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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
穆杨 张彦明 童德文 王玉东 李崴 李玉清 郑增忍
将培养收获的M SB 1细胞用磷酸盐缓冲液洗涤3次后,调整细胞浓度为2×106/mL,然后每毫升细胞悬液加2 IU木瓜蛋白酶和1 mm o l/L的L-胱氨酸溶液0.1 mL,混匀后37℃作用1 h以分离M SB 1细胞表面M AT-SA。对木瓜蛋白酶处理前后的M SB 1细胞进行间接荧光抗体染色以检测M ATSA的分离情况。获得的M ATSA粗提物经超滤浓缩和Sephadex G-75凝胶纯化后,用SDS-PAGE检测纯化的结果。试验结果表明,从M SB 1细胞表面分离到M ATSA,经电泳获得了纯化的M ATSA,其相对分子质量约为35 ku。结果为M ATSA单克隆抗体的制备及其相关的研...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孔庆学 张涌
采用Ⅴ型胶原酶单次振荡消化法和低渗处理,及差速贴壁和免疫组化染色法,对大鼠睾丸支持细胞进行分离、纯化和鉴定。结果表明,该分离纯化方法对睾丸支持细胞损伤较小,获得的细胞活性较高,原代细胞存活率为85%,且无较大细胞团,接种后增殖迅速,并在第8天达到最高峰;细胞产率为6.5×105/g;绝大多数细胞呈F as-L阳性,细胞纯度可达95%;细胞核仁清楚,核仁周围可见着色较深的卫星核小体。
关键词：
未成年大鼠 睾丸支持细胞 分离纯化
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
韩雅婷 杨学义 徐小明 史明艳 窦忠英
采用酶消化法和组织块法对小鼠、奶山羊、奶牛和家猪的表皮干细胞进行了分离、培养。结果表明:酶消化法适于小鼠表皮干细胞的分离,所获得的小鼠表皮干细胞在维持了两代之后自发分化为神经样细胞;奶山羊和奶牛不论用酶消化法还是组织块法都可以获得大量活力相对较好、表皮干细胞特性维持较久的细胞,奶山羊表皮细胞采用型胶原分选,用有血清培养液培养,经免疫细胞化学鉴定为表皮干细胞,可持续传至少9代,随着代数增高,细胞活力减弱。
关键词：
表皮干细胞 分离 培养 鉴定
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
薛振华 刘国世 史建民 王梁 田秀芝 王永彬 侯保民 田见晖 曾申明 朱士恩
对达兰仔猪睾丸精原细胞及精原干细胞进行了体外分离、纯化和初步鉴定。对8 d达兰仔猪的睾丸实质组织,采用Ⅳ型胶原酶、透明质酸酶和胰酶组合消化法分离精细管细胞,制备单细胞悬液,用Percoll不连续密度(11%、19%、27%、35%和43%)梯度法纯化精原细胞;对纯化后的细胞培养12 h,细胞贴壁后进行碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定,初步确定精原干细胞及其比例。结果表明:所获精细管细胞悬液中活细胞和死细胞所占的比率分别为92.65%和7.35%,平均每克睾丸可获得4.17×107个细胞;精原细胞主要分布于19%~27%的Percoll梯度带中,经纯化后其纯度为47.62%,精原干细胞占该带细胞的比...
关键词：
达兰猪 精原干细胞 分离 纯化 精原细胞
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张高峰 郭彤 魏华 马珂
以Ⅳ型胶原酶消化法分离鲫(Carassius auratus)肝细胞,然后将其分成2组,一组不再经过进一步处理(即对照组);另一组再用Percoll液密度梯度离心纯化肝细胞(即实验组),然后将2组细胞接种于DMEM/F12培养基中培养10 d。在倒置显微镜下观察2组肝细胞的形态并绘制细胞生长曲线;采用台盼蓝染色法比较2组肝细胞的存活率;通过HE染色法在光镜下检测肝细胞的纯度;采用MTT比色法测定2组肝细胞的增殖率;收集肝细胞培养上清液检测白蛋白、尿素以及乳酸脱氢酶的水平以检测2组肝细胞功能。结果表明,对照组鲫肝细胞存活率为80.6%,纯度为83.2%;实验组肝细胞存活率和纯度明显高于对照组(P...
关键词：
鲫 肝细胞 分离 纯化 Percoll法
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵燕英 王建和 付康 陈正望 陆婕
由猪小肠中纯化鉴定Daintain/AIF-1,并以其为免疫原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备得到4株稳定分泌抗体的单克隆细胞株。对单抗效价、亚类、亲和常数进行分析,4株单抗都属于IgG1(κ)。又经West-ern blot证实,所制备的抗体能特异性与Daintain/AIF-1结合。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马云鹏 韩胜芳 陈琰 王冬梅
【目的】在已经证明小麦与叶锈菌互作的小麦细胞间隙液(IWF)中存在具有蛋白质性质的激发子活性物质的基础上,以期通过试验得到激发子的纯品制剂,为进一步研究激发子的组成和结构、激发子受体以及寄主产生过敏性反应的信号转导机制提供基础条件。【方法】提取叶锈菌小种165侵染的小麦品种洛夫林10细胞间隙液,通过盐析、凝胶过滤柱层析和离子交换柱层析等分离纯化技术,对IWF中具有激发子活性的蛋白质组分进行分离纯化。【结果】分离出能诱导洛夫林10健康叶片PAL、PO活性增高并诱发洛夫林10悬浮细胞程序性死亡的激发子活性组分。该组分经SDS-PAGE电泳呈现单一条带,分子量约为32kD。【结论】经硫酸铵分段盐析、...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈吉祥 刘霜 李筠 王祥红 杜宗军 于德华 纪伟尚 徐怀恕
从山东省莱州海区自然发病的花鲈 (Lateolobraxjapanicus)体内分离到 1株致病性鳗弧菌 ,经硫酸铵盐析、DEAE SepharoseFastFlow和Sephadex G10 0凝胶层析等方法从其培养液中分离纯化了 1种胞外蛋白酶。用SDS PAGE电泳测得蛋白质的分子量为 36 7kD ,酶的最适温度为 5 0℃ ,对热不稳定 ,70℃ 15min完全失去活力 ;最适pH为 7 0 ;1mmol/L的PMSF对酶活性无影响 ,部分金属离子如Cu2 + 、Fe2 + 、Fe3 + 、Zn2 + 对酶活力有抑制作用 ,而Ca2 + 对酶有一定程度的激活作用 ,1mmol/LE...
关键词：
鳗弧菌 胞外蛋白酶 分离纯化 理化性质
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
董维亮 侯颖 王飞 李周坤 黄彦 崔中利
[目的]Rhodococcus sp.T1是一株高效的精恶唑禾草灵(FE)降解菌株,T1菌株可以断裂FE的酯键将其转化为精恶唑禾草灵酸(FA)。对T1菌株胞内精恶唑禾草灵酯酶的酶学性质进行研究并对其进行分离纯化,以期为生物修复精恶唑禾草灵污染提供更多的理论依据。[方法]以酯酶的通用底物乙酸-1-萘酯作为定量测定胞内酯酶活力的底物,分析温度和p H值对酯酶活力和稳定性的影响,同时探讨金属离子对酯酶活力的影响;通过硫酸铵沉淀、疏水层析、DEAE离子交换层析和Superdex-200凝胶层析柱组合技术对精恶唑禾草灵酯酶进行分离纯化,计算了纯化过程中酯酶的比活力、纯化倍数和回收率。[结果]胞内酯酶最适...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张名位 郭宝江 张瑞芬 池建伟 魏振承 徐志宏 张雁
目的分离、纯化和鉴定黑米抗氧化的主要活性成分。方法以体外总抗氧化能力为活性跟踪指标,对黑米抗氧化提取物用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等不同极性溶剂萃取分部后得到抗氧化能力最强的部分,再用SephadexLH-20分离得到抗氧化主活性成分,采用紫外-可见光谱、红外光谱、ESI-MS质谱和核磁共振(1HNMR和13CNMR)波谱法对其进行结构解析。结果黑米抗氧化提取物的5种溶剂萃取物以水部和正丁醇部的抗氧化能力最强,其总抗氧化能力分别为383和392ku·g-1,其中,从水部可得到4种抗氧化主活性成分,总抗氧化能力分别为976、878、1134和1087ku·g-1。波谱结构解析表明,4种成分均...
关键词：
黑米 抗氧化活性成分 结构鉴定
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵晓蕾 田甜 胡远亮 赵述淼 梁运祥
通过高效凝胶过滤层析和反相高效液相色谱先后对大米渣蛋白酶解后的多肽溶液进行分离纯化,分别得到组分2和组分RF9;再经反相高效液相色谱-质谱联用对组分RF9进行分析鉴定得到抗氧化肽氨基酸序列L-Q-P-Y(Leu-Gln-Pro-Tyr),分子质量为520.277u。合成的抗氧化肽片段L-Q-P-Y质量浓度为1 mg/mL时,对DPPH自由基清除率达到85.84%。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张源淑 陈伟华 邹思湘
酪蛋白的胃蛋白酶水解物通过RP-HPLC进行分离,并用NG108-15 细胞对其进行阿片样活性鉴定。实验结果表明:酪蛋白经胃蛋白酶处理2 h 后, 其酶解产物中有阿片样活性物质产生, 而酪蛋白本身无阿片活性。
关键词：
酪蛋白 胃蛋白酶 阿片肽 阿片活性物质
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
常建红 刘延吉 田晓艳 王玉新 王晓东
研究了东北枸杞多糖的提取、分离纯化及其组分和结构的鉴定,结果表明:枸杞多糖水提的最佳条件为提取温度100℃,pH值11,料液比1:20,浸提2h;通过DEAE-SephadexA-50柱层析得到纯度较高的LBP-4,薄层分析LBP-4主要是由鼠李糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖醛酸组成。红外光谱和刚果红实验分析LBP-4具有糖类的特征吸收峰,是多种单糖通过α糖苷键及β糖苷键连接组成的杂多糖,不具有三股螺旋结构。
关键词：
东北枸杞 多糖 分离 纯化 鉴定
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陶正清 刘登勇 戴琛 刘源 周光宏 徐幸莲
为了明确盐水鸭中的关键性呈味肽,对盐水鸭水提物中的小分子肽进行了分离纯化和结构鉴定。采用分级超滤、葡聚糖凝胶Sephadex G-15过滤层析对盐水鸭的小分子肽提取液进行分离纯化,结合感官评定和电子舌分析筛选出其中呈味特性最强的组分,利用纳升液相色谱-电喷雾静电场轨道阱组合式高分辨质谱联用系统对其进行进一步分离纯化和结构鉴定。结果表明:超滤和凝胶分离后得到5个分离组分(F1、F2、F3、F4和F5),经过感官评定和电子舌分析后发现F1组分的稀释因子最高,达128,且与超滤组分(F)的滋味特征相似。因此对F1组分进行液质联用分析,得到7条由6~9个氨基酸残基组成的肽链,其中3条肽链可信度和相对离...
关键词：
盐水鸭 呈味肽 分离 鉴定 氨基酸序列
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
邓放明 龚淑俐 赵荣 杨伟丽
冠突散囊菌液体深层发酵滤液经浓缩,醇析,透析冻干得多糖粗品.粗多糖经Sevag法脱蛋白,DEAE-52阴离子交换柱层析纯化得到4种多糖.将含量最高的多糖ECP-A经Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析得到纯化的冠突散囊菌胞外多糖(ECP-A1和ECP-A2),并测定其相对分子质量.用紫外光谱和红外光谱分析鉴定该多糖,紫外光谱分析未见蛋白质(280 nm)与核酸(260 nm)的特征吸收峰,红外光谱揭示ECP-A1具有典型的多糖特征吸收峰,表明ECP-A1和ECP-A2为单一均匀组分的多糖.
关键词：
冠突散囊菌 胞外多糖 分离 纯化
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