为探明Ghrelin及其受体Ghsr-1a在早期胚胎发育中的作用,以小鼠体内受精、体外受精和孤雌激活胚胎为研究对象,在其体外发育过程中添加不同浓度Ghrelin,观察胚胎发育效率;通过免疫荧光染色和荧光定量PCR,观察不同时期胚胎中Ghsr-1a的变化。结果表明,体内受精胚体外发育中添加0.1 ng/m L Ghrelin显著降低了囊胚率(P<0.05)。在体内受精胎中,Ghsr-1a的mRNA表达水平在4细胞显著高于其他时期(P<0.05);体外受精胚中,Ghsr-1a的mRNA水平在8细胞前无明显差异,桑...

将体外分离培养经超排处理的新西兰大白兔输卵管上皮及子宫内膜细胞接种于4孔板培养。处理1以CZB为培养液;处理2以CZB加输卵管上皮细胞为培养体系;处理3以CZB加子宫内膜细胞为培养体系;处理4以CZB为培养液,胚胎培养的前24h在输卵管上皮细胞共培养体系中,之后则转入子宫内膜细胞共培养体系中培养(处理4为序贯共培养体系)。将2-细胞期小鼠胚胎随机分配给4个处理,统计各处理组小鼠胚胎的各期发育率及发育质量。结果表明,序贯共培养体系胚胎的囊胚体外发育率显著高于其他共培养组(P<0.05);囊胚孵化率及孵化囊胚的贴附率显著高于其他共培养组(P<0.05);囊胚细胞总数各共培养组显著高于单独培养液组(...

为探讨３种感染方法对不同发育阶段胚胎中ＥＧＦＰ基因表达影响，利用透明带下注射法、胞质内注射法及透明带切口与慢病毒共培养法感染１－细胞期小鼠胚胎，分别提取以上３种方法感染慢病毒的不同发育阶段胚胎的ＥＧＰＦ基因，并以其为模板，扩增出６３０ｂＰ的ＥＧＰＦ基因片段。结果表明：慢病毒转染后在不同发育阶段的胚胎中，均扩增出ＥＧＦＰ目的片段（６３０ｂＰ）。当透明带下注射病毒时，９０Ｐ Ｌ注射组（Ｃ组）和６０Ｐ Ｌ注射组（ｂ组）的ＥＧＦＰ基因阳性率显著优于３０Ｐ Ｌ注射组（Ａ组）（Ｐ＜０．０５）。当胞质注射病毒时，Ｃ组显著优于其他组（Ｐ０．０５）。透明带．．．

研究了不同生殖时期猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响,以此建立了适于早期小鼠转基因胚胎体外培养的猪输卵管上皮细胞共培养体系,并用PCR法对体外培养发育到不同阶段的小鼠转基因胚胎进行了外源基因整合检测。结果表明,在受孕初期的猪输卵管上皮细胞(无论是原代还是传代细胞)上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率显著高于发情间期的猪输卵管上皮细胞(P<0.01);在相同生殖时期猪输卵管原代和传代上皮细胞上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率差异不显著;在转基因胚胎不同发育阶段,PCR检测呈阳性的胚胎比率分别为:2-细胞期为96%,4-细胞期为63%,8-细胞期为43%,囊胚期为19%。由此可见,受孕...

为研究胰岛素样生长因子IGF-I及其受体IGF-IR在鸡胚胎腿部肌肉发育过程中的作用,选取藏鸡和矮小蛋鸡受精蛋孵化后,采集鸡胚胎孵化第9天、第13天和第20天时腿部肌肉组织,并利用荧光定量PCR技术检测IGF-I和IGF-IR mRNA的表达水平,同时检测IGF-I基因编码区的单核苷酸多态性并利用RFLP(限制性片段长度多态性)方法对筛选到的单核苷酸多态性进行群体水平分型。结果表明:藏鸡和矮小蛋鸡胚胎腿部肌肉组织在孵化第9天和第13天时的IGF-I和IGF-IR的mRNA表达量均极显著高于第20天,且藏鸡

分别利用孤雌激活技术、体外受精技术及体细胞核移植技术生产不同类型的体外胚胎,比较不同类型胚胎的体外发育率和囊胚细胞总数间的差异,研究季节、卵巢保存条件和培养液对孤雌激活胚(PAE)和体细胞核移植胚(SCNTE)发育能力的影响。结果表明:PAE、SCNTE和体外受精胚(IVFE)的卵裂率没有显著差异;PAE的囊胚率(23.4%)显著高于SCNTE(18.2%);SCNTE的囊胚细胞数(120)显著多于PAE的囊胚细胞数(96),而与IVFE的囊胚细胞数(107)没有显著差异。繁殖季节卵巢PAE和SCNTE的发育率显著高于非繁殖季节。卵巢在14~18℃保存15~17 h,没有影响PAE的体外发育,...

胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor Ⅰ,IGF-Ⅰ)是脊椎动物生长发育的重要调控因子,其生物学功能主要通过与其特异的膜受体(IGF-Ⅰ receptor,IGF-IR)结合而调节。因此,IGF-Ⅰ及其受体表达特征的分析对于阐述IGF系统调控的发育过程具有重要的意义。本研究采用荧光实时PCR方法,以不同发育时期的牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎为材料,分析了胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)及其两种受体基因在鱼类胚胎发育过程中的表达图式。结果显示,牙鲆IGF-Ⅰ、IGF-IR-1和IGF-IR-2基因均有母源转录本,且各基因的表达在...

【目的】探索不同交配时间对小鼠胚胎收集和胚胎发育的影响,为小鼠的超排研究提供参考。【方法】对小鼠进行超数排卵,分别于注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后9,10,11,12,13,14和15h,在输卵管膨大部收集卵母细胞,研究排卵情况;将超排雌鼠与雄鼠合笼,分别于合笼后2,4,6,8,10和12h观察小鼠是否见阴道栓,研究小鼠交配时间;为了控制小鼠的交配时间,将超排雌鼠分别于注射hCG后0,2,4,6,8,10,12,14,16和18h与雄鼠合笼,每个时间点合笼后2h观察交配情况,于注射hCG后98h从子宫角收集囊胚,统计胚胎收集率,观察胚胎发育情况。【结果】小鼠排卵主要集中于注射hCG后12～...

为获得更多具有后续发育能力的小鼠M期卵裂球,以测定细胞间期和M期的重编程因子表达情况,用不同浓度的诺考达唑(Nocodazole)对小鼠1-cell胚胎及2-cell胚胎进行了不同时间的处理,筛选出了控制卵裂球停留在M期的最佳处理浓度及处理时间。结果表明:0.10,0.15和0.20μg·m L-1的诺考达唑可有效且可逆地使小鼠1-cell胚胎或2-cell胚胎阻抑在M期;在诺考达唑去除后的1~2h,胚胎细胞重新恢复有丝分裂,完成卵裂;0.10μg·m L-1的诺考达唑处理12h可很好地将1-cell胚胎阻抑于M期,且对胚胎的后续发育影响不大;0.20μg·m L-1的诺考达唑处理18h对2-...

研究了牛体外受精后早期胚胎体外发育时,向其基础培养液中加入牛磺酸对胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影响,以探寻牛磺酸克服牛胚胎"体外发育阻滞"现象的作用。试验结果表明:以TCM-199+10%FBS为基础培养液(对照组),再加入7,14mM的牛磺酸(试验组),试验组与对照组的桑椹胚率分别为48.1%、47.4%和43.2%;囊胚率分别为26.4%、22.3%和21.0%;孵化囊胚率分别为21.8%、18.7%和0%。IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期,在基础培养液中分别添加7mM的牛磺酸时,桑椹胚率分别为48.7%、57.1%和52.0%,囊胚率分别为25.1%、30.7%和27.9...

　在TCM-199中添加一些确定的辅助成分,探讨在无血清培养基中添加不同浓度HA对牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响。结果表明,在卵母细胞成熟培养液(TCM-199-m)中添加4.0mg/mL的HA时,卵母细胞的成熟率和卵裂率与对照组(BSA)无显著差异(P>0.05),分别为85.14%,83.57%和89.47%,85.24%,但显著高于其他各浓度组(P0.05),分别为27.64%和26.51%,但显著高于TCM-199-...

从日本沼虾中克隆了cDNAs编码的蜕皮激素受体基因(MnEcR)核苷酸序列。将编码区中的配体结合域(LBD)氨基酸序列与甲壳纲和昆虫纲中已知EcR s的该区域进行比对,结果显示了高度的相似性,构建的系统进化树表明MnEcR与甲壳类物种的同源性要高于昆虫类物种。采用RT-PCR技术对MnEcR转录本在组织中的表达进行检测,结果显示在所有检测的组织中均有表达,并且在眼、头胸甲下的表膜和卵巢中表达尤为突出。接着采用实时RT-PCR技术对MnEcR转录本在胚胎发育各期的表达情况进行分析,结果显示从卵裂期到原肠期的表达水平逐渐上升,从前无节幼体期开始至后无节幼体期表达水平呈显著的增加,并在后无节幼体期时...

【目的】探究亚硒酸钠（sodium selenite,SS）对猪卵母细胞体外成熟及其胚胎发育潜能的影响并对其机制进行初步分析，为猪卵母细胞体外成熟体系的完善提供理论参考。【方法】将猪卵丘卵母细胞复合物（cumulus oocyte complexes,COCs）随机放在不同浓度亚硒酸钠(0、20、40、60、80 nmol·L^-1)的成熟培养液中成熟培养44 h后，分别观察卵丘细胞扩展及卵母细胞第一极体（first polar body,PB1）排出情况，收集卵丘细胞并提取其RNA，同时对卵母细胞进行孤雌激活（parthenogenetic activation,PA）处理并进一步对孤雌胚胎进行体外培养，分别于48、168 h统计卵裂率及囊胚率。利用实时荧光定量PCR及观察法对卵丘细胞扩展指数（CEI）、卵丘扩展相关基因（Has2、Ptgs2）表达、卵母细胞第一极体（PB1）排出率和孤雌胚胎的卵裂率及囊胚率进行检测，以探究不同浓度亚硒酸钠对卵母细胞成熟、早期胚胎发育及卵丘细胞扩展的影响，并据此确定亚硒酸钠的最适添加浓度；通过光吸收法及RT-q PCR检测COCs的总抗氧化能力、卵母细胞中谷胱甘肽（GSH）含量和丙二醛（MDA）水平及抗氧化基因（CAT、PRDX2）表达，探讨体外成熟液中添加亚硒酸钠对卵母细胞抗氧化能力的影响；结合免疫荧光技术对囊胚内细胞总数和囊胚多能性基因（Nanog,Sox2）表达进行检测，探究亚硒酸钠对孤雌胚胎发育潜能的影响。【结果】QRT-PCR结果显示不同浓度亚硒酸钠添加均可显著促进PTGS2基因的表达（P<0.05），且40 nmol·L^-1浓度下HAS2基因的表达、CEI、卵母细胞PB1、早期胚胎的囊胚率都得到显著促进（P<0.05）;40、60、80、nmol·L^-1浓度下亚硒酸钠添加都可促进卵母细胞的卵裂，但40 nmol·L^-1浓度下卵裂促进效果显著（P<0.05），据此确定猪卵母细胞体外成熟液中亚硒酸钠添加浓度为40 nmol·L^-1；由抗氧化能力检测结果显示亚硒酸钠可显著提高COCs的总抗氧化能力、卵母细胞的GSH水平、抗氧化基因CAT、PRDX2的表达、显著降低MDA含量（P<0.05）；免疫荧光及PCR结果显示，亚硒酸钠组中囊胚的内细胞团数量升高、Nanog表达升高（P<0.05）。【结论】猪卵母细胞体外成熟液中添加适宜浓度的亚硒酸钠可促进卵丘细胞扩展，提高卵母细胞的成熟率，改善卵母细胞成熟后的发育潜能。亚硒酸钠对卵母细胞体外成熟的这一有利影响可能与其抗氧化作用有关。

为探明小鼠腔前卵泡体外发育及体外排卵的特征和规律性 ,为利用卵巢资源奠定基础 ,采用机械方法分离未成熟小鼠腔前卵泡进行体外培养 .以 α- MEM加亚硒酸钠、维生素 C,L-谷氨酰胺、丙酮酸钠为基础培养液 ,分组添加 10 %的 2种不同来源的血清和 1μg/ m L FSH.在多卵泡培养体系中 ,培养 9～ 10 d,每天观察其体外发育情况 ,测定卵泡和卵母细胞大小 .培养结束时 ,用 h CG进行体外诱导排卵 .结果表明 :体外培养过程中 ,腔前卵泡贴附培养皿底 ,相互聚集粘附形成团状结构 ,在细胞铺层微滴培养中 ,卵泡呈单个生长 ,并发育形成卵泡腔或腔样结构 ;经9d体外培养 ,小鼠腔前...

为了探讨不同发育时期大鼠乳腺中雌激素受体α(Estrogen receptor,ERα)的表达情况,采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的ERα进行了半定量研究。结果表明,妊娠和泌乳期大鼠乳腺组织中的ERα表达水平均低于处女期,且差异显著(P0.05)。表明ERα可能参与了乳腺细胞的发育和凋亡。