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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
范晓梅 栗瑞兰 张通 边小娜 张家新
为研究GPx5在内蒙古绒山羊附睾中的表达模式,对初情期、体成熟期、老龄期3个生殖生理阶段绒山羊附睾及睾丸中的GPx5从mRNA和蛋白水平进行了检测。结果显示各生殖生理阶段绒山羊睾丸中均未见GPx5表达,附睾中均有GPx5表达。各生殖生理阶段附睾表达区域及表达量存在差异:初情期,GPx5 mRNA和蛋白主要表达于附睾头部;体成熟期,附睾各区域GPx5 mRNA和蛋白的表达量极显著高于其他阶段,附睾起始部和附睾头部为主要表达区;老龄期,GPx5 mRNA和蛋白主要表达于附睾头部,但较体成熟期明显减少。免疫组化
关键词：
绒山羊 附睾 精子 GPx5
[期刊] 中国农业科学
[作者]
栗瑞兰 张通 范晓梅 欧阳效晴 张春强 曹俊伟 张家新
【目的】研究谷胱甘肽过氧化物酶－５（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｔｙｐｅ－５，ｇｐｘ５）在成年绵羊附睾的表达特征以及ｇｐｘ５蛋白在附睾中的定位，为绵羊精子在附睾中抗氧化机制的研究提供理论依据。【方法】采取年龄相近的成年蒙古绵羊的附睾、睾丸和输精管。每一只公羊的附睾分别按照附睾头、附睾体和附睾尾进行分割。样品保存于－８０℃冰箱，采用实时荧光定量ｐＣｒ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ的方法，对成年绵羊的附睾、睾丸和输精管的ｇｐｘ５表达量进行分析。将新鲜的组织样品各部分切取适合大小浸泡于４％多聚甲醛溶液中２４ｈ，按照石蜡切片的方法制作组织切片。用ｇｐｘ５特异性抗体孵育组织切片，利．．．
关键词：
绵羊 附睾 GPX5 基因表达 蛋白定位
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
乌亚罕 史振丹 乌丽雅苏 爱伦高娃 扎木嘎 乌云斯钦 恩和玛日特 哈斯高娃 娜仁花
【目的】研究谷胱甘肽过氧化酶5(GPx5)基因在绵羊附睾及附睾不同发育时期的表达特性。【方法】采用荧光定量PCR技术、免疫印迹技术及免疫荧光等方法,分别检测GPx5基因在绵羊附睾不同发育时期、不同部位上mRNA和蛋白的表达及分布情况。【结果】荧光定量PCR结果表明,青年羊附睾GPx5基因在头部的mRNA表达量显著高于体部和尾部(P<0.05);青年羊附睾头部GPx5基因mRNA表达量显著高于羔羊和老年羊附睾头部(P<0.05)。免疫印迹结果表明,羔羊附睾无GPx5蛋白表达;青年羊附睾各部位均有表达,而老年
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
乌亚罕 乌丽雅苏 史振丹 艾伦高娃 扎木嘎 乌云斯钦 哈斯高娃 恩和玛日特 娜仁花
为研究外源雄激素丙酸睾酮对绵羊附睾特异表达基因谷胱甘肽过氧化酶５（ＧＰｘ５）的影响，应用酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测血清和附睾头部内睾酮（Ｔ）、二氢睾酮（ＤＨＴ）的含量，及附睾头部雄激素受体（ＡＲ）蛋白表达量；应用实时荧光定量ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测了附睾头部ＧＰｘ５－ｍＲＮＡ和ＡＲ－ｍＲＮＡ相对表达量；并结合免疫印迹（ＷＢ）法检测了附睾头部ＧＰｘ５蛋白相对表达量。结果表明：丙酸睾酮处理（ＴＰＴ）组与对照组相比绵羊血清ＤＨＴ含量，附睾头部Ｔ含量、ＤＨＴ含量均显著提高，分别是对照组的０．５、６．０、０．８倍；ＧＰｘ５－ｍＲＮＡ和ＡＲｍＲＮＡ相对表达量显著提高，分别是对照组的０．７５和０．．．
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
栾兆进 赵勇超 许娇霞 刘永斌 张家新
为探究雄激素受体(Androgen receptor, AR)及共调节因子对绵羊附睾上皮细胞(Epididymal epithelial cells, EECs)谷胱甘肽过氧化物酶5(Glutathione peroxidase 5,GPX5)的调节机制，本研究采用CCK-8检测睾酮对EECs增殖的影响；利用qRT-PCR、免疫荧光法和Western Blot法分别检测AR、GPX5、甾体激素受体共激活子1(Steroid receptor coactivator 1,SRC-1)、CREB结合蛋白(cAMP-response element-binding protein, CBP)、p300和核受体共抑制因子2(Nuclear receptor corepressor 2,NCOR2)的mRNA水平和蛋白表达情况，采用双荧光素酶报告基因测定干扰SRC-1或p300后EECs的荧光素酶活性。结果表明：1)与对照组相比，100 nmol/L睾酮组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量极显著升高(P0.05),但分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.01)和显著(P0.05),而SRC-1和p300蛋白表达量极显著升高(P<0.01)和显著(P0.05),AR的转录活性显著降低(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李华 苏立宁 刘东军 李雪峰 旭日干
【目的】克隆内蒙古绒山羊视黄酸结合蛋白Ⅰ(cellular retinoic acid binding proteinⅠ,CRABPⅠ)基因的cDNA,进行蛋白结构的预测和表达分析,为绒山羊毛和绒形成的分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法克隆内蒙古绒山羊CRABPⅠ基因序列,利用生物信息学方法预测其蛋白结构,采用实时荧光定量PCR探讨该基因在绒山羊4个胎儿日龄皮肤中的表达。【结果】内蒙古绒山羊CRABP I基因cDNA长679 bp(JN936490),其开放阅读框为414 bp,氨基酸序列与其它物种相比具有较高的序列相似性。CRABPⅠ蛋白无明显的信号肽和跨膜区域,不存在N糖基化位...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
苏蕊 李金泉 张文广 尹俊 赵珺 常子丽
【目的】研究内蒙古绒山羊毛囊发育兴盛期和休止期BMP2基因在皮肤毛囊中的表达情况。【方法】功能分类基因芯片以及原位杂交技术。【结果】原位杂交结果表明,该基因在休止期毛囊毛干周围高表达,在兴盛期不表达;基因芯片结果显示,同兴盛期相比,休止期BMP2基因在皮肤中表达上调24.65倍。【结论】BMP2基因抑制内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育,与维持皮肤毛囊处于休止期有关;该基因主要在皮肤毛囊的毛干周围发挥作用,从而达到维持皮肤毛囊发育处于休止期的作用。
关键词：
BMP2 毛囊 表达 原位杂交 基因芯片
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏蕊 张文广 尹俊 赵珺 常子丽 李金泉
为探讨调节内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育相关基因及其作用机理,采用原位杂交和荧光实时定量PCR方法对BMP2基因在内蒙古绒山羊皮肤毛囊中的表达情况进行了检测,分析了其可能的作用方式。原位杂交结果表明,该基因在内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育休止期毛干周围有强烈的表达信号,在兴盛期不表达;荧光实时定量PCR结果显示,该基因在休止期皮肤毛囊的表达量是兴盛期的27.8倍。综合上述试验结果,推测BMP2基因在毛囊发育过程中主要起抑制毛囊生长发育、维持毛囊处于休止期的作用,且可能参与新一轮的毛囊重建,因此,可将BMP2基因作为绒山羊育种过程中提高其产绒量的一个潜在的分子靶点。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
勿都巴拉 吴江鸿 丽春 胡斯乐 高树新
为分析绒山羊JAG1蛋白结构特征,及其在不同毛囊生长期中的表达模式,从阿拉善种羊场选择2周岁、体重相近的3只内蒙古绒山羊母羊,利用生物信息学方法比对绒山羊JAG1氨基酸序列与其他物种的相似性,分析JAG1蛋白质理化性质和结构特征;利用免疫组化和实时荧光定量PCR检测其在内蒙古绒山羊皮肤中的表达部位和表达量。结果表明,绒山羊JAG1氨基酸序列与绵羊相似性可达99.5%,JAG1蛋白信号肽位于第1～29个氨基酸序列,含有一个剪切位点和一个跨膜结构,具有61个丝氨酸、26个苏氨酸、19个酪氨酸磷酸化位点,63个O-糖基化位点,6个N-糖基化位点,属于不稳定亲水蛋白。在毛囊退行期(1月份)和休止期(4月份)未检测到JAG1蛋白的表达;生长前期(7月份)和生长期(9月份)在毛乳头细胞中表达。JAG1 mRNA在内蒙古绒山羊皮肤毛囊的4个时期均有表达,随着毛囊进入生长期JAG1 mRNA表达量逐渐增加,生长期皮肤中的表达量显著高于其他阶段(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵珺 张文广 苏蕊 刘志红 张燕军 王乐 付绍印 李金泉
【目的】研究内蒙古绒山羊背最长肌、臂三头肌和臀肌的蛋白差异表达谱。【方法】以３只在相同背景下饲养的绒山羊成年母羊为研究对象，屠宰后取背最长肌、臂三头肌和臀肌３个部位骨骼肌，采用差异双向电泳方法建立蛋白质谱，找出１７个差异表达蛋白点，并进行质谱分析。【结果】成功鉴定并匹配到１５个差异表达蛋白，其中９个与山羊肌肉发育相关。背最长肌中发现的位于ＦＧＦ２反义链的蛋白的功能主要是独立控制ＦＧＦ２的表达，同时具有激素调节和抗增殖的作用；背最长肌和臂三头肌中发现的轻链肌球蛋白（ＭｙＬＣ）家族成员，其类型在２种肌肉组织中不同，功能是控制肌肉收缩。背最长肌和臂三头肌中的ＭｙＬＣ蛋白分子质量存在差异。【结论】建立．．．
关键词：
绒山羊 骨骼肌 差异蛋白 质谱分析
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨娇馥 史偈君 梁燕 郑旭 张涛 秦毅 王志钢 刘东军
【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR克隆AKT基因cDNA。通过在线软件BLAST进行核酸序列分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析。半定量RT-PCR检测AKT基因在绒山羊组织中的表达特异性。Western blotting检测绒山羊胎儿成纤维细胞中AKT表达。【结果】克隆到的内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA片段长1 443 bp,包含了编码480个氨基酸残基的全长ORF,氨基酸序列与绵羊(NM_001161857.1)同源性为97%。SMART分析表明,ORF编码的蛋白包含了可与3-磷酸肌醇结合的PH结构域及具有丝氨酸/苏氨酸激酶...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵濛 奈日乐 谢遇春 马丽娜 米璐 李金泉 刘志红
【目的】研究绒山羊皮肤部分角蛋白关联蛋白(keratin-associated protein,KRTAPs)基因的表达谱及其与全年日照变化规律间的相关性。【方法】以3只周岁阿尔巴斯型内蒙古绒山羊体侧皮肤为样本,进行高通量转录组测序(RNA-Seq),对获得的部分KRTAPs基因一年内不同月份间的转录本进行表达丰度分析,并结合当地全年日照变化规律与RT-PCR试验方法,验证KRTAP24-1、KRTAP3-1、KRTAP8-1在关键节点月份的表达谱,确定全年皮肤KRTAPs表达丰度变化与日照变化规律间的相
[期刊] 中国农业科学
[作者]
鲍文蕾 李彬 侯鑫 刘俊娥 郭旭东 王志钢 刘东军
【目的】构建绒山羊血管内皮生长因子164(vascular endothelial growth factor 164,VEGF164)基因的毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞,筛选获得稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】以pCDsRed2载体为基本骨架将VEGF164基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,接续连接红色荧光蛋白表达元件,构建VEGF164基因毛囊特异表达载体pCDsRed2-KV(6.3 kb)。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
栾兆进 赵勇超 宋慧子 张家新
[目的]利用体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)探究谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5)的抗氧化功能。[方法]体外分离培养并鉴定绵羊EECs后备用。筛选合成3条GPX5的siRNA序列(siRNA-N.1、siRNA-N.2、siRNA-N.3),同时随机设计一段不与GPX5重合的扰码(scramble)序列(siRNA-NC),采用瞬时转染法转染EECs,以正常的EECs为对照(CK),于转染34 h后取样,从mRNA和蛋白水平检测GPX5的干扰效果。采用CCK-8法检测GPX5干扰组、siRNA-NC组和CK组EECs的增殖能力,采用DCFH-DA探针法检测其活性氧(ROS)水平,采用TBA法检测其丙二醛(MDA)水平,采用免疫荧光法检测其8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平。[结果]分离培养的细胞可与角蛋白18(CK18)特异性抗体反应,表明细胞为EECs,可用于后续试验。siRNA-N.3(即siRNA-GPX5)对EECs GPX5 mRNA和蛋白表达的干扰效果最优,可用于后续试验。随着过氧化氢(H_2O_2)处理浓度的增加,与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs的增殖能力持续下降。与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs中的ROS和MDA水平分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)升高,8-OHdG水平明显上升。[结论]GPX5可以有效保护绵羊EECs,使其免受脂质过氧化损伤及DNA氧化损伤。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张微 朱晓萍 卢德勋 侯文娟 贾志海
通过基础日粮中 (含铜 7 4 6mg·kg-1)添加不同水平的铜 ( 0 ,10 ,2 0和 30mg·kg-1)对生绒期绒山羊营养物质消化代谢及生产性能影响的研究 ,确定其日粮铜的适宜水平。结果表明 :1)基础日粮添加铜对采食量、氮代谢、DM及ADF消化率没有影响 (P >0 0 5 ) ,但NDF的消化率有升高趋势 ,添加 10 ( 5 6 72 %为NDF消化率 ,下同 )和 2 0 ( 5 7 16 % )mg·kg-1铜组显著高于对照组 ( 5 0 35 % ) (P
关键词：
绒山羊 生绒期 铜水平
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