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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨雄 刘秀侠 南昊 许晓东 陈红英
【目的】合成并克隆HIV-1单克隆抗体b12的单链抗体基因,在大肠杆菌中诱导表达,并分析表达产物的活性。【方法】以单抗b12的重链和轻链全基因为模板,分别扩增其可变区基因片段后,用重叠PCR的方法将二者拼接起来,形成scFv-VL-Linker-VH结构,并将其插入pET28a载体,构建原核表达载体pETb12-scFv。将pETb12-scFv转入大肠杆菌BL21StarTM(DE3),经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析;用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达产物进行分离纯化,用酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测纯化蛋白与HIV-1gp120...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张雪寒 张碧成 张强 汪伟 何孔旺
志贺毒素１（Ｓｈｉｇａ ｔｏｘｉｎ １，Ｓｔｘ１），系五聚体蛋白，是产志贺毒素性大肠杆菌（Ｓｈｉｇａ ｔｏｘｉｎ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ＥＳｃｈＥｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，ＳｔＥｃ）主要的毒素因子，但Ｓｔｘ１体外极不易可溶性表达，旨在克隆和表达志贺毒素１（Ｓｈｉｇａ ｔｏｘｉｎ １，Ｓｔｘ１）ａ亚基，体外获得可溶性表达的Ｓｔｘ１，以研制单克隆抗体。生物信息学软件分析Ｓｔｘ１ａ亚基氨基酸序列，Ｓｔｘ１ａ１亚基ｎ端为信号肽段，其ｃ端高疏水性和低免疫原性。ｐｃｒ扩增Ｓｔｘ１ａ亚基７３～７５９的６８７个核苷酸，与肝片吸虫Ｆｈ８基因串联，克隆到低温表达载体ｐ ｃｏｌｄⅠ以构建重组菌，诱导表达重组毒素ｈｉＳ－．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
牛俊奇 王爱勤 黄静丽 朱惠 李杨瑞 杨丽涛
【目的】克隆甘蔗可溶性酸性转化酶基因(SoSAI1)全长cDNA序列和5侧翼启动子序列,并分析其序列特征和基因表达模式。【方法】利用RACE技术克隆SoSAI1的全长cDNA序列,应用生物信息学软件分析SoSAI1预期编码蛋白特征;采用Genome Walking技术克隆SoSAI1的启动子序列;采用实时荧光定量PCR分析不同生长期SoSAI1在甘蔗叶和茎中的表达,以及PEG 6000、100 mmol·L-1NaCl和6℃胁迫下,SoSAI1在甘蔗苗期根和叶中表达模式。【结果】SoSAI1的cDNA序列全长为2 387 bp,ORF长2 058 bp,编码685个氨基酸,预测其分子量和等电点...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵朴 苏红辽 刘兴友 赵坤 胡建和 王三虎 姚四新 郑玉姝
【目的】可溶性表达猪流感病毒(SIV)NS1基因主要抗原区(NS1′)蛋白,获得具有良好抗原性的NS1′蛋白,并初步建立检测NS1抗体的斑点酶联吸附试验(Dot-ELISA)方法,为鉴别诊断猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪奠定基础。【方法】以质粒pET28a-NS1为模板,PCR扩增NS1基因抗原性较好的区段NS1′,用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pET-32a(+),构建pET32a-NS1′,经PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定后,转化大肠杆菌Rosetta,用IPTG诱导表达,纯化NS1′并免疫家兔制备多克隆血清,对其进行SDS-PAGE、Western blotting...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
李丹丹 许馨露 翟建云 孙建飞 曹友志 高岩 张汝民
为探讨毛竹Phyllostachys edulis笋竹快速生长期可溶性糖质量分数变化与PeTPS1和Pe SnRK1基因的表达情况,明确它们与毛竹快速生长的关系,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)分析技术对笋竹快速生长期不同时间(黄昏后0,4和8 h)和不同部位(笋竹上部、中部、下部和竹篼)PeTPS1和Pe SnRK1基因表达量进行分析,并采用试剂盒法测定糖质量分数。结果表明:笋竹茎秆上部可溶性糖质量分数变化不显著;黄昏后8 h中部葡萄糖、果糖、蔗糖质量分数与黄昏时相比分别下降了2.2倍
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王瑞琴 杨雄 陈红英
【目的】合成、克隆HIV单克降抗体VRC01的单链抗体基因,在大肠杆菌中诱导表达并进行纯化。【方法】根据GenBank上公布的VRC01抗体可变区的氨基酸序列合成引物,运用基因从头合成和重叠延伸PCR方法,克隆抗体VRC01的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因;用15肽Linker(Gly4Ser)3将VH和VL基因相连,得到单链抗体基因scFv-VH-Linker-VL和scFv-VL-Linker-VH,并分别将两者克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组质粒后转入大肠杆菌BL21(DE3+)中诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;将重组蛋白进行...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐重新 张存政 张霄 刘媛 黄鹰 刘贤金
利用含有重组噬菌粒的噬菌体直接侵染大肠杆菌(Escherichia coli)HB2151,原核分泌表达了抗苏云金芽孢杆菌(Ba-cillus thuringiensis,Bt)Cry1B毒素蛋白的单链抗体(single chain-variable fragment,scFv),经纯化、鉴定抗原结合活性后,建立了Cry1B毒素蛋白的ELISA检测方法。方法以展示scFv抗体的重组噬菌体感染E.coli HB2151,经PCR和基因测序检测克隆scFv基因片段的完整性,用SDS-PAGE方法检测scFv在E.coli HB2151宿主菌中的表达水平,用ELISA测定法检测scFv的抗原结合活性...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
潘冬 张玉磊 同拉嘎 李明月 李丹 韩云飞 王海微 张忠臣 金正勋
【目的】分析不同"库"容量对水稻灌浆后期叶、茎、鞘中可溶性总糖含量及剑叶蔗糖代谢相关酶活性、Rubisco和谷氨酰胺合成酶同工型基因转录表达量的影响。【方法】选用寒地粳稻穗重型超级稻品种‘松粳9号’和穗数型高产品种‘龙稻11号’作为供试材料进行盆栽试验。在灌浆期分别进行不同剪穗处理,分别是无穗、半穗和全穗处理。【结果】表明,在同等的"源"条件下减小"库"容量有利于提高籽粒的粒重和成熟度,随着"库"容量的增加所需的灌浆时间就越长;没有"库"容时光合产物主要贮藏在叶、茎、鞘等营养器官中,但有"库"容时主要转移
[期刊] 华北农学报
[作者]
高闪电 常惠芸 独军政 丛国正 邵军军 林彤
以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1 C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C。将VP1全长编码区替换VP1C,获得重组原核表达载体pET-30a-PelB-VP1。将两种重组质粒分别转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,实现了VP1全长及其C端的可溶性表达,以金属离子螯合层析法分别对表达的VP1及其C端融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白分别在32 ku和20 ku...
关键词：
口蹄疫病毒 原核表达 可溶性 信号肽
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
范丙友 胡诗宇 陆海 蒋湘宁
为了进一步研究毛白杨4CL1的酶学特性,构建了毛白杨4CL1原核表达载体pQE31--4CL1.经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了毛白杨4CL1蛋白,SDS--PAGE电泳分析表明该新蛋白的分子量为60 kD,与预测值一致.对毛白杨4CL1蛋白在大肠杆菌中的表达体系进行了优化,确定IPTG的最佳浓度为0.4 mmol/L,诱导时的菌液密度OD600为0.3~0.5,最佳表达时间为2 h.37℃下表达的4CL1融合蛋白以包涵体的形式存在,没有生物学活性.当表达温度从37℃降低为28℃时,可溶性的有生物学活性的毛白杨4CL1蛋白诱导表达获得成功,表达量达11%.以耦联有Ni2+--NTA的琼脂糖为亲...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
瞿春梅 梁旭方 张进 何珊 沈丹
利用简并引物从日本沼虾肝脏克隆mu型sGST基因cDNA核心片段获得其sGST氨基酸序列。序列分析表明日本沼虾肝脏mu型sGST基因cDNA核心序列长299bp,编码99个氨基酸。日本沼虾sGST与南美白对虾(Litopenaeus vannamei)、小鼠(Mus musculus)、大鼠(Rattus norvegicus)、肩突硬蜱(Ixodes scapu-laris)、扇头蜱(Rhipicephalus appendiculatus)、热带爪蟾(Xenopus tropicalis)、微小牛蜱(Rhipicephalus micro-plus)和太平洋牡蛎(Crassostrea g...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
何立中 郭世荣 陆晓民 王丽萍 阳燕娟
采用营养液水培,以低氧耐性较弱的黄瓜品种‘津春2号’为试材,研究了外源钙和钙调素(Ca.M)抑制剂三氟拉嗪(TFP)对根际低氧胁迫下黄瓜幼苗根系和叶片可溶性蛋白表达的影响。结果表明:低氧下植株的生物量显著下降,施加外源Ca2+后生物量显著增加,而施加TFP后则在低氧胁迫的基础上进一步降低了植株的生物量。植株的根系可溶性蛋白含量在低氧下降低而在添加了Ca2+后升高;叶片的可溶性蛋白含量在低氧下升高,添加Ca2+后可溶性蛋白在处理6 d和9 d时高于低氧和对照处理;施加TFP后根系和叶片的可溶性蛋白均下降。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,不同处理在根系中至少有9种蛋白表达量...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
阳燕娟 郭世荣 李晶 杜长霞 陈丽芳 王丽萍
采用营养液栽培,以葫芦为砧木,以小型西瓜为接穗,利用SDS-PAGE凝胶电泳,研究了嫁接对50 mmol.L-1 NaCl胁迫下西瓜幼苗生长和可溶性蛋白表达的影响。结果表明:嫁接可使盐胁迫下西瓜幼苗的株高、茎粗、根长、干重、鲜重、叶面积和根系表面积显著增加,叶片可溶性蛋白含量明显提高,大量可溶性蛋白表达增强,并出现247.7×103和107.9×103两种新蛋白;而盐胁迫下自根苗各项生长指标和叶片可溶性蛋白均显著降低,可溶性蛋白表达明显减弱。随着胁迫时间的延长,至少有12种蛋白表达量发生明显变化,其相对分子质量(×103)分别为:244.7、240.0、74.2、61.2、58.1、45.0、...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王艳芳 周雅坪 张新竹 李松建 麻昌姣 黄海碧 郝永清
为研究分子伴侣是否可以促进牛支原体膜蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达及表达的蛋白是否具有活性,应用原核表达和Western blot方法进行检测,结果表明:1)牛支原体一个膜蛋白M1的截短片段在大肠杆菌表达系统中以包涵体形式表达,改变诱导时间、温度以及诱导剂浓度均未改变其表达形式;2)将4种分子伴侣pGKJE8、pGro7、pG-Tf2和pTf16分别与含有目的蛋白的重组质粒在表达工程菌(BL21)中共表达,当加入终浓度为1.0mmol/L IPTG以及0.5mg/mL L-阿拉伯糖或5.0ng/mL四环素的诱导剂,37℃诱导5h,发现分子伴侣pGTf2和pG-KJE8能显著提高M1截短片段的可溶性表达,其他2种分子伴侣未改变M1的表达形式;3)可溶性表达的M1截短片段与牛支原体阳性血清可以发生特异性反应。因此,研究发现2种分子伴侣可以使牛支原体膜蛋白在大肠杆菌表达系统中以可溶性形式表达,但未改变其生物活性,该研究结果可为建立牛支原体有效的血清学诊断方法及亚单位疫苗的研制奠定基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
曹宛虹 赵艳茹
对京欣一号西瓜的亲本及杂种一代的几种同工酶系统及可溶性蛋白进行了分析。结果表明，在种子萌发过程中，过氧化物酶、酯酶和可溶性蛋白随发育阶段或营养状况的改变而改变；而在相同萌发时期，过氧化物酶同工酶、酯酶同工酶、过氧化氢酶同工酶和淀粉酶同工酶在亲本及杂种间未见差异，杂种的可溶性蛋白图谱表现与母本相同，而与父本有差异。此外，对６个品种的西瓜、非洲西瓜和瓠瓜的分析结果表明，非洲西瓜和瓠瓜的过氧化物酶酶谱、酯酶酶谱与６个品种的普通西瓜明显不同，而在６个西瓜品种之间，部分品种显示出过氧化物酶同工酶的差异，酯酶同工酶则未见显著差异。过氧化物酶同工酶可用于部分西瓜品种的鉴定。
关键词：
同工酶,可溶性蛋白,西瓜
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