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[期刊] 华北农学报
[作者]
赵曾强 韩泽刚 李会会 李潇玲 张析 张薇
为了进一步验证ＧｈＷＲＫＹ４４（登录号：ＫＪ８０１８０７）基因在烟草异位表达后的功能，构建了Ｃａ ＭＶ３５Ｓ启动子调控、ＮｏＳ为终止子的棉花抗枯萎病相关基因（ＧｈＷＲＫＹ４４）的过表达载体；电击法将其导入农杆菌ＧＶ３１０１，菌液ＰＣＲ筛选鉴定阳性菌株，采用农杆菌介导法转化烟草；Ｔ０转化植株经卡那霉素筛选、ＰＣＲ检测后，随机从转基因Ｔ０中选取５株进行ＲＴ－ＰＣＲ检测，均为阳性株，说明ＧｈＷＲＫＹ４４基因不仅整合到烟草基因组中而且还能正常转录。对过表达ＧｈＷＲＫＹ４４基因的转基因烟草Ｔ１株系进行实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）分析。结果表明，在正常生长情况下，ＰＲ５和ＮＰＲ１的表达量在转ＧｈＷ．．．
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
庞宏东 向林 赵凯歌 李响 杨楠 陈龙清
为研究蜡梅SAMT基因的调控功能,利用农杆菌介导法将其转入烟草中。经PCR方法对转基因烟草进行检测,结果显示:16株转化植株中有15株扩增出了目的条带,进一步的RT-PCR检测结果表明,阳性植株均发生了正确转录。对转基因烟草植株和未转基因对照植株进行植株大小、叶片形态、花色、花瓣大小以及花期进行观察,均未发现有明显差异。采用顶空固相微萃取以及气相色谱--质谱技术(HS-SPME-GC-MS)对转基因烟草鲜花进行花香成分分析,结果表明,转CpSAMT基因烟草中有较高含量的苯甲醇、己烯醇、芳樟醇、石竹烯和苯甲醛等成分,但未能检测到水杨酸甲酯和苯甲酸甲酯成分。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈小云 余心怡 张仕杰 屠煦童 章镇 渠慎春
[目的]研究‘南通小方柿’(Diospyros kaki Linn.‘Nantongxiaofangshi’)乙醇脱氢酶基因DkADH1的功能,阐明其在柿果脱涩过程中的作用。[方法]构建了DkADH1基因植物双元表达载体,通过农杆菌介导法将该基因转入番茄中。以转基因和非转基因番茄株系的不同组织为材料,钨酸钠-钼酸钠比色法测定可溶性单宁含量,并用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测原花青素(PA)合成途径相关基因的表达情况。[结果]经PCR和RT-PCR检测,获得了3个转DkADH1基因番茄株系。过量表达DkADH1基因的转基因番茄植株的叶片、花、果实中可溶性单宁含量均显著低于非转基因番茄植...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
包梅荣 谭晓风 乌云塔娜 张琳
为研究油茶种子成熟调控蛋白基因的功能,以pCAMBIA1304质粒为载体,根据油茶种子成熟调控蛋白基因的cDNA序列设计了小干扰RNA(Si RNA)序列,构建了油茶种子成熟调控蛋白基因小干扰RNA植物表达载体pCAMBIA1304-si RNA,并借助农杆菌介导叶盘法将pCAMBIA1304-si RNA转化到野生型烟草中,获得了稳定表达的转基因烟草苗。为下一步的油茶种子成熟调控蛋白基因的功能鉴定奠定了基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
梁燕 王鸣 陈杭 陈大明
采用农杆菌介导的叶盘法 ,用胡萝卜茄红素 -β-环化酶反义 RNA基因对烟草 SRI野生类型种及Xanthi品种进行了遗传转化。 GU S检测结果表明 ,胡萝卜茄红素 -β-环化酶反义 RNA基因对两个不同烟草材料的遗传转化率均为 4 1 .7% ;Xanthi Southern杂交的阳性率为 6 7% ;转基因烟草当代叶片组织中茄红素和胡萝卜素含量与对照植株不同
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
翟晓霏 张文 赵旭勉 王琼 朱元娣
植物DELLA蛋白是赤霉素信号传导途径的反向调节因子,DELLA蛋白突变体导致植株矮化。苹果MdRGL1a是编码苹果DELLA蛋白家族的基因之一,为了研究该基因的生理功能,用从‘威赛克’苹果中克隆的MdRGL1a基因,分别构建GFP瞬时表达载体和植物表达载体。通过基因枪法轰击洋葱表皮细胞,激光共聚焦显微镜下观察MdRGL1a基因的亚细胞定位。利用农杆菌EHA105介导的叶盘法转化烟草(Nicotianna tabacumL.),对转基因烟草进行PCR扩增和GUS染色法检测,观察转基因烟草的形态学性状,利用ELISA方法测定烟草的内源激素水平。结果表明,MdRGL1a-GFP融合蛋白定位在细胞核...
[期刊] 华北农学报
[作者]
白璐 辛翠花 刘乐乐 王俊杰 简磊 邵玉涛 裴海霞 郭江波
为了研究本氏烟草NbEHD1基因的生物学功能，采用生物信息学方法对其基因结构、蛋白保守结构域、磷酸化位点、亚细胞定位及进化关系等多个方面进行预测。结果表明，本氏烟草NbEHD1编码序列全长1 638 bp,其基因组序列包含16个外显子和15个内含子。NbEHD1蛋白大概率定位于细胞质中，无信号肽，无跨膜区，蛋白序列有42个磷酸化位点。NbEHD1属于P-loop＿NTPase超家族，具有EHD家族特有保守结构域。系统进化关系结果表明，本氏烟草NbEHD1与马铃薯、番茄的EHD序列亲缘关系较近。经与SGN数据库中本氏烟草测序数据比对，获得NbEHD1预测的全序列并设计基因特异性引物，扩增得到其序列全长。在获得NbEHD1 CRISPR/Cas9基因编辑载体后，采用农杆菌介导的方法，将此载体成功转化到本氏烟草叶片，经鉴定成功获得T_0阳性植株16株，为进一步确定NbEHD1基因的生物学功能提供了研究材料。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
孙立洋 李静 袁虎威 姚景涵 李伟 陈晓阳
为探讨Bt-BADH-GA20ox-rolB多基因转化烟草中外源基因的表达情况及对转化植株的影响,对转多基因烟草及对照植株进行了生理生化试验,包括内源激素含量测定、耐盐性试验、Bt毒蛋白测定、移栽后植株生长的观测。结果表明:转基因植株生根能力强,根、茎、叶各部位内源激素(IAA、GA3)与对照差异明显;在低浓度NaCl下,转基因和对照植株生长差异不明显,当NaCl浓度达到300mmol/L时,对照生长受到抑制,转基因植株生长正常;在转基因植株的茎、叶中均检测到高浓度的Bt毒蛋白,以叶片饲喂斜纹夜蛾幼虫明显抑制其发育。移栽后的转基因植株高生长更加明显,苗高和地茎分别为对照的1.61和1.37倍。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
许石剑 肖炳光 高玉龙 李永平
以含抗烟草花叶病毒(TMV)基因的烟草Ti245为抗病亲本,以K326为感病亲本,经杂交得到F1,F1自交得到F2群体,分析了Ti245抗TMV的遗传规律,并对抗性基因进行SSR标记定位。结果表明:Ti245对TMV的抗性由1对隐性基因控制;基因定位发现,Ti245抗TMV的位点位于LG9连锁群,标记*Tp217200距目的基因最近,遗传距离为3.3cM。
关键词：
烟草 烟草花叶病毒:遗传分析 基因定位
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
周文丽 唐永红 陈耀锋 成巨龙 王会强 杨梅
【目的】利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,GV3101)介导法获得转芪合酶基因烟草,改良烟草对根黑腐病的抗性。【方法】以普通烟草品种"97204"叶片为受体,采用根癌农杆菌介导法,将芪合酶基因导入烟草基因组并进行分子检测,利用灌根法对4株转芪合酶基因烟草植株接种烟草根黑腐病菌,观察烟草地上部分和根部的变化,并测定苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)活性。【结果】通过根癌农杆菌介导、抗性选择和分子检测,获得32株转芪合酶基因烟草。从中选取长势一致的4株转基因烟草用于抗病性鉴定,结果表明,2株在灌根接种后生长正常,另外2株在接种第7天时出现轻微黄化,3株...
[期刊] 林业科学
[作者]
李春秀 齐力旺 史胜青 汪阳东 王建华 张守攻
克隆毛白杨纤维素合酶基因(PtoCesA1),全长为3215bp,与欧洲颤杨的PtrCesA1基因的同源性为97%,具有开放的阅读框,编码区在52~2988碱基之间,为2937bp。构建PtoCesA1基因的全长正义植物表达载体为pBIPA1,经酶切和PCR鉴定确认载体构建正确。通过农杆菌介导的方法将pBIPA1表达载体转入烟草中,转基因植株的纤维细胞壁厚度和木质部厚度都有不同程度的下降,形态表征为植株明显变矮,叶片变小。
关键词：
毛白杨 纤维素合酶基因 遗传转化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王春明 翟虎渠
以红花烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔｏｂａｃｃｕｍ）杂交种（亲本为Ｋ３２６×Ｇ１４０）后代Ｆ５和Ｆ６系谱为材料，分别于１９９３年和１９９４年进行田间试验。对Ｆ５世代６８个家系的第７周株高、开花时株高资料和Ｆ６世代１２８个家系的最后株高资料进行三级、四级巢式结构的方差分析，得到足够的参数估计方程，在二级统计量水平上迭代估计各性状的主要遗传参数并计算狭义遗传力。３个性状基本符合加性显性模型，第７周株高、开花时株高、最后株高三个性状单株狭义遗传力分别为０．２７８，０．４１５和０．５５３
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张铭真 李晓辉 王袁 邢雪霞 徐世晓 杨铁钊
从２００对ＳＳＲ引物中筛选出６９对条带清晰、多态性强的引物，对８０份烟草种质资源材料（来自多个国家和地区）的全基因组ＤＮＡ进行扩增，采用荧光ＡＢＩ–３５００ ｘｌ遗传分析仪进行多态性检测，结果 ６９对引物在烟草种质材料中共检测出５０３个多态性条带，平均每对引物可检测到的等位变异数为７．９１个，观测杂合度（Ｈｏ）平均值为０．２７６ ４，预期杂合度（Ｈｅ）平均值为０．５７４ ７。ＳＨＡＮＮｏＮ’Ｓ信息指数Ｉ为１．０８２ ６；ＮｅＩ’Ｓ多样性指数Ｈ为０．５７１ １、遗传分化系数ＦＳｔ为０．１４１ ６，基因流Ｎｍ为１．５１５ ３，遗传相似系数为０．５５～０．９０。说明８０份烟草种质的遗传多样性相对丰富．．．
关键词：
烟草 种质资源 简单序列重复 遗传多样性
[期刊] 林业科学研究
[作者]
吴晓娟 鲁俊倩 常英英 钟姗辰 苏晓华 张冰玉
[目的]研究拟南芥甲基化转移酶基因AtMET 1在银腺杨84K(Populus alba×P. glandulosa ‘84K’)中的诱导表达特性,为建立杨树甲基化诱导变异体系、进而实现杨树品种改良等奠定基础。[方法]以白杨派优良品种84K杨的无菌苗叶片为受体材料,采用农杆菌介导法将化学诱导启动子与AtMET1基因导入84K杨基因组中;经潮霉素筛选获得抗性植株,通过常规PCR检测、DNA测序等方法对抗性植株进行鉴定。通过化学诱导剂17-β-雌二醇对随机挑选的1个转基因株系离体叶片进行诱导处理,处理时间为0、3、6、12、24、48、96、144 h,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外源基因AtMET1表达量变化。[结果]本研究共获得了潮霉素抗性芽648个,经生根筛选获得18株抗性植株,经分子检测证实全部为转基因植株,分别标号为AM-1～18#。qRT-PCR结果显示:化学诱导剂17-β-雌二醇处理3 h时,目的基因AtMET1的表达量即达到最大值,随后在处理6 h时表达量下降,处理12 h时有所回升,处理24 h后表达量降低至不足12 h时的一半。[结论]化学诱导剂17-β-雌二醇能迅速有效地调控转基因杨树中AtMET1基因的表达,为进一步研究MET1基因在杨树基因组甲基化调控方面的作用机制奠定基础,也为今后杨树化学诱导表达研究及品种改良提供新思路、新方法。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
安娜 陈耀锋 崔志刚 白延红
【目的】研究根癌农杆菌介导的芪合酶基因转化烟草遗传体系的优化条件。【方法】以"中烟99"叶片为受体,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,GV3101)介导法,将芪合酶基因导入烟草基因组,并对其遗传体系进行了优化,对筛选获得的转基因烟草植株进行检测。【结果】根癌农杆菌介导的芪合酶基因遗传转化的最佳条件为:将预培养2 d的烟草外植体,用稀释10倍的GV3101菌株菌液(OD600=0.6)浸染8 min后,共培养3 d,然后转入含卡那霉素(Km)50 mg/L和羧苄青霉素(Cb)500 mg/L的筛选分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2~3 cm后,转入含Km 50...
关键词：
芪合酶基因 烟草 根癌农杆菌 遗传转化
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