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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
乌亚罕 史振丹 乌丽雅苏 爱伦高娃 扎木嘎 乌云斯钦 恩和玛日特 哈斯高娃 娜仁花
【目的】研究谷胱甘肽过氧化酶5(GPx5)基因在绵羊附睾及附睾不同发育时期的表达特性。【方法】采用荧光定量PCR技术、免疫印迹技术及免疫荧光等方法,分别检测GPx5基因在绵羊附睾不同发育时期、不同部位上mRNA和蛋白的表达及分布情况。【结果】荧光定量PCR结果表明,青年羊附睾GPx5基因在头部的mRNA表达量显著高于体部和尾部(P<0.05);青年羊附睾头部GPx5基因mRNA表达量显著高于羔羊和老年羊附睾头部(P<0.05)。免疫印迹结果表明,羔羊附睾无GPx5蛋白表达;青年羊附睾各部位均有表达,而老年
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
乌亚罕 乌丽雅苏 史振丹 艾伦高娃 扎木嘎 乌云斯钦 哈斯高娃 恩和玛日特 娜仁花
为研究外源雄激素丙酸睾酮对绵羊附睾特异表达基因谷胱甘肽过氧化酶５（ＧＰｘ５）的影响，应用酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测血清和附睾头部内睾酮（Ｔ）、二氢睾酮（ＤＨＴ）的含量，及附睾头部雄激素受体（ＡＲ）蛋白表达量；应用实时荧光定量ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测了附睾头部ＧＰｘ５－ｍＲＮＡ和ＡＲ－ｍＲＮＡ相对表达量；并结合免疫印迹（ＷＢ）法检测了附睾头部ＧＰｘ５蛋白相对表达量。结果表明：丙酸睾酮处理（ＴＰＴ）组与对照组相比绵羊血清ＤＨＴ含量，附睾头部Ｔ含量、ＤＨＴ含量均显著提高，分别是对照组的０．５、６．０、０．８倍；ＧＰｘ５－ｍＲＮＡ和ＡＲｍＲＮＡ相对表达量显著提高，分别是对照组的０．７５和０．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
栗瑞兰 张通 范晓梅 欧阳效晴 张春强 曹俊伟 张家新
【目的】研究谷胱甘肽过氧化物酶－５（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｔｙｐｅ－５，ｇｐｘ５）在成年绵羊附睾的表达特征以及ｇｐｘ５蛋白在附睾中的定位，为绵羊精子在附睾中抗氧化机制的研究提供理论依据。【方法】采取年龄相近的成年蒙古绵羊的附睾、睾丸和输精管。每一只公羊的附睾分别按照附睾头、附睾体和附睾尾进行分割。样品保存于－８０℃冰箱，采用实时荧光定量ｐＣｒ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ的方法，对成年绵羊的附睾、睾丸和输精管的ｇｐｘ５表达量进行分析。将新鲜的组织样品各部分切取适合大小浸泡于４％多聚甲醛溶液中２４ｈ，按照石蜡切片的方法制作组织切片。用ｇｐｘ５特异性抗体孵育组织切片，利．．．
关键词：
绵羊 附睾 GPX5 基因表达 蛋白定位
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
范晓梅 栗瑞兰 张通 边小娜 张家新
为研究GPx5在内蒙古绒山羊附睾中的表达模式,对初情期、体成熟期、老龄期3个生殖生理阶段绒山羊附睾及睾丸中的GPx5从mRNA和蛋白水平进行了检测。结果显示各生殖生理阶段绒山羊睾丸中均未见GPx5表达,附睾中均有GPx5表达。各生殖生理阶段附睾表达区域及表达量存在差异:初情期,GPx5 mRNA和蛋白主要表达于附睾头部;体成熟期,附睾各区域GPx5 mRNA和蛋白的表达量极显著高于其他阶段,附睾起始部和附睾头部为主要表达区;老龄期,GPx5 mRNA和蛋白主要表达于附睾头部,但较体成熟期明显减少。免疫组化
关键词：
绒山羊 附睾 精子 GPx5
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
栾兆进 赵勇超 许娇霞 刘永斌 张家新
为探究雄激素受体(Androgen receptor, AR)及共调节因子对绵羊附睾上皮细胞(Epididymal epithelial cells, EECs)谷胱甘肽过氧化物酶5(Glutathione peroxidase 5,GPX5)的调节机制，本研究采用CCK-8检测睾酮对EECs增殖的影响；利用qRT-PCR、免疫荧光法和Western Blot法分别检测AR、GPX5、甾体激素受体共激活子1(Steroid receptor coactivator 1,SRC-1)、CREB结合蛋白(cAMP-response element-binding protein, CBP)、p300和核受体共抑制因子2(Nuclear receptor corepressor 2,NCOR2)的mRNA水平和蛋白表达情况，采用双荧光素酶报告基因测定干扰SRC-1或p300后EECs的荧光素酶活性。结果表明：1)与对照组相比，100 nmol/L睾酮组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量极显著升高(P0.05),但分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.01)和显著(P0.05),而SRC-1和p300蛋白表达量极显著升高(P<0.01)和显著(P0.05),AR的转录活性显著降低(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
栾兆进 赵勇超 宋慧子 张家新
[目的]利用体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)探究谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5)的抗氧化功能。[方法]体外分离培养并鉴定绵羊EECs后备用。筛选合成3条GPX5的siRNA序列(siRNA-N.1、siRNA-N.2、siRNA-N.3),同时随机设计一段不与GPX5重合的扰码(scramble)序列(siRNA-NC),采用瞬时转染法转染EECs,以正常的EECs为对照(CK),于转染34 h后取样,从mRNA和蛋白水平检测GPX5的干扰效果。采用CCK-8法检测GPX5干扰组、siRNA-NC组和CK组EECs的增殖能力,采用DCFH-DA探针法检测其活性氧(ROS)水平,采用TBA法检测其丙二醛(MDA)水平,采用免疫荧光法检测其8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平。[结果]分离培养的细胞可与角蛋白18(CK18)特异性抗体反应,表明细胞为EECs,可用于后续试验。siRNA-N.3(即siRNA-GPX5)对EECs GPX5 mRNA和蛋白表达的干扰效果最优,可用于后续试验。随着过氧化氢(H_2O_2)处理浓度的增加,与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs的增殖能力持续下降。与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs中的ROS和MDA水平分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)升高,8-OHdG水平明显上升。[结论]GPX5可以有效保护绵羊EECs,使其免受脂质过氧化损伤及DNA氧化损伤。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姚晓磊 孟繁星 王书婷 刘孜斐 王锋
[目的]本文旨在探究不同发育阶段湖羊附睾(头、体、尾)中GALNTL5(polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase-like protein 5)的表达规律及其microRNA(miRNA)预测。[方法]选取3、9、24月龄(M)雄性湖羊各5只,屠宰后采集附睾(头、体、尾)组织。采用RT-qPCR和Western blot技术检测不同发育阶段湖羊附睾中GALNTL5 mRNA和蛋白表达水平;用免疫组化技术对其进行定位分析;用RNAhybrid和miRanda 2种软件分别预测GALNTL5对应的miRNA并取交集,同时检测候选miRNA在附睾尾中的表达规律。[结果]GALNTL5 mRNA和蛋白在附睾体、尾中表现为性成熟后(9 M和24 M)显著高于性成熟前(3 M)(P0.05)。除了GALNTL5蛋白在9 M与24 M附睾尾中差异显著外,其余均差异不显著(P>0.05);GALNTL5蛋白在附睾头、体中的表达规律一致;GALNTL5定位于附睾主细胞、基细胞及精子中。预测获得11个候选miRNA,按评分高低进行排序,选取miR-487a-5p、miR-485-5p、miR-329b-5p和miR-27a这4个miRNA进行验证,发现miR-487a-5p表达水平表现为性成熟后(9 M和24 M)显著高于性成熟前(3 M)(P<0.05),而miR-485-5p和miR-27a呈现相反趋势。[结论]GALNTL5在精子成熟过程中扮演着重要的角色;miR-485-5p和miR-27a可能与GALNTL5存在靶向关系。
关键词：
GALNTL5 附睾 发育阶段 湖羊
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王维民 胡庭溪 李发弟 马友记 樊红樱 潘香羽
【目的】分离鉴定绵羊视黄酸受体-γ(Retinoic acid receptor gamma,RARG)基因,分析该基因的分子特征,研究其在发情周期不同阶段卵巢中的表达差异。【方法】选取年龄和体况相近、健康的甘肃高山细毛羊周岁母羊8只,通过同期发情处理,根据卵巢生理状态,将其分为两组:黄体期组和卵泡期组,各4只,屠宰后,采集卵巢组织,以周岁母羊卵巢组织RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增绵羊RARG基因并克隆到pMD18-T载体中进行测序验证。利用ORF Finder和DNAStar等生物信息学软件分析绵羊RARG基因的理化性质、同源性和预测结构域和功能。利用Q-PCR技术,检测绵羊RARG...
[期刊] 草业科学
[作者]
陈娜娜 安雪姣 满永恒 李讨讨 王霞 马友记
过氧化物氧化还原酶5 (PRDX5)是一种硫氧还蛋白，参与机体多种生物学过程。为了研究PRDX5基因在藏绵羊(Ovis aries)睾丸发育和精子发生过程中的作用，本研究以不同发育阶段(3月龄、1周岁和3周岁)的藏绵羊为研究对象，克隆了PRDX5基因的CDS区，并对其进行生物信息学分析；通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot和免疫组织化学染色法，对PRDX5基因在藏绵羊睾丸不同发育阶段的表达和分布进行了检测。结果显示，PRDX5基因CDS区全长659 bp，可编码219个氨基酸；蛋白质结构预测显示PRDX5以α-螺旋为主，无信号肽；系统进化树显示，藏绵羊PRDX5基因与山羊(Capra hircus)亲缘关系最近；1周岁(性成熟期)和3周岁(成年)藏绵羊睾丸中PRDX5 mRNA相对表达量极显著(P <0.01)低于3月龄，且两者在性成熟后趋于稳定；PRDX5蛋白在藏绵羊睾丸不同发育阶段的支持细胞和间质细胞中均有表达。推测PRDX5基因可能通过调节细胞内ROS的水平影响精子发生微环境，从而调控精子发生过程。
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈定双 王瑞龙 林亚秋 王永 朱江江 李鑫 张浩 李艳艳
Hoxa5是HOX家族中的一员,在生长发育与肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用,但其在反刍动物中的研究较少。为了获得山羊Hoxa5基因序列,明确其表达特征,知悉其在山羊不同组织的表达水平,利用RT-PCR技术,从简州大耳羊的皮下脂肪组织中克隆得到Hoxa5基因序列,用生物信息学的方法分析其生物学特性,用实时荧光定量PCR技术检测Hoxa5基因在简州大耳羊心、肝、脾、肺、肾、背、股、臂等10个组织中的表达情况。结果表明:山羊Hoxa5基因的开放阅读框为813 bp,共编码270个氨基酸。Hoxa5相对分子质量为29.283 ku,等电点为9.42,无信号肽和跨膜结构域,该蛋白属于非分泌蛋白;Hoxa5蛋白的二级结构预测发现,Hoxa5蛋白中无规卷曲含量最高,其次是α螺旋,β转角占总氨基酸数相对较少;氨基酸同源性比对结果显示,简州大耳羊与绵羊、牛、马、猪、黑鼠、豚鼠、小鼠及人的Hoxa5氨基酸序列相似性依次为100.00%,99.63%,99.26%,99.26%,98.89%,98.89%,98,89%和98.15%,说明该基因在不同的物种间具有较高的保守性;实时荧光定量PCR结果显示,Hoxa5基因在山羊的组织中差异表达,在肾脏中表达量最高;构建pEGFP-Hoxa5融合载体转染山羊皮下脂肪细胞后的荧光定位显示该基因主要定位于细胞核中。研究表明山羊Hoxa5基因在皮下脂肪细胞分化过程上调且蛋白定位于细胞核中,推测该基因可能作为转录因子调控山羊皮下脂肪细胞分化。
关键词：
山羊 Hoxa5 表达特征 核定位
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈定双 王瑞龙 林亚秋 王永 朱江江 李鑫 张浩 李艳艳
Hoxa5是HOX家族中的一员,在生长发育与肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用,但其在反刍动物中的研究较少。为了获得山羊Hoxa5基因序列,明确其表达特征,知悉其在山羊不同组织的表达水平,利用RT-PCR技术,从简州大耳羊的皮下脂肪组织中克隆得到Hoxa5基因序列,用生物信息学的方法分析其生物学特性,用实时荧光定量PCR技术检测Hoxa5基因在简州大耳羊心、肝、脾、肺、肾、背、股、臂等10个组织中的表达情况。结果表明:山羊Hoxa5基因的开放阅读框为813 bp,共编码270个氨基酸。Hoxa5相对分子质量为29.283 ku,等电点为9.42,无信号肽和跨膜结构域,该蛋白属于非分泌蛋白;Hoxa5蛋白的二级结构预测发现,Hoxa5蛋白中无规卷曲含量最高,其次是α螺旋,β转角占总氨基酸数相对较少;氨基酸同源性比对结果显示,简州大耳羊与绵羊、牛、马、猪、黑鼠、豚鼠、小鼠及人的Hoxa5氨基酸序列相似性依次为100.00%,99.63%,99.26%,99.26%,98.89%,98.89%,98.89%和98.15%,说明该基因在不同的物种间具有较高的保守性;实时荧光定量PCR结果显示,Hoxa5基因在山羊的组织中差异表达,在肾脏中表达量最高;构建pEGFP-Hoxa5融合载体转染山羊皮下脂肪细胞后的荧光定位显示该基因主要定位于细胞核中。研究表明,山羊Hoxa5基因在皮下脂肪细胞分化过程上调且蛋白定位于细胞核中,推测该基因可能作为转录因子调控山羊皮下脂肪细胞分化。
关键词：
山羊 Hoxa5 表达特征 核定位
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张壮彪 狄冉 刘秋月 胡文萍 王翔宇 田志龙 张效生 张金龙 储明星
【背景】随着人们生活水平不断提高,蛋白含量丰富、胆固醇含量较少的羊肉在日常生活中越来越受青睐,羊肉总体消费需求呈逐年增长趋势。但是近年来以羊肉为主的羊产品短缺,导致羊肉的价格一直居高不下,造成羊肉供需之间的矛盾。在早期对绵羊各项生产性能研究中发现,其繁殖性能高低对羊肉生产有重要影响。因此,提高绵羊繁殖力对改变我国肉羊生产周转慢、效益差的局面有重要意义。产羔数是最重要的繁殖性状,但产羔数是一个低遗传力的数量性状,且受微效多基因的控制,故传统的育种方法难以快速改良产羔数性状。近年来随着分子标记技术的出现,研究人员发现了一些影响绵羊繁殖力的主效基因,比如BMPR1B、BMP15、GDF9等,所以后期人们开始利用常规育种结合这些分子标记进行高繁殖力绵羊品种选育。研究表明除了这些已经发现的主效基因外,仍有一些基因对绵羊的繁殖力具有一定的调控作用。【目的】探究影响绵羊繁殖力的候选基因BMP2、BMP6、BMP7、CAST和CART在小尾寒羊和苏尼特羊性腺轴相关组织(大脑、小脑、下丘脑、垂体、子宫、卵巢、输卵管)的表达差异,为阐明绵羊高繁殖力机理提供参考。【方法】以产多羔的小尾寒羊和产单羔的苏尼特羊为对象,利用实时荧光定量PCR检测上述5个基因在两个绵羊品种与性腺轴相关的7种组织中的表达差异。【结果】BMP2在小尾寒羊和苏尼特羊的性腺轴7种组织中均有表达,在小尾寒羊下丘脑中的表达量高于苏尼特羊(P<0.05),在小尾寒羊输卵管、卵巢、垂体、小脑的表达量高于苏尼特羊(P0.05);BMP6在小尾寒羊垂体和卵巢以及输卵管中表达量高于苏尼特羊(P0.05);BMP7在小尾寒羊垂体、大脑的表达量高于苏尼特羊(P<0.05),在小尾寒羊下丘脑、输卵管、卵巢中的表达量高于苏尼特羊(P0.05);CAST在小尾寒羊和苏尼特羊的下丘脑、垂体中呈痕量表达,在其它组织中均有较高表达量,其在小尾寒羊输卵管和子宫中的表达量高于苏尼特羊(P0.05);CART在2种绵羊下丘脑中有较高表达量,在苏尼特羊垂体中的表达量高于小尾寒羊(P<0.05),在小尾寒羊大脑中的表达量高于苏尼特羊(P0.05)。【结论】暗示这5个基因可能对绵羊繁殖力具有一定的调控作用。
关键词：
绵羊 产羔数 候选基因 性腺轴 组织表达
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李文韬 周丽娟 刘子嶷 王鹏 储明星 刘玉芳
为探讨miR-376b-5p靶向调控IGF1影响绵羊多羔性状的分子机制，本研究根据产羔记录选取高、低产羔数小尾寒羊各5只，同期发情处理后，采集卵泡期卵巢及其他6个组织，通过RT-qPCR、Western blot和双荧光素酶报告基因检测系统分析miR-376b-5p与IGF1在高、低产羔数小尾寒羊各组织中的表达量；并确定二者之间的靶向关系；随后，将体外合成的miR-376b-5p模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)转染至绵羊卵巢颗粒细胞中，检测miR-376b-5p对IGF1表达水平的调控情况，同时对多羔性状TGF-β信号通路中TGFβ1和PTGS2标志因子的表达进行分析。结果表明：1)组织表达谱显示，IGF1在绵羊卵巢组织中的表达量显著高于其他组织(P<0.01);miR-376b-5p定量结果显示其表达趋势与IGF1相反(P<0.05),而抑制miR-376b-5p后则相反，表明miR-376b-5p可显著抑制IGF1的表达；4)在绵羊卵巢颗粒细胞中过表达miR-376b-5p后，TGF-β信号通路中TGFβ1、PTGS2的表达量均显著低于阴性对照组(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李岩 廖和荣 李知勉 孙杰 李大全
目的为探讨外源性IGF-Ⅰ对绵羊皮肤中毛囊生长调控的影响。方法选取36只新疆细毛羊,随机分成6组。在每只绵羊的左、右两侧肩胛前部分别进行拔毛、剃毛处理。同时在左侧肩胛前部的拔毛、剃毛和正常区的交叉处注射0.5ml IGF-Ⅰ(10ng.ml-1),然后在第0、3、6、9、12、50天采取皮样。用RT-PCR方法,测定各皮肤中GHR、IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR、KAP3.2和KAP6-1的mRNA相对丰度。结果(1)IGF-Ⅰ可以下调正常皮肤中GHR基因的表达,对IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR的表达没有显著的影响,能显著提高KAP3.2和KAP6-1的转录水平;(2)IGF-Ⅰ在3 d内可降低拔毛皮肤中...
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢光杰 杜宇 许晴 马洁琼 邱翔 林亚秋
为阐明KLF5在山羊不同组织和不同诱导分化阶段的肌内脂肪细胞中的表达特性,利用降落PCR克隆山羊KLF5基因cDNA序列,通过各种在线工具分析山羊KLF5基因的生物学特征,利用实时荧光定量PCR技术分析KLF5基因在山羊不同组织和不同诱导分化阶段的肌内脂肪细胞中的表达水平。结果表明,克隆获得山羊KLF5基因序列1 735 bp,其中包括1 365 bp完整的开放阅读框(ORF)、8 bp的5′非翻译区(UTR)和362 bp的3′UTR。蛋白预测显示,山羊KLF5编码454个氨基酸,合成不具有跨膜结构和信号肽的不稳定的亲水性蛋白。组织表达谱显示KLF5基因在山羊心、肝、脾、肺、肾、背最长肌、皮下脂肪和腹间脂肪等组织中均有表达,但在肺组织中的表达量较高,显著高于除腹间脂肪外的其他组织中的表达(P<0.05)。同时,细胞时序表达谱表明KLF5在分化的山羊肌内脂肪细胞中的表达水平均高于肌内前体脂肪细胞中的表达水平,且在诱导分化第5天时的表达量最高,显著高于第0天的表达量(P<0.05)。研究结果发现,具有3个锌指结构域等复杂结构的KLF5蛋白可能在山羊肌内脂肪细胞分化后期发挥正向的调控作用,并促进山羊肌内脂肪沉积。
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