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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵海全 马文丽 危敏 柯昌文 郑焕英 郑文岭
为了探讨HSV-2对血管内皮样细胞ECV304的致病特性,通过体外培养血管内皮样细胞ECV304并感染HSV-2后,采用RT-PCR和间接免疫荧光法检测HSV-2病毒的潜伏相关转录体基因的表达,并利用相差显微镜及电子显微镜观察ECV304感染HSV-2后的细胞形态变化。结果表明,血管内皮样细胞ECV304感染HSV-2后12~24h即可检测到潜伏相关转录体基因表达;感染后1~2d即可出现明显的细胞病变,提示HSV-2可感染ECV304细胞,并在其中活化复制,诱导ECV304细胞出现细胞融合和破裂死亡。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马泉荔 洪海霞 张彦明 徐浩 杨蒙 苏正元
为了建立稳定的血管内皮细胞系,进而为研究猪瘟病毒致病机理提供理想的细胞模型,将脂质体转染的pCIneo-hTERT质粒导入原代猪脐静脉血管内皮细胞中,经G418抗性筛选,挑取阳性克隆并扩大培养。对转染后的细胞进行形态观察,研究其增殖及生长特征,并对其端粒酶活性进行了鉴定。结果表明,转染细胞单层贴壁生长,有接触抑制性,呈铺路石状;F-ⅧAg和CD34免疫荧光鉴定阳性,具有转染前细胞特征;转染后细胞培养代数增加,传至第10代和15代转染后细胞端粒酶活性检测为阳性。说明hTERT转染可以延长猪血管内皮细胞的寿命。
关键词：
端粒酶催化亚基 脐静脉血管内皮细胞 猪
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
郭洋 伊鹏霏 吕钊君 白慧云 韦旭斌 杜绍范 穆祥
探讨大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法,为研究猪链球菌引起脑膜炎的致病机理打下基础。采用脑组织匀浆、二次过筛及酶消化技术分离大鼠脑微血管段,对分离的脑微血管内皮细胞进行了体外培养、形态学观察、免疫荧光鉴定及生长曲线的MTT法测定。结果表明:倒置显微镜下,细胞具有单层"铺路石样"排列的典型特征,免疫荧光检测第Ⅷ因子相关抗原呈阳性,成功建立了大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法。
关键词：
大鼠 脑 微血管内皮细胞 培养 鉴定
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
王海桃 刘赛
采用人脐静脉内皮细胞株ECV304体外培养的方法,复制过氧化氢(H2O2终浓度为50μg/ml)诱导的血管内皮细胞氧化损伤模型,应用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量,采用化学比色法分别检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、总一氧化氮合酶(T-NOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。结果显示,与正常对照组相比,过氧化氢损伤的血管内皮细胞其GSH-PX活性、T-AOC、NO含量及T-NOS活性均明显降低(P<0.01),iNOS活性明显增加(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
洪海霞 张彦明 孙裴 苏正元 魏中锋 张永国
采用1g/L胶原酶灌注猪脐静脉,消化分离内皮细胞并在适宜条件下培养。对培养细胞的生长特性进行检测,并对细胞进行第 因子相关抗原(F- RAg)和扫描电镜形态学鉴定。结果表明,70%细胞在24h内贴壁,第3～5天生长迅速,第4～5天长成单层。培养的细胞呈单层贴壁生长,典型铺路石状,第 因子相关抗原(F- RAg)检测阳性,证明培养的细胞为血管内皮细胞。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
吴康 蔡春芳 倪建国 王永玲 朱国
借鉴哺乳动物内皮细胞体外培养技术 ,结合鱼类细胞自身特点 ,纯化培养鲤血管内皮细胞并传至 3代 ,以此作为粘附材料。应用淋巴细胞分离液离心技术并结合玻璃粘附法分离纯化鲫、草鱼外周血中淋巴细胞、单核细胞 ,并与上述 3代内皮细胞进行免疫粘附试验 ,同时进行免疫粘附动力学观察。结果显示 ,鲫、草鱼两类细胞对内皮细胞的粘附率分别为 :0 .0 9± 0 .0 13,0 .2 0± 0 .0 18;0 .11± 0 .0 15,0 .2 1± 0 .0 2 3。表明鲤科鱼类不同种的同类细胞粘附率差异不大 ,而同种不同类细胞则差异显著。动力学观察分析表明 ,淋巴细胞粘附较快 ,60min进入平台期 ;单...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
周宏超 范光丽 穆祥 胡格 索占伟
通过检测金丝桃苷对SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌前列环素(PGI2)、血栓素(TXA2)及血小板活化因子(PAF)的影响,探索中药复方有效成分金丝桃苷对仔猪水肿病的疗效机制。将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为阴性对照组、阳性对照组、不同质量浓度金丝桃苷处理组等6个组,采用ELISA法测定了培养3,6,9和12 h时细胞上清液中PGI2、TXA2及PAF质量浓度的变化。结果表明,不同质量浓度金丝桃苷处理组对SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞过量分泌PG12、PAF无明显的抑制作用;1和5μg／mL质量浓度金丝桃苷处理组对SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞TXA2的分泌具有明显的...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
曾巧英 陆承平
猪链球菌2型(SS2)主要引起人和猪的脑膜炎,但其毒力因子溶菌酶释放蛋白(MRP)对构成血脑屏障的微血管内皮细胞有何致病作用迄今不明。为此分离仔兔脾微血管内皮细胞(SMEC),纯化后用SV40-T 抗原转化后用作试验的细胞模型。将单层SMEC 和电泳纯MRP 溶液共孵育,染色后,光镜观察,发现MRP 可诱导SMEC发生两种典型形态学变化:致密细胞单层中出现巨大空洞而呈网状;空洞内有细胞融合,形成多核巨细胞,随后巨细胞核极度浓缩释出,巨细胞消失。研究结果表明, MRP 单独足以破坏大脑的血管内皮细胞屏障。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
靳晓霞 罗海玲 许旭 闫乐艳 葛素云 刘昆 袁飞
为构建绵羊血管内皮生长因子(VEGF)基因siRNA载体并对其在绵羊颗粒细胞中的表达,采用DMEM/F12培养液对绵羊卵巢颗粒细胞进行体外培养,采用脂质体转染法将干扰载体转染到颗粒细胞中,用ELISA试剂盒测定转染后各组颗粒细胞中VEGF的表达量。转染阳性对照载体PGC的颗粒细胞组为对照组,转染PGC-1、PGC-2和PGC-3的颗粒细胞组分别为试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组Ⅲ。与对照组相比,各试验组中VEGF的表达量分别降低了55.37%、81.45%和73.29%,其中载体PGC-2所转染的细胞中VEGF的表达量最少,说明在3个载体中,PGC-2对VEGF的基因沉默效果最好。
关键词：
绵羊 血管内皮生长因子 颗粒细胞 转染
[期刊] 水产学报
[作者]
艾单寒 侯家昊 刘芳园 顾泽茂 胡瑞雪
为了建立蛙脑微血管内皮细胞原代培养方法，实验以黑斑侧褶蛙脑组织为实验材料，在无菌条件下分离出大脑灰质，利用0.1% Ⅱ型胶原酶和胶原酶-分散酶进行消化，经过Percoll密度梯度离心后，将获取的脑微血管段接种于鼠尾胶包被的培养瓶中，于28℃、5% CO_(2)条件下原代培养蛙脑微血管内皮细胞，并通过细胞形态学观察和Ⅷ因子相关抗原免疫荧光对细胞进行鉴定，最后用四唑蓝比色法（MTT）测定细胞的生长状态。结果显示，微血管段在体外培养1 d后开始贴壁生长，并逐渐扩大成团簇状，培养至7 d时，细胞呈“铺石路样”镶嵌式排列，表现为区域性单层生长；Ⅷ因子免疫荧光检测发现胞质呈红色，表达为阳性，阳性细胞率达97%以上；MTT实验显示细胞在第3～5 d时，生长速度最快。本研究首次建立了蛙脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定方法，为体外研究蛙类神经性疾病的发病机理奠定基础，也为相关药物的研发和筛选提供了细胞模型。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王新 谭建华 索占伟 刘金玲 杜绍范 穆祥 韦旭斌
将大鼠肠粘膜微血管内皮细胞分为空白对照组、BSA对照组、LPS1组、LPS2组、LT 1组和LT 2组6个组,分别用维持培养液,含50μg/mL BSA、1或10μg/mL LPS、10或50μg/mL LT的培养液静置培养12 h,研究不同浓度LPS和LT对体外大鼠肠粘膜微血管内皮细胞形态及NO分泌量的影响,并确定LPS和LT致大鼠肠粘膜微血管内皮细胞损伤的模型剂量。结果表明,LPS可使细胞长宽比增大,间隙变宽,而LT可使细胞肿大,排列紊乱;各浓度的LPS和LT均能引起肠粘膜微血管内皮细胞的NO分泌量升高,但1μg/mL LPS与50μg/mL LT的作用更明显;LPS和LT致大鼠肠粘膜微血...
关键词：
肠粘膜 微血管内皮细胞 LPS LT
[期刊] 西南农业学报
[作者]
宋凯 曹忻 石国庆 周平 罗海玲
为研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟的影响。本试验仅在成熟培养阶段的不同培养液(血清培养体系fetal bovine serum,FBS和牛血清白蛋白培养体系albumin from bovine serum,BSA)中添加不同浓度VEGF(5和10 ng/mL),通过成熟率、卵裂率、桑葚胚率、囊胚率反映其影响效果。结果表明:FBS体系中,添加VEGF两试验组卵母细胞成熟率提高到84.61%和82.87%(P<0.01);BSA体系中,2试验组成熟率分别提高到82.40%和79.21%(P<0.01);无...
关键词：
血管内皮生长因子 卵母细胞体外成熟 绵羊
[期刊] 中国科学技术大学学报
[作者]
徐索文 葛均波 翁建平
血管内皮细胞是机体维持血管健康和稳态的关键细胞类型。内皮细胞功能失调 (Endothelial dysfunction，ED) 作为泛血管疾病（Panvascular diseases）的核心环节，是一个多步骤、多危险因素参与的复杂病理过程，涉及内皮细胞损伤死亡、通透性的增加、血管收缩、炎症、氧化应激、白细胞向内皮细胞的粘附、代谢异常、内皮-间充质转变、血小板聚集与血栓形成等。ED在心血管疾病（动脉粥样硬化，高血压，心衰，外周血管病变）、肿瘤、代谢性疾病（糖尿病、肥胖、胰岛素抵抗、脂肪肝）、呼吸系统疾病（急性肺损伤、肺动脉高压等）、病毒感染（COVID-19）等的发生发展过程中都扮演重要角色。因此，血管内皮功能评价对于临床诊疗有重要的意义。本文以ED与泛血管疾病的关系为切入点，综述近5年来内皮细胞功能在泛血管疾病中的研究进展，旨在阐明泛血管疾病的最新分子机制，加速靶向ED的泛血管药学的发展。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李洪志 刘洁婷 郭冉 金立波 李海燕 李校堃
【目的】应用基因工程技术,获得表达血管内皮生长因子(VEGF)的转基因番茄植株,为以番茄作为生物反应器生产药用蛋白奠定基础。【方法】利用植物偏好的密码子改造合成VEGF基因全长,构建植物表达载体p1390R-VEGF,通过农杆菌菌株EHA105介导将其T-DNA区转入到番茄细胞中,再生后获得转基因番茄植株,对其进行分子和蛋白水平检测。【结果】成功构建了植物整株表达载体p1390R-VEGF,建立了高频的番茄再生培养体系;PCR检测、Southern blot和Western blot检测结果表明,VEGF基因已经转入番茄中,并成功得到了表达。【结论】得到了转基因番茄植株和果实,且VEGF蛋白有...
[期刊] 水产学报
[作者]
吴亚锋 王旭远 庞茂达 陆承平 刘永杰
为了确定南京市某渔场发病鱼感染的病原,本研究采集患鱼脏器,采用平板培养、生化实验和特异性gyr B基因扩增测序等方法进行细菌的分离鉴定;利用PCR技术检测分离株毒力基因的分布,分析其生物学特性,并进一步通过动物实验确定菌株致病力。结果分离到1株水族箱气单胞菌,命名为LK-25。该菌株携带5种主要毒力基因:气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、细胞兴奋性肠毒素(alt)、温敏胞外蛋白酶(epr)和丝氨酸蛋白酶(ahp),其溶血性和溶蛋白能力较强,对斑马鱼的半数致死量为1.02×103CFU/尾,确定为强毒株。进化树分析表明,水族箱气单胞菌与嗜水气单胞菌达卡亚种亲缘关系较近。本研究在国内首次...
关键词：
水族箱气单胞菌 分离 鉴定 致病特性
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