【目的】筛选出辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞中与绒毛生长相关的LncRNA,为绒毛生长相关LncRNA的功能及机制研究提供基础性数据。【方法】提取MT和FGF5处理的辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞总RNA,通过样品总RNA电泳检测、测序数据质量评估、Mapping比对、样品间相关性检查对提取的总RNA进行质量检测。筛选出差异表达的LncRNA并预测其靶基因,通过GO和KEGG富集分析,筛选出与绒毛生长相关的LncRNA,并通过Real-time PCR对目标LncRNA进行表达验证。【结果】(1)样品总RNA质量检测结果显示:RNA完整性良好、GC含量相对较高,序列较稳定、样品间表达水平相关性均较高、符合测序要求。(2)差异表达LncRNA的筛选结果显示:1.0g·L~(-1) 24h组差异表达LncRNA有32个,其中4个表达上调,28个表达下调;0.2g·L~(-1) 24h组差异表达LncRNA有10个,其中4个表达上调,6个表达下调;0.2g·L~(-1) 72h组差异表达LncRNA有113个,其中5个表达上调,108个表达下调。10~(-4) g·L~(-1) 24 h组差异表达LncRNA有164个,其中有70个上调,94个下调;10~(-4)g·L~(-1) 72 h差异表达LncRNA有189个,其中有78个上调,111个下调;10~(-6) g·L~(-1) 24 h组差异表达的LncRNA有123个,其中有27个上调,96个下调。(3)靶基因GO富集分析结果显示:1.0g·L~(-1) 24h组差异表达LncRNA靶基因富集在GO的negative regulation of transcription from RNA polymerase Ⅱ promoter;0.2g·L~(-1) 24h组无差异表达LncRNA靶基因富集的GO term;0.2g·L~(-1) 72h组差异表达LncRNA靶基因富集在GO的cellular metabolicprocess biological_process,binding molecular_function,FGF5处理组中只有10~(-4) g·L~(-1) 72 h组差异表达LncRNA靶基因富集在cell cellular_component、cell part cellular_component、intracellular cellular_component、binding molecular_function等6个条目。(4)靶基因KEGG富集分析结果显示:1.0g·L~(-1) 24h组差异表达LncRNA靶基因富集在Steroid biosynthesis pathway;0.2g·L~(-1) 24h组无差异表达LncRNA靶基因富集的Pathway term;0.2g·L~(-1) 72h组差异表达LncRNA靶基因富集在Cell cycle,DNA replication,Steroid biosynthesis,TNF,Nod-likereceptor,NF-kappa B等信号通路,其中TNF和NF-kappa B信号通路与绒毛生长相关。FGF5处理组中,10~(-4) g·L~(-1)72 h组差异表达的LncRNA靶基因显著富集到Fanconi anemia pathway,Huntington’s disease,Metabolic pathway,Aminoacyl-tRNA biosynthesis等9个pathway term,其中Metabolic信号通路与绒毛生长相关;10~(-4) g·L~(-1) 24 h组差异表达的LncRNA靶基因无显著富集的pathway term;10~(-6) g·L~(-1) 24 h组差异表达的LncRNA靶基因只富集在Taste transduction pathway。(5)NF-κB和TNF两个信号通路中富集的靶基因TNFα、TNFAIP3(A20)、NFKBIA(IkBα)、NFKB2、IL8所对应的LncRNA有2个,分别为(Gene ID):XLOC_005914;XLOC_018763;Metabolic信号通路中靶基因所对应的LncRNA有4个,分别为(Gene ID):XLOC_011424、XLOC_009522、XLOC_009063、XLOC_01115。Real-time PCR结果显示:LncRNA XLOC_011424、XLOC_011157、LncRNA XLOC_005914和XLOC_018763与高通量测序结果一致。【结论】LncRNA XLOC_011424、XLOC_011157、LncRNA XLOC_005914和XLOC_018763可能通过调控与绒毛生长相关的NF-κB、TNF或Metabolic信号通路,提高羊绒密度和长度,进而提高辽宁绒山羊绒产量及品质。

为研究控制光周期对绒山羊绒毛生长相关激素的影响,从短光照试验和对照组绒山羊中选择2周岁6对双胞胎绒山羊母羊,采集血液样品利用酶联免疫法进行激素含量测定,利用SAS9.0软件进行显著性检验和相关性分析。结果发现:一天24h当中,绒山羊进入棚圈后褪黑激素MLT(melatonin,mLT)和IGF-1含量显著增加,PRL含量显著减少,EGF和GH含量在2组中差异不显著;一年当中,进入光控棚圈后6月份绒山羊血液中的MLT(P0.05)含量均增加,PRL含量显著降低;9月份试验组绒山羊MLT、IGF-1和GH含量

为探讨日粮添加不同水平的碘和硒对辽宁绒山羊非产绒期和产绒期血液中褪黑激素(MT)、催乳素(PRL)、类胰岛素生长因子(IGF-I)、生长激素(GH)、甲状腺过氧化物酶(TPO)以及脱碘酶(DIO)的影响,选择36只体况良好、体重相近((38.0±2.94)kg)的2周岁辽宁绒山羊作为试验动物,采用2×3完全随机试验设计,随机分为6组。分别在基础日粮中添加3个水平的碘(0、2和4 mg/kg,DM)和2个水平的硒(0和1 mg/kg,DM)进行饲喂。试验结果表明:1)非产绒期,日粮添加碘显著提高了血液中GH和IGF-1的浓度,降低了血浆MT的浓度(P<0.05),对PRL、TPO和DIO浓度没有...

为研究绒山羊绒毛生长周期内皮肤基因表达规律以及皮肤差异表达基因的挖掘,采用Illumina HiSeqTM2000高通量转录组测序平台RNA-Seq技术,对3只成年雌性阿尔巴斯型内蒙古绒山羊全年12个月的皮肤样本进行转录组测序,将无参考基因组de novo拼接组装的unigene运用Nr,GO,COG以及KEGG数据库进行比对注释,并进行差异基因在全年各月份间的变化规律分析。结果显示,测序获得的unigene数为105 854条,比对注释基因55 541个,其中共有51 078条转录本进行了GO注释,21 189条转录本在COG数据库分析得到注释,26 201条预测基因KEGG数据库比对成功。其中皮肤基因GO注释在生物学功能分类中,细胞过程、代谢过程、生物学调控、生物功能调控以及刺激应答方面注释到的转录本比例最大;在分子功能分类中,结合以及催化活性作用方面注释到的转录本比例最大;通过COG数据库的比对注释,看到皮肤表达基因的同源蛋白功能主要集中在基因转录、翻译后修饰、和信号传导机制方面,反而在同工酶转运和代谢、细胞动力、二级代谢生物合成、转运和催化以及核结构方面注释到的基因极少;皮肤转录组数据与KEGG数据库比对,得到皮肤相关转录本较为富集的几条通路分别为MAPK signaling pathway,Wnt signaling pathway,Notch signaling pathway,Hedgehog signaling pathway,TGF-βsignaling pathway,JAK-STAT signaling pathway以及Focal signaling pathway;通过绒山羊不同月份皮肤转录组测序数据进行差异基因分析,得出绒山羊全年皮肤生长周期中基因差异变化规律为绒山羊全年皮肤共有4次较为剧烈的基因差异变化,第1次发生在2月与3月之间,第2次发生在3月与4月之间,第3次发生在6月与7月之间,第4次发生在10月与11月之间,前2次出现的基因差异变化较后2次剧烈得多,说明绒山羊绒毛生长启动时基因变化剧烈,而绒毛生长到休止时的皮肤基因变化较为缓和,是一个基因缓慢变化的过程。

为分析绒山羊皮肤中受Hippo信号通路调控的绒生长候选基因集，本研究选取6只罕山白绒山羊随机分为对照组和褪黑素处理组，每组设3个重复。以自然年为试验周期，每月采集皮肤样本进行RNA测序，使用Bowtie、TopHat、Cufflinks、Cuffmerge、Cuffdiff、Cuffcompare、CPAT和CPC软件分析DE-mRNA和DE-lncRNA,联合PCA分析它们对次级毛囊生长周期的应答，利用WGCNA挖掘调控山羊绒生长的基因模块，GSEA分析候选基因集的生物学功能。结果表明：1)筛选得到组间DE-mRNA 2 024个和DE-lncRNA 329个，它们应答了绒山羊皮肤次级毛囊的生长周期。2)获得有生物学意义的对照组7个和试验组9个基因模块。3)深入分析富集到平衡哺乳动物皮肤生长分化、毛囊形态发生的Hippo信号通路基因模块，揭示了外源褪黑素诱导下调控山羊绒生长候选基因集191个mRNA和49个lncRNA的共表达调控网络关系。4)发现候选基因集与皮肤发育生物学过程(|NES|>1且FDR1且FDR1且FDR1且FDR<25%)显著关联。综上，确定了调控山羊绒生长的关键通路Hippo信号通路，在组学水平从基因集角度解析了调控山羊绒生长的mRNA和lncRNA的共表达调控关系，为进一步研究外源褪黑素促山羊绒生长的机制提供参考。

为研究不同剂量的IGF-1和EGF对辽宁绒山羊毛囊体外生长及毛囊形态的影响,采用显微分离法分离绒山羊初级毛囊,分别测定不同浓度IGF-1(0.1,1,10,100ng.mL-1)、不同浓度EGF(0.2,2,20,100ng.mL-1)和联合添加IGF-1与EGF(分别添加10ng.mL-1和20ng.mL-1)对毛囊形态变化及生长长度的影响。结果表明:IGF-1刺激毛乳头和毛母质细胞分裂增殖;EGF促进毛囊外根鞘细胞分化;联合添加刺激毛球部增大。IGF-1和EGF对毛囊体外生长均具有正向调节作用,作用大小与剂量有关,最适宜浓度IGF-1为10ng.mL-1,EGF为20ng.mL-1,10d...

为探讨不同的能量摄入水平对绒山羊体组成和产绒性能的影响 ,确定舍饲条件下绒山羊适宜的能量供给。本试验在保持蛋白质和其他养分摄入量一致的情况下设高、中、低 3种能量摄入水平 (代谢能摄入量分别为6 70、5 6 7、4 4 6MJ·d-1) ,选 9只内蒙古白绒山羊羯羊 ,随机均分为 3组 ,于绒生长旺盛期进行饲养试验、体组成分析、绒毛品质及产绒量测定。结果表明 :提高能量摄入水平对活重、空体重、胴体重和屠宰率 (高能量摄入组分别为2 4 2 3,2 0 19和 10 6 5kg、4 3 81% )没有显著影响 (P >0 0 5 ) ,但对体组成、体蛋白分布和去毛空体成分有显著影...

为深入研究成纤维细胞生长因子5对毛囊生长发育的生物学功能提供理论依据。在10月左右和1月左右,即皮肤毛囊处于生长旺期和退行期时采集了12只内蒙古阿尔巴斯白绒山羊皮样,利用TRIZOL试剂盒提取皮肤总RNA(一步法),利用RT-PCR方法检测FGF5基因在绒山羊绒毛周期性生长不同阶段皮肤中的表达分布情况,试验结果表明,FGF5基因mRNA在绒山羊毛囊生长旺期和退行期均有表达,却只得到了一种剪切形式的表达,经测序是长片段,而缺失外显子2的短片段形式没有检测到。

根据GenBank中山羊SRY基因序列设计一对引物,采用PCR在雄性辽宁绒山羊个体中扩增出了包含SRY基因整个编码区的特异片段,将特异PCR产物克隆到pMD18-T载体中,转化DH5α菌,筛选出SRY基因的阳性克隆,进行了测序,将其序列与GenBank中部分偶蹄目动物的SRY基因序列进行同源性比较,用NJ法构建了系统进化树。结果表明,辽宁绒山羊SRY基因编码区长度为723 bp,共编码240个氨基酸,其中包含长度为231 bp的HMG-box,位于编码区的第190至420位核苷酸之间,编码77个氨基酸(H64-A140)。辽宁绒山羊SRY基因编码区序列与GenBank中山羊、绵羊、牛、牦牛、水...

利用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对辽宁绒山羊的遗传变异进行了分析。用 37个随机引物和 5 5个两两组合的随机引物组合进行筛选 ,筛选出了 5个多态性较为丰富的随机引物 (组合 )。用这 5个随机引物(组合 )对 35个个体进行扩增 ,据它们的RAPD指纹图计算了遗传变异度 (0 .2 475 )。

为探讨甲状腺激素对羊绒生长的影响,挑选12只(平均(15±1.5)月龄、平均活重(33.14±2.29)kg)内蒙古白绒山羊半同胞羯羊,随机分为2组。用外源褪黑激素(MT)调控羊绒生长,通过皮肤组织中脱碘酶(MD)活性变化,研究皮肤组织中甲状腺激素(T3、T4)与绒毛生长的关系。结果表明:1)埋植MT使绒纤维生长率增加(P0.05);2)绒纤维生长率与血浆MT质量浓度有关(P0.05);3)绒纤维生长率与皮肤组织中Ⅱ型脱碘酶(MDⅡ)活性呈正相关关系(P<0.05),而与Ⅲ型脱碘酶(MDⅢ)无相关关系(...

为研究内蒙古绒山羊非生绒期内褪黑激素埋植时间对山羊绒产量、长度以及细度的影响,于当年4月底抓绒时,选用体重相近、上年度产绒量基本一致的2~3岁内蒙古绒山羊母羊30只,随机分为3组,包括1个对照组和2个褪黑激素埋植组(4和6月2次埋植组、6月单次埋植组),试验开始后逐月观察山羊绒生长情况。结果表明:1)无论是4和6月2次,还是6月单次埋植褪黑激素均能够诱导非生绒期内山羊绒生长,整个羊绒生产周期内没有二次生绒和提前脱绒;2)埋植褪黑激素对山羊绒细度没有影响(P>0.05),4和6月埋植褪黑激素组绒山羊产绒量和山羊绒长度显著高于6月埋植组和对照组(P...

为研究内蒙古白绒山羊年龄和绒毛生产性能的关系,对1~8岁内蒙古白绒山羊产绒性能与绒毛品质性状进行了试验研究。统计分析结果表明:1)不同年龄间产绒量、绒长度、毛长、绒纤维细度和伸直长度均有极显著差异(P

为研究不同剂量ＬｉＣＬ对绒山羊毛囊生长和β－连环蛋白（β－Ｃａｔｅｎｉｎ）ｍ Ｒｎａ表达的影响，将分离的绒山羊初级毛囊随机分为５组，每组２４个重复，对照组为ＷｉＬＬｉａｍ＇ｅ基础培养液。试验组在基础培养液中依次添加２，５，１０和２０ｍｍｏＬ·Ｌ～（－１）的ＬｉＣＬ，培养期为７ｄ，每日测量毛囊生长长度。运用荧光定量ＰＣＲ技术测定各组β－Ｃａｔｅｎｉｎｍ Ｒｎａ表达水平。结果表明：２～１０ ｍｍｏＬ·Ｌ～（－１）ＬｉＣＬ组的β－Ｃａｔｅｎｉｎ ｍ Ｒｎａ表达水平和生长长度极显著高于对照组（Ｐ