【目的】拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验，分析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响，为解析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础。【方法】采集牦牛背最长肌组织，采用酶消化法和差速贴壁法分离牦牛肌内前体脂肪细胞；构建包装lncFAM200B超表达腺病毒，设计合成其siRNA干扰序列；通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析lncFAM200B超表达与干扰后脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、AP2,lncFAM200B潜在靶基因SIRT1、PTEN的表达水平；采用油红O染色、甘油三酯（TAG）测定、CCK-8检测等方法检测细胞内脂滴沉积情况、甘油三酯含量变化及细胞增殖情况。【结果】从牦牛背最长肌成功分离获得肌内前体脂肪细胞；lncFAM200B超表达后，脂肪分化标志基因C/EBPα、AP2表达量显著升高（P<0.05），随着诱导分化时间的增加，lncFAM200B潜在靶基因SIRT1表达量呈先降低后升高的趋势，PTEN表达量呈现先增高后降低趋势；细胞脂滴沉积显著增加（P<0.05），降低细胞脂肪沉积，且诱导分化第6天细胞内甘油三酯含量显著降低（P

［目的］本文旨在研究核受体共激活蛋白２（ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ２，ｎｃｏａ２）对猪肌内前体脂肪细胞分化能力的影响。［方法］用荧光定量ｐｃｒ（ｑｒｔ－ｐｃｒ）法检测ｎｃｏａ２在猪肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达变化；通过ｎｃｏａ２小干扰ｒｎａ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ｒｎａ，ｓｉｒｎａ）抑制内源ｎｃｏａ２的表达，并用油红ｏ染色检测沉默ｎｃｏａ２对肌内前体脂肪细胞分化能力的影响，通过ｑｒｔ－ｐｃｒ检测沉默ｎｃｏａ２对脂肪分化关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒγ，ｐ．．．

为分析山羊KLF16对肌内前体脂肪细胞分化的调控作用,利用RT-PCR克隆得到山羊KLF16基因序列,利用生物信息学分析山羊KLF16基因序列特征,通过过表达、油红O染色和qPCR等方法从形态学及分子水平分析过表达山羊KLF16后肌内脂肪细胞脂滴积聚及分化标志基因表达水平的变化。结果表明:1)克隆得到包含CDS区的山羊KLF16基因序列986bp,编码251个氨基酸,具有典型锌指结构;2)KLF16在山羊各组织广泛表达,其中腹部皮下脂肪组织表达量极显著高于其他组织(P<0.01);3)过表达山羊KLF16与对照组相比脂肪细胞脂滴积聚减少,分化标志基因PPARγ和PPARα极显著下调(P

【目的】以小鼠成肌细胞(C2C12)为模型探讨蛋氨酸代谢产物腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)对肌肉来源的多能干细胞成脂分化及脂肪沉积的影响。【方法】分别用含有0、0.25、1.0和2.0 mmol·L-1SAM的培养基处理细胞,在处理后的0、24、36和48 h分别对各处理组细胞进行油红O染色观察细胞形态并测定光密度(OD)值;在处理后第2天收集细胞总RNA与总蛋白,分别用RT-PCR和western blotting方法检测细胞成脂相关基因的mRNA与蛋白表达水平。【结果】经SAM处理后,细胞表现出脂肪细胞的形态特征;细胞内脂肪沉积水平上升,并且随SAM处理浓...

将160头体质量27 kg左右的杜×(长×梅)三元杂交商品猪随机分成试验组和对照组,每组设4个重复,每个重复20头,公母各半。在试验组基础日粮中添加75 mg.kg-1脂肪细胞膜蛋白抗体(简称OAAb),饲喂104 d后,从每组选出体质量相近的12头猪(公母各半)屠宰,记录内脏器官和脂肪组织质量,同时采集血样。结果显示:试验组平均日增质量、饲料报酬分别提高13.03%(P<0.01)和7.49%;试验组背膘厚、肾周脂肪指数、肠系膜脂肪指数和皮下脂肪指数分别下降24.14%(P<0.01)、27.27%(P<0.05)、20.42%(P<0.01)和29.11%(P<0.01),而肌内脂肪含量则...

[目的]本试验旨在分析脂肪自分泌因子Chemerin在牛肌内成熟脂肪细胞脂解中的作用及调控机制。[方法]体外培养牛肌内成熟脂肪细胞,采用油红O染色与抽提法检测成熟脂肪细胞脂解过程中脂肪含量变化,通过比色法测定细胞中甘油及游离脂肪酸的释放量;采用RT-q PCR及Western blot技术分析脂解关键基因PPARα、LPL与HSL mRNA及蛋白的表达情况。[结果]在牛肌内成熟脂肪细胞脂解过程中,细胞中Chemerin及其受体CMKLR1 mRNA表达量显著降低(P<0.01)。[结论]Chemerin通

【目的】建立牛前体脂肪细胞的体外分离培养方法,研究牛前体脂肪细胞的生物学特性和分化特征,为研究牛脂肪发育和脂肪沉积的机制提供一种简便有效的细胞模型。【方法】采用Ⅰ型胶原酶消化法自新生牛脂肪组织中获得前体脂肪细胞,对培养的牛前体脂肪细胞进行形态学观察、生长曲线测定、油红O染色及脂肪细胞标志基因LPL、PPAR-r和脂联素表达研究。【结果】80%的牛前体脂肪细胞接种后12h开始贴壁,4d后开始向脂肪细胞转化,10d后绝大部分细胞脂滴融合,细胞脂肪含量增加;分离的牛前体脂肪细胞接种后1~2d生长缓慢,3~8d进入对数生长期,9d后进入平台期,之后细胞数目开始下降。经胰岛素诱导分化过程中,LPL在牛前...

［目的］研究瘦素受体（ｌｅｐｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｌｅｐｒ）的ｍｒｎＡ表达和编码序列单核苷酸多态性（ｃ ＳｎｐＳ）对猪脂肪沉积性状的影响。［方法］本文旨在利用实时荧光定量ｐｃｒ（ｒｔ－ｑ ｐｃｒ）方法和免疫印迹方法检测了该基因在高脂猪和低脂猪背最长肌、背膘、心、肝和肾共５种组织样中的ｍｒｎＡ和蛋白表达量，利用直接测序方法检测了ｌｅｐｒ第１８外显子ｃ ＳｎｐＳ，并对ｌｅｐｒ表达量、编码序列单核苷酸多态位点与苏钟猪脂肪沉积相关性状进行了关联分析。［结果］ｒｔ－ｑ ｐｃｒ结果表明：ｌｅｐｒ ｍｒｎＡ在这５种组织中均有表达，且差异显著（ｐ＜０．０５），其中背膘组织中的表达量显著高于其他组织（ｐ＜０．．．

【目的】探究bta-miR-33b对牛前体脂肪细胞分化的作用,并对此过程中潜在的靶基因进行验证。【方法】分离培养秦川牛前体脂肪细胞并进行诱导分化,PCR检测bta-miR-33b在前体脂肪细胞分化过程中的时序表达。对牛前体脂肪细胞体外转染bta-miR-33b的mimic、mimic negative control (mimic NC)、inhibitor、inhibitor negative control (inhibitor NC)进行诱导分化培养,于分化培养的不同时间取样,检测脂肪细胞分化标志基因(过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)基因、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因)的mRNA表达量及甘油三酯和脂滴含量。预测bta-miR-33b的靶基因,并通过双荧光素酶报告系统验证靶向关系、Western Blot检测靶蛋白的表达量。【结果】在秦川牛前体脂肪细胞分化过程中,bta-miR-33b的表达量呈下降趋势。在前体脂肪细胞分化过程中,bta-miR-33b mimic可抑制脂肪分化标志基因的表达,降低细胞中甘油三酯和脂滴的含量; bta-miR-33b inhibitor可促进脂肪分化标志基因的表达,提高甘油三酯和脂滴的含量。高迁移率族蛋白A2(High mobility group AT-hook 2,HMGA2)基因、扭曲相关蛋白(Twist family bHLH transcription factor 1,TWIST1)基因是bta-miR-33b的靶基因;脂肪细胞分化过程中,bta-miR-33b能够调控HMGA2和TWIST1蛋白水平的表达。【结论】bta-miR-33b对秦川牛前体脂肪细胞体外分化具有抑制作用;HMGA2和TWIST1是bta-miR-33b的靶基因。

研究了饲料脂肪水平对吉富罗非鱼(Genetic Improvement of Farmed Tilapia,GIFT)的部分形体指标、肌肉肝脏及腹腔脂肪组织的脂肪沉积及脂肪酸组成的影响,同时探讨了鱼体对饲料脂肪酸的吸收利用能力。实验设置饲料脂肪水平分别为1.73%、3.71%、5.69%、7.67%、9.64%、16.55%共6个梯度组,每组3个重复,饲养90d。结果显示:5.69%、7.67%及9.64%脂肪组吉富罗非鱼肥满度较高;1.73%和16.55%脂肪组的肝体指数显著高于其他实验组(P<0.05);除了1.73%脂肪组,其他各组中饲料脂肪水平越高,鱼体的脏体指数越高。7.67%脂肪组...

为研究PPARA对绵羊肌内脂肪(IMF)沉积的影响及作用机制，寻找绵羊肌内脂肪沉积相关分子标记，以小尾寒羊(STH)和萨寒杂交(STH×SFK)F_1群体为研究对象，通过测定其肉品质，利用H&E染色和油红O染色比较2个绵羊群体背最长肌组织学结构及脂滴分布；利用qRT-PCR和WB技术检测PPARA mRNA水平和蛋白水平在不同群体间的表达差异，并分析PPARA基因与肌内脂肪的相关性；Sanger测序技术检测PPARA基因SNP位点以评估其作为绵羊肌内脂肪沉积相关遗传标记的可能性。结果表明：小尾寒羊剪切力和失水率极显著高于萨寒杂交，但是pH值极显著低于萨寒杂交，大理石花纹评分小尾寒羊低于萨寒杂交群体；组织学染色显示，小尾寒羊肌纤维较粗，排列紧密，肌内脂肪在肌纤维间隙集中分布；萨寒杂交肌纤维较细且结构松散，肌内脂肪在肌细胞间及肌纤维间隙均匀、广泛分布，含量更高；PPARA mRNA表达量小尾寒羊群体显著高于萨寒杂交群体，PPARA蛋白表达量小尾寒羊群体极显著高于萨寒杂交群体；相关性分析显示，PPARA基因表达量与绵羊脂滴面积比及pH值呈极显著负相关，与剪切力和失水率呈极显著正相关，与大理石花纹评分弱相关；Sanger测序结果分析显示，2个绵羊群体PPARA基因第2内含子T49885C、T50007C、G50013A、G50835A、G50942A及G51154C位置上发生碱基突变，但小尾寒羊群体未检测到C49885T突变。SNP遗传多样性分析显示，SNP位点群体纯合度均大于杂合度，在群体中处于中低度多态；除G50835A突变偏离了Hardy-Weinberg平衡，其余SNPs均符合Hardy-Weinberg平衡，遗传基础稳定。研究认为，PPARA基因对绵羊肌内脂肪沉积具有重要影响，可作为绵羊肌内脂肪性状选择的潜在分子遗传标记。

设置养分贮存损失状态不同的4类培养液,分别添加一定浓度梯度的L-谷氨酰胺(L-G lu tam ine,L-G ln)培养大鼠前体脂肪细胞。通过形态学观察、M TT比色、油红O染色提取法,比较各组细胞形态及增殖与分化的效果。结果表明,添加0 mm o l/L L-G ln的新鲜培养液和配制后4℃冷藏20 d,再添加0.685 mm o l/L L-G ln的培养液,均较利于前体脂肪细胞的增殖与分化;配制后4℃冷藏90 d的培养液,对前体脂肪细胞培养效果较差,添加L-G ln也不能使培养效果得到改善。另外,启封后的M 199和胎牛血清(F eta l C a lf Serum,FCS)分别冷藏不...

为建立绵羊肌内脂肪前体细胞的体外培养模型,选用组织块法培养绵羊肌内脂肪前体细胞,制备用荧光染料PE(Phycoerythrin)标记的兔抗绵羊Pref-1蛋白的多克隆抗体,通过流式细胞术分离纯化脂肪前体细胞,对纯化后的细胞进行诱导分化以及油红O染色鉴定。结果表明:利用流式细胞仪能分选纯化出被标记的肌内脂肪前体细胞且分选率近30%;纯化后得到的细胞是功能活跃的脂肪前体细胞。研究表明,用绵羊羔羊肌肉组织采用组织块培养法可以建立绵羊肌内脂肪前体细胞培养模型,抗绵羊Pref-1蛋白多克隆抗体可以作为纯化脂肪前体细胞的工具。

本实验以我国重要的海水养殖鱼类大黄鱼[初始体质量(13.57±0.33)g]为研究对象,在浮式网箱中进行为期8周的摄食生长实验,探讨饲料脂肪水平和投喂频率对大黄鱼生长、体组成及脂肪沉积的影响。采用3×2双因子实验设计,其中饲料脂肪水平分别为9%、12%和15%,投喂频率分别为2次/天和1次/天。结果表明:投喂频率对大黄鱼特定生长率(SGR)和饲料效率(FER)均有显著影响(P<0.05),而饲料脂肪水平仅对FER有显著影响(P

以鱼油为脂肪源,分别配制脂肪水平为3.7%、6.8%、9.6%、13.1%、15.6%的5种实验饲料,对平均初始体质量为(7.13±0.03)g的许氏平鲉进行为期60 d的饲养实验,探讨饲料脂肪水平对许氏平鲉形体指数、脂肪沉积、血液生化指标与脂肪代谢酶活性的影响。结果表明:肝体指数、脏体指数随着饲料脂肪水平的升高显著提高(P0.05);许氏平鲉鱼体脂肪沉积随饲料脂肪水平的增加显著提高(P<0.05),15.6%全鱼、肌肉、肝脏脂肪含量最高,显著高于3.7%、6.8%组(P<0.05)。随着脂肪添加量的增加,许氏平鲉肝脏葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6...