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[期刊] 华中师范大学学报(自然科学版)
[作者]
喻兆阳 李娟 黎华 费东 薛慧颖
探究KLF4沉默与经不同作用浓度阿霉素处理诱导的DNA损伤对肝癌HepG2细胞增殖凋亡的影响及其作用机制.应用RNA干扰技术,采用siRNA转染HepG2细胞以沉默KLF4基因.采用MTT法检测KLF4沉默前后对HepG2细胞增殖的影响,使用流式细胞术检测KLF4沉默前后对HepG2细胞周期变化影响,应用Western blot法检测转染前后HepG2细胞中KLF4蛋白及细胞周期相关蛋白表达变化.Western blot检测到高浓度的阿霉素促进KLF4的表达,并且低浓度的阿霉素可使得细胞停滞在G_2/M期,高浓度的阿霉素则使部分细胞凋亡(19.31%).将KLF4沉默后,发现细胞生长变缓,低浓度的阿霉素处理后,细胞随时间增加而出现更多的细胞凋亡;高浓度的阿霉素处理后,细胞数明显减少,更多的细胞发生凋亡(28.89%),且在KLF4沉默前后均发现低浓度阿霉素促进p53与p21表达,高浓度阿霉素抑制其表达.阿霉素诱导的DNA损伤可提高KLF4的表达,KLF4依赖于DNA损伤激活的p53促进p21的表达,进而引起G_1/S期细胞周期阻滞.沉默KLF4与阿霉素诱导的DNA损伤可协同抑制肝癌细胞的增殖、促进凋亡,其在肝癌细胞HepG2中扮演十分重要的角色.
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陶叶杏 余倩 刘瑞婷 张曦文 吴婷 潘思轶 徐晓云
为了研究陈化对于广陈皮抗氧化活性的影响，以新鲜干燥果皮、贮藏1 a和10 a广陈皮（Pericarpium Citri Reticulatae‘Chachi’,PCR-C）为研究对象，提取纯化得到广陈皮黄酮类化合物提取物（PCR-CF），以叔丁基过氧化氢（t-BHP）诱导HepG2细胞作为氧化应激损伤模型，评价陈皮的抗氧化活性，同时利用qRT-PCR和Western blot技术进一步探究其抗氧化活性作用分子机制。结果显示，广陈皮陈化过程中，橙皮苷含量呈现波动，但总体上是下降趋势；而多甲氧基黄酮及其总含量呈增加趋势，其中PCR-C10F中含量最高，PMFs总含量达到（98.66±0.56）mg/g。而且，不同贮藏年份PCR-CF可明显提高SOD、GSH水平和降低MDA含量，且不同年份间差异显著，PCR-C10F抗氧化活性最强，SOD、GSH、MDA水平分别达到（139.38±17.38）U/mg和（117.81±3.22）μmol/g、（0.39±0.03）nmol/mg。相关性分析表明，川陈皮素的积累是PCR-C10F维持氧化还原平衡的主要活性成分。此外，PCR-C10F显著上调Nrf2 mRNA以及其在胞核蛋白中的表达；从而激活抗氧化酶的mRNA和蛋白表达水平，HO-1的mRNA表达水平和蛋白表达水平显著降低。研究表明，陈皮在陈化过程中，多甲氧基黄酮含量呈现增加趋势，抗氧化活性不断增强，PCR-C10F能够通过调控Nrf2-ARE抗氧化信号通路起到氧化应激抵御保护作用。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘恩 郑楠 范彩云 张养东 王尚 黄帅 程建波
为研究砷（Ａｒｓｅｎｉｃ，Ａｓ）和铅（ＬｅＡｄ，Ｐｂ）单独以及联合作用对人肝癌细胞（ＨｕｍＡｎ Ｌｉｖｅｒ ｃＡｒｃｉｎｏｍＡ ｃｅＬＬｓ，ＨｅＰＧ２）毒性作用和细胞氧化损伤的机制，采用不同质量浓度的Ａｓ（２．６５、３．１５、３．６５、４．１５和４．６５μＧ／ｍＬ）和Ｐｂ（１６０、１９０、２２０、２５０和２８０μＧ／ｍＬ）以及质量浓度比为１∶５５的Ａｓ＋Ｐｂ分别或联合处理ＨｅＰＧ２细胞２４、４８和７２Ｈ，使用ｍＴＴ法检测细胞活力；细胞培养２４Ｈ后测定细胞活性氧（ｒｏｓ）、乳酸脱氢酶（ＬｄＨ）、丙二醛（ｍｄＡ）和还原性谷胱甘肽（ＧｓＨ）的相对含量。ｍＴＴ结果表明：Ａｓ、Ｐｂ和Ａｓ＋Ｐｂ的２４、４．．．
关键词：
砷 铅 人肝癌细胞 细胞毒性 氧化损伤
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杜金梁 贾睿 曹丽萍 殷国俊
为探明虎杖对鱼类损伤肝细胞是否具有修复作用,分离建鲤肝细胞,设6个试验组:I组(空白对照组);II组(CCl4模型组);III组(800μg/mL虎杖提取物对照组);IV组(造模前200、400、800μg/mL虎杖提取物处理组);V组(造模后200、400、800μg/mL虎杖提取物处理组);VI组(造模前、后200、400、800μg/mL虎杖提取物处理组)。各组细胞经处理后继续培养12 h,收集肝细胞培养液,检测上清培养液中丙氨酸转氨酶(GPT)、天冬氨酸转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)等酶活性,丙二醛(MDA)含量及肝细胞的存活率。结果表明:III组肝细...
关键词：
建鲤 虎杖提取物 肝细胞 四氯化碳
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
代国年 王桂荣 王萌 赵改红 杜丽娟 豆艳丽 叶得河
[目的]研究车前子提取物干预扑热息痛(Acetaminophen,APAP)引起小鼠肝损伤的作用,并探究其潜在作用机制。[方法]运用半仿生酶法提取车前子活性成分,采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)检测其主要成分。体内研究车前子提取物对APAP肝损伤的保护作用,将60只雌性昆明小白鼠随机分为正常对照组(NC)、APAP肝损伤模型组(LD)、车前子对照组(PA)以及APAP干预的车前子提取物高、中、低剂量组(HPA+LC、MPA+LD、LPA+LD)。其中NC组和LD组小鼠灌胃生理盐水、PA组小鼠灌胃200μg/mL车前子提取物,HPA+LD,MPA+LD和LPA+LD组小鼠分别灌胃车前子提取物200,100,50μg/mL,每天2次,连续6 d;末次给药12 h后,采血并分离肝脏,检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性,评价肝脏损伤程度;检测肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性及谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢(H_2O_2)和丙二醛(MDA)含量,评价肝脏的氧化应激程度;检测CYP2E1mRNA和蛋白表达,并通过细胞色素P450酶2E1(Cytochrome 2E1,CYP2E1)法体外筛选车前子抗APAP肝损伤可能的有效成分。[结果] LC-MS检测发现,车前子提取物有37种主要成分;血清生化指标检测发现,不同剂量的车前子提取物明显减少APAP诱导的氧化产物,增强抗氧化防御能力,减轻肝脏损伤且呈剂量依赖性;车前子提取物显著降低CYP2E1 mRNA和蛋白表达,说明车前子抑制CYP2E1的活性;车前子提取物中抗APAP肝损伤的有效成分为车前草苷D、车前草苷E、高车前素和高车前苷。[结论]车前子提取物的有效成分为车前草苷D、车前草苷E、高车前素和高车前苷。车前子提取物对APAP诱导的肝损伤具有保护作用,其潜在作用机制可能与抑制肝脏CYP2E1的表达和活性有关。
关键词：
车前子提取物 扑热息痛 肝损伤
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
解芸菲 孙超 孙婵 王勇 吕彬 安磊
【目的】运用si RNA沉默小鼠前体脂肪细胞3T3-L1的细胞信号负调控因子3基因(SOCS3),探讨SOCS3在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导3T3-L1细胞凋亡中的作用。【方法】体外培养3T3-L1细胞,用0,20,40,60,80,100,150,200 ng/mL TNF-α处理细胞24 h后,观察细胞凋亡情况。利用脂质体LipofectamineTM2000,用化学合成的SOCS3小干扰RNA(si RNA)转染3T3-L1细胞,用100 ng/mL TNF-α刺激24 h,荧光显微镜下观察细胞凋亡的变化,RT-PCR检测SOCS3、c-myc和survivinmRNA的表达情况...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
马蕊 刘仲华 黄建安 林勇 陈金华 钟源
为比较绿茶、红茶提取物对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞光损伤的抑制作用,用不同浓度的绿茶、红茶提取物对人表皮角质形成细胞(HaCaT)预处理6 h,以60 mJ/cm2的剂量照射细胞,比较细胞生存率和细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及丙二醛(MDA)含量的变化,用荧光法检测细胞内活性氧(ROS)的含量,用流式细胞仪检测细胞的凋亡变化,并对绿茶、红茶的茶多酚及儿茶素类物质含量进行比较。结果表明:与空白对照组相比,UVB辐射模型组的HaCaT细胞活性下降了21.61%,细胞损伤严重;与UVB辐射模型组相比,绿茶、红茶提取物...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
贾睿1 2 杜金梁2 曹丽萍2 徐跑1 2 殷国俊1 2 柏爱旭3
为探讨黄芪多糖对鲤肝细胞的保护作用，利用8 mmol/L的四氯化碳（CCl4）作用肝细胞4 h来构建鲤肝细胞体外损伤模型，用不同质量浓度（0.2、0.4和0.8 mg/mL）的黄芪多糖分别前处理、后处理和前后处理肝细胞，然后观察肝细胞形态，检测肝细胞活力，细胞上清中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量以及肝细胞中细胞色素P450酶1A和3A（CYP1A和CYP3A） mRNA的相对表达量。结果显示：黄芪多糖显著地抑制由CCl4损伤引起的肝细胞培养上清中GPT、GOT、LDH活性和MDA含量的升高，提高SOD活性及肝细胞...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
贾睿 杜金梁 曹丽萍 徐跑 殷国俊 柏爱旭
为探讨黄芪多糖对鲤肝细胞的保护作用,利用8 mmol/L的四氯化碳(CCl4)作用肝细胞4 h来构建鲤肝细胞体外损伤模型,用不同质量浓度(0.2、0.4和0.8 mg/mL)的黄芪多糖分别前处理、后处理和前后处理肝细胞,然后观察肝细胞形态,检测肝细胞活力,细胞上清中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量以及肝细胞中细胞色素P450酶1A和3A(CYP1A和CYP3A)mRNA的相对表达量。结果显示:黄芪多糖显著地抑制由CCl4损伤引起的肝细胞培养上清中GPT、GOT、LDH活性和MDA含量的升高,提高SOD活性及肝细胞的...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
林勇 刘硕 朱华伟 刘仲华
为研究红树莓对中波紫外线(UVB)诱导的人表皮角质形成细胞(HaCaT)光损伤的抑制作用,用20、40、80mg/mL3个不同剂量的红树莓果汁预处理人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT细胞)6h,再采用60mJ/cm2强度UVB照射细胞;用MTT法检测细胞的生存率,采用比色法检测细胞中丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,用荧光法检测细胞内活性氧自由基(ROS)的含量,用倒置显微镜和流式细胞仪观察、检测细胞的凋亡状况。结果表明:UVB辐射对HaCaT细胞造成比较严重的损伤;相比于空白对照组,UVB辐...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
朱琳 陈小冬
为研究机体内稳态调节机制,经筛选高脂小鼠转录组数据得到特异上调的Steap4基因,对其进行不同物种间基因多态性比较,并在HepG2细胞中异源超表达该基因24 h后检测自噬相关基因在转录和翻译水平的变化。结果显示,STEAP4基因在不同物种间较保守,其基因多态性主要在翻译水平产生变化,小鼠Steap4基因与人源STEAP4基因相似性最高。荧光定量PCR的结果表明mSTEAP4对HepG2自噬关键基因无显著性影响,但Western blot结果显示mSTEAP4能够下调自噬相关蛋白的表达量,即mSTEAP4从蛋白水平抑制HepG2细胞自噬水平。STEAP4在细胞处于内稳态时会抑制自噬,降低细胞中的物质能量代谢,使细胞处于静息状态。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘英娟 杜金梁 贾睿 曹丽萍 王佳豪 殷国俊
研究中药枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对四氯化碳(CCl4)诱导的建鲤(Cyprinus carpiovar Jian)肝细胞急性损伤的保护作用。利用8 mmol/L四氯化碳构建建鲤肝细胞损伤模型,用不同浓度的枸杞多糖处理肝细胞,设空白对照组、枸杞多糖对照组(0.4 mg/mL)、模型组(CCl4)、预防组(CCl4处理前加枸杞多糖孵育,0.1、0.2和0.4 mg/mL)、治疗组(CCl4处理后加枸杞多糖孵育,0.1、0.2和0.4 mg/mL)和预防治疗组(枸杞多糖孵育后经CCl4处理再经枸杞多糖孵育,0.1、0.2和0.4 mg/mL)。...
[期刊] 华中师范大学学报(自然科学版)
[作者]
沈浩 曹郁 雷明 ZAHID Kashif Rafiq 吴雪 刘珂 刘艳丽 刘金林 杨继红 赵浩斌 祁超
木糖醇亚硒酸酯是一种新合成的化合物,其能够引发人肝癌细胞系SMMC-7221细胞凋亡并且其引发SMMC-7221细胞凋亡伴随着谷胱甘肽的消耗.为了提供更多关于木糖醇亚硒酸酯的抗癌机制研究,该实验用荧光定量PCR技术检测经该化合物处理后的SMMC-7221细胞中caspase-3、caspase-8、caspase-9这3个基因mRNA水平的变化.在经0.5mg/L或1mg/L木糖醇亚硒酸酯分别处理SMMC-7221细胞12、24、36、48h后,与对照组相比,caspase-3的mRNA表达水平从1248
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
何敏 梁晓霞 廖礼 李雪 赵思琦
将120只小鼠随机分为空白组、四氯化碳(CCl_4)组、联苯双酯(DDB)组及低、中、高3个剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)的原药诃子、白狼毒制诃子和茜草制诃子组,共12个组,每组10只。给药7 d后,腹腔注射10 m L/kgCCl_4油溶液,建立小鼠肝损伤模型,检测各组血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活力,肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)活力,观察肝脏组织学结构变化。研究结果显示,诃子不同炮制品可减少CCl_4所引起的小鼠肝损伤,显著降低血清ALT、AST活力,提高肝脏SOD、GSH–Px活力,并对肝细胞有一定保护作用;药效表现由强到弱依次为茜草制诃子、白狼毒制诃子、生药诃子,且高剂量的效果优于低剂量。以茜草制诃子高剂量组4.0 g/kg效果最为理想,其作用机制可能与抗氧化性有关。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
龙玲 吴达 霍生东
【目的】探讨红景天甙(Salidroside)体外诱导人肝癌QGY-7703细胞凋亡的作用及其可能的机制。【方法】以体外培养的人肝癌QGY-7703细胞作为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测红景天甙对QGY-7703细胞生长的抑制作用,采用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术,分析红景天甙对QGY-7703细胞凋亡的诱导作用;采用Western blot免疫印迹法探讨红景天甙诱导QGY-7703细胞凋亡的可能机制。【结果】MTT比色法试验结果表明,0.01,0.1,1,10和100μg/mL红景天甙对QGY-7703细胞生长均有不同程度的抑制作用,细...
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