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[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
吴丹 胡兰
为了确定MSTN RNAi双元表达载体pEGFP-N1-M1-M2对成肌细胞增殖和分化的影响,利用脂质体介导法将该双元表达载体转染成肌细胞,MTT法检测MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖的作用,Giemsa染色检测pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体对成肌细胞融合率的影响。试验结果表明,pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体有促进成肌细胞增殖和分化的作用,能够促进成肌细胞大量融合。该结果为进一步探讨MSTN基因的作用机理提供了更为便捷的研究方法。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘晨曦 唐森 李文蓉 刘明军
【目的】构建新疆细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,研究其在细毛羊成肌细胞分化中的作用,并探讨其作用机制。【方法】采用RT-PCR技术,扩增MSTN编码区序列,克隆入plex-mcs慢病毒表达载体,构建plex-MSTN慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定。将plex-MSTN包装成plex-MSTN慢病毒。用酶消化法分离培养新疆细毛羊成肌细胞,慢病毒感染制备MSTN过表达成肌细胞系,通过马血清诱导分化,Western blotting检测分化细胞MSTN基因的表达,免疫荧光分析分化肌管的融合率及肌管直径,Realtime RT-PCR检测分化相关基因的表达。【结果】克隆的新疆细毛羊MSTN基因...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姬改革 朱春红 陶志云 刘宏祥 宋迟 李慧芳
［目的］本文旨在探讨ＩＧＦ－Ⅰ和ＭＳＴＮ基因在鸭胚胸肌成肌细胞的表达规律。［方法］以生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验对象，采用实时荧光定量ＰＣＲ方法检测鸭１３、１５、１７、１９、２１和２３胚龄时胸肌成肌细胞ＩＧＦ－Ⅰ、ＭＳＴＮ ＭＲＮＡ的表达情况，并进行品种间比较。［结果］ＩＧＦ－Ⅰ与ＭＳＴＮ ＭＲＮＡ表达都呈先升后降的趋势，都存在１７胚龄的表达高峰，１９胚龄之后，表达显著下调并持续至２３胚龄；高邮鸭ＩＧＦ－ⅠＭＲＮＡ的表达比金定鸭多了１３胚龄的表达高峰，且在１３胚龄时，２个基因的表达量都是高邮鸭极显著高于金定鸭（Ｐ
关键词：
鸭 胚胎 成肌细胞 IGF-Ⅰ MSTN
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘恩秀 朱仙珍 李云 吴荣华 英士娟 杨帆 胡鑫 郭鹤
运用同源克隆的方法获得岩原鲤(Procypris rabaudi(Tchang))肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)c DNA全长序列,并通过逆转录PCR(RT-PCR)检测MSTN基因的组织差异性表达以及饥饿胁迫对MSTN基因表达的影响。结果显示,岩原鲤MSTN基因1 547 bp的c DNA序列,编码区为1 128 bp,编码375个氨基酸。PCR检测显示,该基因在肌肉和脑组织中大量表达,在眼、肠、心、鳃、肾和头肾组织中少量表达,在肝胰脏、脾脏组织中未见表达。饥饿再投喂实验表明肌肉组织中MSTN基因表达含量随着饥饿时间的延长逐渐升高,恢复投喂后3d表达含量急剧下降,投饵后6 d升至正常水平。结果表明,MSTN的表达对营养摄入敏感,在饥饿状态下岩原鲤通过上调MSTM表达来抑制肌肉生长,节约能量消耗。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王向鹏 肖一红 刘园园 杜永坤 马玉萍 周恩民
【目的】利用正负筛选策略,构建猪肌肉生长抑素(Myostatin,MSTN)基因的双筛选标记打靶载体。【方法】以猪胎儿成纤维细胞DNA为模板,PCR扩增MSTN基因同源长、短臂;采用PCR和Overlap PCR扩增打靶载体正筛选标记嘌呤霉素和绿色荧光蛋白基因及负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因。以pUC57载体为骨架载体,在其多克隆位点连接一段包括Frt序列在内的酶切位点的多克隆位点序列,在2个Frt序列之间连接正筛选标记嘌呤霉素基因和绿色荧光蛋白基因,在Frt序列两侧分别连接5.7和1.9kb的MSTN基因同源长、短臂;在同源短臂后连接负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因,将目的片段与载体定...
[期刊] 华北农学报
[作者]
潘孝青 杨杰 徐小波 秦枫 李健 宦海琳 李晟 邵乐 张霞 顾洪如 刘满昌
研究了发酵床养殖模式对猪臀肌中MSTN基因表达量影响及其与肉品质间的相关性,旨在描述不同饲养环境对调控肌肉发育相关基因表达量的差异。在常规水泥地面饲养与发酵床饲养模式下,MSTN mRNA基因相对表达量并未出现显著性差异(P>0.05),但与常规饲养相比,发酵床猪臀肌中MSTN mRNA基因相对表达量低8.6%;常规水泥地面饲养模式下臀肌中MSTN mRNA表达量与剪切力显著负相关(P0.05)。
关键词：
猪 发酵床 MSTN 表达量 肉品质
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨扬 许炎坤 舒琥 李强 蓝召军 刘丽
采用同源克隆、生物信息学方法及荧光定量PCR(Real-time PCR)对缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行克隆,分析和组织表达状况研究。结果显示:缩骨鲫基因组MSTN基因全长4 737 bp,含有两个内含子和三个外显子;编码区长度为1 128 bp,编码375个氨基酸,包括信号肽(1aa23aa),TGF-β前肽保守区域(34aa256aa),TGF-β功能区(281aa375aa),保守的RXXR蛋白酶酶切位点以及C
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杜富宽 聂志娟 徐钢春 徐跑 顾若波
运用同源克隆的方法和RACE技术,从刀鲚(Coilia nasus)肌肉组织中克隆了肌肉生成抑制素基因(Myostatin,MSTN)的cDNA全长并分析了肌肉生长抑制素基因在刀鲚不同组织的表达情况。结果表明,刀鲚MSTN基因的cDNA全长2 252 bp,编码区1 125 bp,编码374氨基酸。二级结构预测显示,刀鲚MSTN具有MSTN家族的典型结构域,包含Pfam和TGFB结构域。运用荧光定量的方法检测了该基因在刀鲚不同组织中的表达。结果显示,MSTN基因在健康刀鲚肌肉和脑中呈高表达,鳃、肝、脾、肠、肾和头肾中微量表达。根据以上研究结果认为,刀鲚MSTN基因的序列具有高度保守性,组织表达...
关键词：
刀鲚 MSTN基因 克隆 组织表达
[期刊] 水产学报
[作者]
艾加林 栗志民 刘建勇
肌肉生长抑制素(MSTN)是转化生长因子β超家族(TGF-β)中参与动物肌肉生长的重要调控因子。为了解MSTN基因在九孔鲍中的功能,本研究采用c DNA末端快速扩增(RACE)技术从九孔鲍右侧壳肌中获得了MSTN基因c DNA全长,并运用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测了MSTN在各组织和发育时期的表达水平。结果显示,九孔鲍c DNA全长3 755 bp,其中5′非编码区(5′UTR)324 bp,3′非编码区(3′UTR)1 985 bp,开放阅读框(ORF)1 446 bp,编码481个
[期刊] 水产学报
[作者]
徐建勇 陈松林
采用同源克隆及基因组步移的方法,分离克隆了牙鲆肌肉生长抑制素(MSTN)基因。经过序列分析及cDNA验证,牙鲆MSTN基因具有3个外显子和2个内含子,编码377个氨基酸。5′侧翼区含有8个TATA框,一个CAAT框,6个E框;3′侧翼区含有加尾信号。通过同源分析,牙鲆MSTNC末端含有9个保守半胱氨酸残基和一个RVRR蛋白酶酶切位点;通过进化树分析,牙鲆MSTN与鱼类MSTN基因聚为一支。RT-PCR分析表明,牙鲆MSTN在胚胎发育中不表达或表达量较低,说明MSTN在牙鲆胚胎发育中并不起重要作用;其在各组织中的表达,随个体和环境的不同而有差异,暗示MSTN的表达受外界因素调控。
关键词：
牙鲆 肌肉生长抑制素 克隆
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
胡兰 王娜 吴丹
在首先确定胚胎11日龄海兰鸡腿肌成肌细胞培养条件的基础上,利用RNA structure3.7软件中的步移法自行设计了反义MSTN寡核苷酸序列,全硫代修饰,利用脂质体2000成功地将其转染到体外培养的成肌细胞中。结果表明:反义寡核苷酸可以抑制MSTN基因在成肌细胞中的表达,促进成肌细胞增殖与分化,且2.0μmol.L-1为最佳浓度。
[期刊] 华北农学报
[作者]
贺彩霞 李长忠 保长虹 王丽楠 严青春 金文杰 赵娟 王国杰 简生龙 王振吉 陈艳霞
花斑裸鲤是黄河上游重要的冷水性土著鱼类，其生长、发育缓慢，性成熟又较晚，故多年来其种群一直呈下降趋势。MSTN(肌肉生长抑制素)是一种对肌肉生长具有负调控作用的因子，通过克隆花斑裸鲤MSTN-1基因并检测其表达特性，为花斑裸鲤生长缓慢的分子调控机理提供基础资料。采用PCR、5′-RACE和3′-RACE法获得花斑裸鲤MSTN-1基因全长cDNA序列，采用qPCR检测MSTN-1基因在花斑裸鲤不同组织的表达特征和在不同鲤科鱼类肌肉组织中的差异性表达。花斑裸鲤MSTN-1基因的cDNA序列全长为2 190 bp,其中ORF长1 128 bp, 5′UTR长96 bp, 3′UTR长966 bp,共编码375个氨基酸。该蛋白是带有一个信号肽、无跨膜结构的不稳定亲水性分泌蛋白，主要分布在细胞核、线粒体和细胞质中。MSTN-1蛋白质二级结构以无规卷曲为主，存在2个TGF-β结构域：即TGF-β前肽区域(37—268 aa)和TGF-β功能区域(281—375 aa),有1个蛋白酶水解位点RIRR和9个位于TGF-β功能区域保守的半胱氨酸残基。氨基酸序列同源性分析表明，花斑裸鲤MSTN-1氨基酸序列与其他鲤科鱼类MSTN-1具有较高的相似性，而与禽类和哺乳动物的相似性较低。系统发育分析显示，花斑裸鲤MSTN-1与其他鲤科鱼类聚于同一进化支。qPCR检测结果表明，MSTN-1在花斑裸鲤的脑、肌肉、鳃、心、肝脏和肾脏组织中均有表达，但在脑和肌肉组织中表达量较高。该基因在不同鲤科鱼类肌肉组织中均有表达，在青海湖裸鲤肌肉组织中的表达量最高，其次在花斑裸鲤和黄河鲤鱼肌肉组织中。通过克隆获得花斑裸鲤MSTN-1基因cDNA序列，进行生物信息学分析和qPCR检测，MSTN-1在这几种土著鱼类肌肉组织中的特征性表达差异有助于进一步了解高原鱼类生长缓慢的分子机理。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王宝维 刘腾 葛文华 张名爱 李桢 岳斌 程凡升
【目的】研究与脂肪沉积有关基因在不同填饲阶段鹅组织中的表达规律及其相关性,对实施肝用型鹅新品种(系)标记辅助选择具有重要意义。重点探讨脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty acid-binding protein,A-FABP)基因与肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因在不同填饲日龄鹅组织中的表达规律及两基因的表达相关性。【方法】选取200只体重相近的12周龄健康青农灰鹅进行填饲。分别采集不同填饲时间里鹅肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸肌、腿肌和腹脂样品,提取总RNA后,利用实时荧光定量PCR技术测定A-FABP与MSTN基因的表达量,并研究不同组织中这两个基因的表...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
胡艳 刘宏祥 单艳菊 姬改革 束婧婷 徐文娟 朱春红 陶志云 李慧芳
【目的】选择生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验模型，比较２个不同品种鸭胚胎期和出雏早期骨骼肌中胰岛素样生长因子Ｉ（ＩｎｓｕｌＩｎ－ｌＩｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ Ｉ，Ｉｇｆ－Ｉ）、肌肉生长抑素ａ（ｍｙｏｓｔａｔＩｎ ａ，ｍｓｔｎ－ａ）ｍｒｎａ的表达规律及其与胸浅肌和腓肠肌（简称为胸腿肌）发育模式的相关性。【方法】在鸭１３、１７、２１、２５、２７胚龄和出雏后７日龄时，记录体重、胸浅肌（Ｐｍ）和腓肠肌外侧头（ｌｍ）的重量，采用实时荧光定量Ｐｃｒ方法研究骨骼肌中Ｉｇｆ－Ｉ和ｍｓｔｎ ｍｒｎａ的表达规律。【结果】本试验证明鸭早期发育过程中，体重和骨骼肌重的变化呈现极显著的品种和时间特异性；鸭胚胎．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
郁建锋 张营 王星果 徐建荣 卢祥云 李建林 顾志良
以鳡肌肉总RNA为模板,采用RT-PCR和RACE的方法,获得了鳡肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因的3个重叠片段,测序后拼接得到2177bp全长cDNA序列,其包含了5′端非翻译区的89个核苷酸和3′端非翻译区1052个核苷酸以及1125个核苷酸的开放性阅读框,翻译编码375个氨基酸,其中前22个氨基酸为鳡MSTN的信号肽。鳡MSTN具有MSTN的共同特征,有蛋白酶水解位点RIRR和在C端生物活性区含9个保守的半胱氨酸残基。核苷酸和氨基酸同源性分析发现鳡MSTN与厚颌鲂、草鱼和鲤等鲤形目鱼类的同源性较高,与鲈形目的同源性较低,与哺乳动物和鸟类的同源性最低;系统发育分析表明鳡M...
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