立细胞的体外炎症模型。在此基础上去掉培养液,重新加入含1×10~(-6) mol·L~(-1)虾青素的新鲜培养液,继续培养细胞24 h。对照组为不添加LPS或AST,LPS组为仅添加LPS,AST组为添加LPS和AST。采用ELISA法检测培养液中TNF-α和IL-6炎症因子分泌量以及细胞SOD和CAT酶活性,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,利用免疫荧光染色检测细胞紧密连接蛋白Claudin、CDH1、TJP1的分布情况,利用荧光定量RT-PCR法和Western Blot法分别检测Claudin、CDH1、TJP1基因的m RNA表达水平和蛋白表达水平。【结果】利用1μg·mL~(-1) LPS培养子宫内膜细胞6 h,检测发现培养液中炎症因子IL-6和TNF-α分泌水平显著高于对照组(P<0.05),说明LPS诱导子宫内膜细胞产生炎症反应。与对照组相比,细胞内ROS水平显著增加(P<0.05),SOD和CAT酶活性都显著降低(P<0.05),同时ROS阳性细胞比率显著下降(P<0.05),SOD和CAT酶活性都显著升高(P<0.05)。【结论】虾青素通过降低子宫内膜细胞因炎症反应产生的氧化损伤,减轻炎症导致的子宫内膜细胞紧密连接结构损伤,对子宫内膜的物理免疫屏障起保护作用,为牛子宫内膜炎的预防和治疗提供理论借鉴意义。

【目的】探讨藏猪仔猪肠道N-乙酰谷氨酸合成酶(NAGS)在哺乳期的表达变化。【方法】克隆藏仔猪的NAGS基因,并制备其多克隆抗体,分别采用实时定量PCR和Western blotting方法检测1、7、21、28和35日龄的哺乳藏仔猪空肠和回肠中NAGS mRNA的表达水平和蛋白丰度。【结果】7～35日龄藏仔猪空肠与回肠的NAGS mRNA表达水平(P<0.05)和蛋白丰度(P

为分析小鼠感染牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）诱导的NLRP3炎症小体表达情况及其对病毒复制的影响，选用40只4～6周龄雌性SPF级BALB/c小鼠，随机分成8组，其中BVDV接种小鼠7组，对照1组，每组5只。应用105 TCID50的CP型BVDV腹腔感染小鼠后，分别在感染后0、6、12、24、48、96、168和240h采集小鼠的肠道、脾脏和血液，通过qRT-PCR和Western Blot方法对小鼠十二指肠中NLRP3、IL-1β和Caspase-1分别进行基因及蛋白水平的检测。应用qRT-PCR方法确定不同时间点小鼠十二指肠和血液中的病毒载量，同时于感染后第168h检查十二指肠和脾脏病理组织变化。结果表明：1）小鼠感染BVDV早期（6、12和24h）组织中的NLRP3、IL-1β和Caspase-1基因转录水平逐步升高，48h未见明显变化，同时感染24h时，蛋白表达水平均显著高于对照组（P<0.05）;2）小鼠感染BVDV后期（96、168和240h）NLRP3、IL-1β和Caspase-1的基因转录水平呈现下降趋势，168h时转录和蛋白水平降低最为显著（P<0.05）;3）感染小鼠十二指肠、脾脏和血液的病毒载量均在168h达到高峰；第168h采集的小鼠十二指肠有大量炎性细胞浸润，脾脏淋巴细胞变性和坏死，证明BVDV感染模型成立。综上，NLRP3炎症小体在BVDV感染早期被激活，然而，随着病毒载量的增加，可能对其活性有一定的抑制作用。

[目的]基于内质网应激(ERS)和氧化应激途径,探讨木犀草素(luteolin)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的肝损伤的保护效果及其潜在的作用机制。[方法]将48只昆明小白鼠随机分为6组,分别为正常对照组(NC)、木犀草素对照组(MD)、APAP肝损伤模型组(APAP)以及木犀草素低、中、高剂量组(ML、MM、MH),每组8只小鼠,NC和MD组腹腔注射生理盐水,其余各组小鼠按300 mg/kg的剂量腹腔注射APAP注射液,每天2次,连续注射4d,给药4 d后NC组和APAP组灌胃生理盐水,MD、ML、MM、MH小鼠分别按照100,25,50,100 mg/kg的剂量灌胃木犀草素药液,每天2次,连续灌胃3 d,最后一次灌胃12 h后,分别检测小鼠血液中的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性以及肝脏中的氧化应激指标(超氧化物歧化酶(SOD)活性及过氧化氢(H_2O_2)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量),在显微镜下观察各组小鼠肝组织的病理变化,并采用探针药物法测定肝脏微粒体细胞色素P4502E1酶(CYP2E1)活性,采用qRT-PCR检测CYP 2E-1 mRNA表达水平,用Western Blot检测肝组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、增强子CCAAT结合蛋白同源蛋白(CHOP)、CYP2E1蛋白表达水平。[结果]与NC组相比,APAP模型组的ALT和AST活性极显著升高,MD组上述2种酶活性无显著变化。与APAP模型组相比,MM、MH组ALT和AST活性显著或极显著下降。与APAP模型组相比,ML、MM、MH组的GSH含量和SOD活性均明显增加,MDA和H_2O_2含量均明显降低。小鼠肝组织病理形态显微观察结果表明,MM、MH组可以改善APAP导致的肝索消失以及肝细胞排列散乱和细胞核溶解等病理症状。探针药物法测定结果显示,0.1,0.01和0.001 mg/mL的木犀草素可以显著降低CYP2E1活性。qRT-PCR和Western Blot结果显示,木犀草素可以显著或极显著降低CYP2E1基因及其蛋白的表达水平,极显著降低GRP78和CHOP蛋白表达水平。[结论]木犀草素具有明显的抗APAP诱导的肝损伤作用,其作用机理可能是通过抑制CYP2E1的表达、减轻氧化应激和内质网应激水平,从而减轻APAP诱导的肝损伤。

半胱氨酸蛋白酶抑制因子(CST)是一种能够可逆结合并抑制半胱氨酸蛋白酶类的活性的蛋白,为了明确日本沼虾(Macrobrachium nipponense)CST基因(Mn CST)序列及其在日本沼虾卵巢中的作用,本研究利用RACE方法克隆获得日本沼虾Mn CST全长cDNA序列,利用qRT-PCR分析了其在不同组织和不同发育阶段的卵巢中的表达情况,并利用RNA干扰(RNAi)技术初步分析了Mn CST在日本沼虾卵巢发育中的作用。结果显示,Mn CST cDNA序列全长6199 bp,包含1183 bp 5′非编码区、2304 bp 3′非编码区和2709 bp开放阅读框,编码903个氨基酸残基,其氨基酸序列上有6个cystatin-like(半胱氨酸蛋白酶抑制因子样)结构域和42个磷酸化位点;Mn CST基因在各个组织中均有表达,肠中表达量最高;日本沼虾不同发育阶段的卵巢中均有Mn CST基因表达,Ⅳ期卵巢中表达量最高,Ⅱ期卵巢中表达量最低;Mn CST基因在日本沼虾卵巢中的表达变化与组织蛋白酶B(Cts B)和组织蛋白酶L(Cts L)基因的表达变化基本是一致的,但对卵黄蛋白原(Vg)基因的表达没有直接影响。Mn CST在日本沼虾卵巢中的作用可能主要是抑制Cts B和Cts L的活性,在日本沼虾卵巢发育过程中对Vg的水解起间接的调控作用。

[目的]本试验旨在探究百里香酚和迷迭香酸组合对脂多糖(LPS)攻毒大鼠盲肠的屏障功能、菌群结构及炎症反应的影响。[方法]试验选取40只21日龄SD大鼠在适应性饲养7 d后，随机分为5组：空白对照组(Con)、攻毒对照组(LPS)、百里香酚组(Thy)、迷迭香酸组(RosA)、百里香酚×迷迭香酸组(Thy×RosA)。Thy组、RosA组和Thy×RosA组每天分别按照20 mg·kg~(-1) Thy、RosA、Thy×RosA(1∶1)的剂量灌胃大鼠，Con组和LPS组每天灌胃等量生理盐水。正式试验期共14 d。在正式试验第13天，除Con组外，对LPS组、Thy组、RosA组和Thy×RosA组大鼠腹腔注射500μg·kg~(-1)的LPS溶液建立急性肠道炎症模型。在正式试验第14天，将4组大鼠处死，采集盲肠组织，观察肠道形态；采集盲肠黏膜，测定IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、二胺氧化酶活性、D-乳酸含量和ZO-1、Claudin-1、Occludin基因的mRNA相对表达量，采集盲肠食糜，测定盲肠菌群组成和短链脂肪酸的浓度。[结果]与Con组相比，LPS攻毒降低了盲肠D-乳酸含量，提高IL-1β水平；与LPS组相比，百里香酚和迷迭香酸组合提高了厚壁菌门的相对丰度，降低拟杆菌门的相对丰度，且提高了乳酸杆菌、Romboutsia、Turicibacter和致狭窄梭状芽孢杆菌1菌属的相对丰度，降低了未定义的鼠杆菌科、未分类的毛螺菌科、罗斯氏菌属、Alistipes菌属的相对丰度；与LPS组相比，百里香酚和迷迭香酸组合提高了乙酸、丙酸、丁酸和总短链脂肪酸浓度；与LPS组相比，百里香酚和迷迭香酸组合提高了ZO-1、Occludin、Claudin-1基因mRNA表达量和IL-10水平，降低了D-乳酸含量、二胺氧化酶活性、IL-6和TNF-α水平。[结论]百里香酚和迷迭香酸组合改善了盲肠菌群结构，提高了短链脂肪酸的浓度，增强肠道屏障功能，从而缓解肠道炎症，促进盲肠健康。

为探讨血根碱是否具有缓解黄鳝(Monopterus albus)由脂多糖(LPS)诱导后引起的免疫应激及炎症反应作用,本实验设置对照组(基础饲料)和实验组(基础饲料+750μg/kg血根碱),每组3个重复,养殖实验持续8周,结束后每个重复随机取30尾规格一致的黄鳝经腹腔注射大肠杆菌脂多糖(LPS),在注射前0 h和注射后3 h、6 h、12 h、24 h和48 h进行采样。结果显示,在0 h时,实验组肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活力显著高于对照组(P0.05);血清中葡萄糖(GLU)、皮质醇(COR)、IgM、C4、碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)和肝脏中SOD在腹腔注射LPS后均呈先上升后下降的趋势,并在3 h或6 h达到峰值,肝脏中丙二醛(MDA)的变化趋势与其相反;与对照组相比,实验组血清中AKP、IgM、C4的含量和肝脏中SOD活力在注射LPS后上升幅度更大,GLU和COR的含量上升幅度慢,并且GLU、COR、AKP、IgM、C4、GOT和GPT恢复至正常水平速度更快。肠道中炎症相关基因IL-1β、IL-10、IL-12β、IL-15、TGF-β1和TGF-β2表达量在腹腔注射LPS后呈先上升后下降的趋势,并在6 h或12 h达到峰值;与对照组相比,实验组下调了IL-1β和IL-12β基因表达量,上调了IL-10、IL-15、TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3基因表达量。综上所述,在本研究条件下,腹腔注射LPS诱导黄鳝产生了免疫应激及炎症反应,在3～6 h时出现高峰,而饲料中添加750μg/kg血根碱能够有效改善黄鳝由LPS诱导产生的免疫应激及炎症反应。

【目的】β－Ｎ－乙酰氨基葡萄糖苷酶（β－Ｎ－ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉＮｉｄａｓｅ，Ｎａｇ）是昆虫几丁质降解过程中的重要酶类。研究旨在利用Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒表达系统获得高纯度ｌｍＮａｇ１蛋白并对其酶学特性进行分析，探究该酶在飞蝗（ｌｏｃｕｓｔａ ｍｉｇｒａｔｏｒｉａ）生长发育过程中的生物学功能，为飞蝗绿色防控分子靶标研发提供理论与实践依据。【方法】根据ｌｍ Ｎａｇ１的ｃｄＮａ全长序列（ｇｅＮ ＢａＮｋ：ＪＸ８８８７２０．１）设计包含酶切位点Ｂａｍ Ｈ Ⅰ、ＨｉＮｄ Ⅲ和６×Ｈｉｓ标签的引物。采用Ｐｃｒ技术扩增包含开放阅读框的目标片段，双酶切后连接至ＰＦａｓｔ Ｂａｃ～（ｔｍ）－ｄ．．．

[目的]阐明雷帕霉素(Rapa)对大肠杆菌诱发的乳腺感染的保护作用机制,为临床上寻找乳腺炎防控新方法提供理论依据。[方法]原代培养大鼠乳腺上皮细胞,待细胞贴壁后,试验组采用100 nmol·L~(-1)的Rapa处理4 h后,细胞经感染比(MOI)为10的大肠杆菌处理2 h后用细胞刮刀刮取细胞,收集细胞上清液,用于Toll样受体4(TLR-4)及髓样分化因子(MyD88)蛋白、促炎性细胞因子表达及活性氧(ROS)释放检测。[结果]大肠杆菌刺激原代培养的乳腺上皮细胞后,TLR-4和MyD88蛋白表达显著升高;而Rapa预处理可降低MyD88蛋白表达;同时,大肠杆菌刺激后,乳腺上皮细胞中促炎性细胞因子,如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)的表达及ROS的释放均显著升高。雷帕霉素能下调促炎性细胞因子的释放,显著降低ROS的释放量。[结论]Rapa抑制MyD88信号通路后可减轻大肠杆菌诱导的大鼠乳腺炎症反应。

[目的]试验旨在于探究百里香酚和迷迭香酸组合对脂多糖（LPS）攻毒大鼠盲肠的屏障功能、菌群结构及炎症反应的影响。[方法]试验选取40只21日龄SD大鼠在适应性饲养7 d后，随机分为5组：空白对照组（CON）、攻毒对照组（LPS）、百里香酚组（Thy）、迷迭香酸组（RosA）、百×迷组（Thy × RosA）。Thy组、RosA组和Thy × RosA组每天分别按照20 mg ·kg~(-1) Thy、20 mg ·kg~(-1) RosA、20 mg ·kg~(-1 )Thy × RosA（1:1）的剂量对大鼠进行灌胃操作，CON组和LPS组每天灌胃等量生理盐水。正式试验期共14 d。在正式试验第13 d，除CON组外，对LPS组、Thy组、RosA组和Thy × RosA组大鼠腹腔注射500 μg ·kg~(-1 )的LPS溶液建立急性肠道炎症模型。在正式试验第14 d，将4组大鼠处死，采集盲肠组织，观察肠道形态，采集盲肠黏膜，测定IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、二胺氧化酶、D-乳酸的浓度和ZO-1、Claudin-1、Occludin基因的相对mRNA表达量，采集盲肠食糜，测定盲肠菌群组成和短链脂肪酸的浓度。[结果]与CON组相比，LPS攻毒降低了盲肠D-乳酸浓度，升高了IL-1β的浓度；与LPS组相比，百里香酚和迷迭香酸组合提高了厚壁菌门的相对丰度，降低了拟杆菌门的相对丰度，且提高了乳酸杆菌、Romboutsia、Turicibacter和致狭窄梭状芽孢杆菌1菌属的相对丰度，降低了未分类的鼠杆菌科、毛螺菌科、罗斯氏菌属、Alistipes菌属的相对丰度；与LPS组相比，百里香酚和迷迭香酸组合提高了乙酸、丙酸、丁酸和总短链脂肪酸浓度；与LPS组相比，百里香酚和迷迭香酸组合提高了ZO-1、Occludin、Claudin-1基因mRNA表达量和IL-10浓度，降低了D-乳酸、二胺氧化酶、IL-6和TNF-α的浓度。[结论]百里香酚和迷迭香酸组合改善了盲肠菌群结构，提高了短链脂肪酸的浓度，增强肠道屏障功能，从而缓解了肠道炎症，促进了盲肠健康。