为了阐明紫贻贝幼体附着变态的内在机理,在天然诱导物-微生物膜的诱导参照下,通过使用G蛋白偶联受体(GPCRs)和信号通路的活化剂与抑制剂初步研究了其对该物种幼体附着变态过程的调控作用。结果显示,GPCRs活化剂Gpp[NH]p与抑制剂GDP-β-S没有诱导和抑制活性,表明可能非GPCRs的其他细胞反应过程参与了紫贻贝幼体的附着变态。腺苷酸环化酶/环腺苷酸(AC/cAMP)信号通路相关、理论上具有诱导活性的6种神经性试剂,除了磷酸二脂酶抑制剂(IBMX)外,其他在10-8~10-3M浓度下48、72 h后都没有活性,并且高浓度下表现出较高的神经性药物毒性。IBMX仅在10-4M浓度72 h后呈现...

[目的]利用灰飞虱Laodelphax striatellus基因组和转录组数据鉴定灰飞虱G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor， GPCR）基因。[方法]构建灰飞虱基因组和转录组本地数据库，以黑腹果蝇Drosophila melanogaster和豌豆蚜Acyrthosiphon pisum的GPCR基因为参照序列进行本地BLAST，去除冗余和不含有多跨膜螺旋结构的序列后获得灰飞虱GPCR基因；利用NCBI CD-Search对灰飞虱GPCR序列进行跨膜结构域分析，利用Clustal W进行序列比对，用MEGA 6软件构建灰飞虱GPCR系统发育树。[结果]鉴定了114个灰飞虱GPCR基因，它们分属于A、B、C和D这4个家族。灰飞虱A家族的GPCR数量最多，尤其是其中的神经肽和蛋白激素受体亚家族的基因数量达55个。与黑腹果蝇的GPCR相比，灰飞虱GPCR不仅种类丰富，而且有基因重复和可能的缺失现象。[结论]灰飞虱具有较为全面的GPCR系统，本研究完善了灰飞虱GPCR基因的信息，为进一步研究灰飞虱GPCR的功能奠定了基础。

为研究胆碱受体在厚壳贻贝幼虫变态发育过程中的作用,通过药理学手段调查胆碱类神经递质乙酰胆碱、氯甲酰胆碱及其拮抗剂六甲双铵和阿托品对厚壳贻贝幼虫变态发育调控作用。结果显示:在24 h暴露实验中,氯甲酰胆碱在10-5~10-4mol/L浓度表现出诱导活性,乙酰胆碱则无诱导活性。在持续暴露实验中,氯甲酰胆碱在10-5~10-4mol/L浓度表现出诱导活性,乙酰胆碱在10-6~10-4mol/L浓度表现出诱导活性。在拮抗剂实验中,在10-4mol/L氯甲酰胆碱或10-4mol/L乙酰胆碱存在时,N型胆碱受体拮抗剂六甲双铵对厚壳贻贝幼虫的变态均无抑制效果,表明N型胆碱受体可能并不在幼虫的变态发育过程发挥...

植物病原丝状真菌G蛋白偶联受体（GPCR）在实现外界信号感知和传递过程中发挥着重要作用。基于GPCR蛋白所具有的典型7个跨膜保守结构域及非典型保守结构域，通过总结前人已报道的候选GPCR的同源比对方法，对其跨膜结构域数量预测方法及跨膜结构蛋白数据库进行对比，明确TOPCONS是目前开展GPCR跨膜结构域预测的较好方法。选择NCBI数据库中223个不同真菌的GPCR蛋白序列开展TOPCONS和TMHMM对比分析，结果显示，2种软件对GPCR的跨膜结构域数量预测结果不尽相同，TOPCONS预测结果的准确度较高；进一步对上述GPCR蛋白序列的氨基酸数目进行分析，明确具有7个跨膜结构域的GPCR蛋白氨基酸数目为200～1 406个。该研究可为进一步开展植物病原丝状真菌GPCR蛋白的结构预测及其功能研究提供参考。

【目的】克隆绿盲蝽(Apolygus lucorum)G蛋白偶联受体激酶2基因(AlGRK2)cDNA序列,明确其时空表达谱,阐明外源蜕皮激素(20E)对AlGRK2表达的影响,分析AlGRK2在绿盲蝽生长发育中的作用,为进一步研究其在蜕皮激素信号转导通路中的功能打下基础。【方法】RACE法克隆获得AlGRK2全长,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析不同日龄绿盲蝽及雌成虫不同组织中AlGRK2的表达谱,分析外源20E诱导及RNAi处理后,AlGRK2 mRNA表达的应答反应及对绿盲蝽生长发育主要参数(发育历期、若虫体重及成虫羽化率)的影响。【结果】AlGRK2 cDNA序列全长2 715 bp,开放阅读框2 106 bp,编码701个氨基酸,ExPASy预测其蛋白分子量为80.2 kD,理论等电点为6.56;蛋白结构分析显示AlGRK2包含4个结构域,即G蛋白信号调节区(RGS,54—175 aa)、丝氨酸/苏氨酸激酶结构域(S-TKc,191—454 aa)、丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶的伸展部分(S-TK-X,455—534 aa)和PH结构域(PH,558—655 aa),其中PH结构域是GRK2蛋白的典型结构域;系统发育分析结果表明,绿盲蝽GRK2与茶翅蝽GRK2亲缘关系最近;AlGRK2在绿盲蝽1—16日龄虫体内均有表达,mRNA表达量呈现出波动式下降的模式,在绿盲蝽初始龄期的表达量较高,而在末龄期的表达量显著下降;AlGRK2在绿盲蝽雌成虫卵巢和脂肪体中高表达,在胸与足中的表达量较低;外源20E处理后,AlGRK2在绿盲蝽1日龄和3日龄表达量显著下调,AlGRK2在雌成虫各组织中均表达上调,在卵巢及脂肪体中上调幅度最大,相反的是,20E信号通路中PLC抑制剂U73122处理的AlGRK2表达量下调;绿盲蝽若虫发育历期、末龄若虫体重和成虫羽化率均显著下降,相反的是,U73122处理组若虫期的发育历期显著延长;此外,与注射ds GFP处理组相比,注射ds AlGRK2处理后绿盲蝽的AlGRK2表达水平显著下降,若虫死亡率及发育历期显著增加,而成虫羽化率和5龄若虫体重均显著下降。【结论】AlGRK2在绿盲蝽体内的表达谱显示出发育阶段特异性和组织特异性;外源20E抑制剂及RNAi处理后,均可抑制AlGRK2的表达,同时还可对绿盲蝽生长发育产生不利影响,表现为延缓绿盲蝽的发育进度、降低5龄若虫体重及成虫羽化率。

为探究厚壳贻贝GABA受体在幼虫附着变态发育中的作用，本研究利用GABA及其受体拮抗剂荷包牡丹碱（GABA_(A)受体）和CGP52432（GABA_(B)受体），研究其对厚壳贻贝幼虫附着变态的调控作用。通过分析厚壳贻贝不同发育阶段幼虫转录组数据得到2个GABA受体基因（GABA_(A)R和GABA_(B2)R），其中GABA_(B2)R在变态前期的眼点幼虫阶段相较于其他阶段显著高表达。通过实时荧光定量PCR验证也得到相似的表达模式，表明GABA受体可能参与调控厚壳贻贝幼虫变态发育。药理学实验结果显示10~(-4) mol/L GABA对厚壳贻贝幼虫的变态具有诱导活性（27.2%±3.0%）。在拮抗剂实验中，荷包牡丹碱和CGP52432在10~(-6)～10~(-4) mol/L浓度均显著抑制了厚壳贻贝幼虫变态，且抑制作用随浓度升高而增强。此外，本研究发现GABA及其受体拮抗剂都抑制了厚壳贻贝幼虫的游泳行为。GABA_(A)或GABA_(B)受体拮抗剂均对厚壳贻贝幼虫附着变态具有抑制作用，表明GABA两种受体类型都可能参与调控厚壳贻贝幼虫附着变态过程。研究结果可为进一步解析GABA能信号系统调控厚壳贻贝幼虫附着变态机理提供数据参考。

【目的】建立一种简单方便的半抗原-载体蛋白偶联物电泳鉴定方法。【方法】选用SDS-PAGE、非变性琼脂糖凝胶电泳、高效毛细管区带电泳3种方法对载体蛋白、偶联剂变性的载体蛋白、半抗原-载体蛋白进行比较鉴定,同时与光谱法结果比较。【结果】对分子量差异较小的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,SDS-PAGE不能有效分辨;但偶联前后载体电荷有变化时,非变性琼脂糖凝胶电泳却能有效分辨游离的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,相对SDS-PAGE表现出更高的分辨灵敏度;毛细管区带电泳能高效分辨载体和半抗原-载体蛋白偶联物,结果直观,但需较贵重的专用仪器。琼脂糖电泳和毛细管电泳法与可见-紫外光谱法鉴定结果一致...

The regulation of energetic efficiency through the physiological uncoupling of oxidative phosphorylation may be a common strategy developed early in evolution.Uncoupling protein families are transporters in mitochondrial inner membrane.There are five UCP homologs in mammalian genome.UCP1-3 are close...

探讨了酶法与Sevage法联用脱除紫贻贝(Mytilus edulislinnaeus)多糖蛋白。通过正交中心组合实验,应用响应面分析法考察酶法脱蛋白的工艺条件。结果表明,酶法脱蛋白的最优工艺参数为:pH7.1,枯草杆菌中性蛋白酶加入量0.5 U/mg粗多糖,温度41℃,氯化钙加入量7.4 mg/g,时间3 h。在酶解的基础上应用Sevage法脱除游离蛋白,适宜的工艺条件为:氯仿∶正丁醇=5∶1,料液比4∶1,振摇时间20 min。酶法与Sevage联用法脱除贻贝多糖蛋白的脱除率为78.5%;与其它传统脱蛋白方法比较,该法适应范围广、样品损耗少、经济、快速、效果理想,为多糖的分离纯化研究提供了...

为了探究生物活性肽对海洋细菌生物被膜形成和贻贝稚贝附着的影响，实验首先通过紫贻贝肽直接刺激厚壳贻贝稚贝，观察其对稚贝附着的诱导能力；随后选用具有不同诱导能力的海洋细菌海假交替单胞菌和南海雷辛格氏菌，在形成生物被膜过程中分别添加不同浓度的紫贻贝肽，分析其对生物被膜形成及膜成分的影响，并进一步研究生物被膜的变化对厚壳贻贝稚贝附着的影响。结果显示，紫贻贝肽可显著诱导稚贝附着，1.0 g/L的紫贻贝肽诱导效果最高，且显著提高生物被膜细菌密度和被膜胞外蛋白含量；10.0 g/L的紫贻贝肽诱导效果最低，且显著降低生物被膜细菌密度和被膜胞外蛋白含量。研究表明，不同浓度的紫贻贝肽对细菌生物被膜产生不同的影响，从而使生物被膜诱导稚贝附着能力受到影响。综上，紫贻贝肽可以直接诱导厚壳贻贝稚贝附着，也能通过影响海洋细菌生物被膜的形成能力和被膜胞外蛋白含量间接影响厚壳贻贝稚贝附着。本研究可为探究生物活性肽的生理功能及其在贻贝稚贝附着阶段的调控提供新的思路。

LC3B是检测自噬程度的标志性分子,但是在低等动物体内缺少特异性强的LC3B抗体。为研究贝类的自噬性细胞死亡,本研究通过将紫贻贝的LC3B编码序列克隆到pET-32a原核表达载体中构建重组表达载体,进而对IPTG诱导浓度、诱导表达时间进行摸索;采用亲和层析对重组蛋白进行纯化,并采用SDS-PAGE检测及Western blot进行验证;利用获得的重组蛋白免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体。结果显示,在20℃,转速为150 r/min条件下,当IPTG浓度为0.6 mmol/L,诱导表达10 h后,可以得到高表

探究纤维素对海假交替单胞菌（Pseudoalteromonas marina）生物被膜的生物学特性及其对厚壳贻贝幼虫附着变态的影响。海假交替单胞菌（初始细菌密度 5×10~(8 )个/mL）分别与浓度为0.02、0.2、2、20 mg/L的纤维素共孵育形成生物被膜，检测形成的生物被膜对厚壳贻贝幼虫变态的诱导作用变化，比较生物被膜成膜能力、胞外产物等生物学特性变化，并分析其与厚壳贻贝幼虫附着变态的关系。纤维素浓度为2或20 mg/L时，所形成的生物被膜对幼虫附着变态的诱导活性显著降低。分析纤维素加入海假交替单胞菌形成的生物被膜生物学特性发现，随着纤维素浓度升高，生物被膜中细菌的分布更为分散，细菌密度和膜厚呈逐渐降低趋势，生物被膜胞外产物中α-多糖、β-多糖和脂质的生物量显著降低，而蛋白无明显变化。在海假交替单胞菌生物被膜形成过程中，纤维素主要通过降低胞外α-多糖、β-多糖和脂质的产生，进而间接调控厚壳贻贝幼虫附着变态。研究结果为探究海假交替单胞菌纤维素对生物被膜形成及对厚壳贻贝附着变态调控分子机制提供理论依据，为整治生物污损等实际问题提供新思路。

为探究纤维素对海假交替单胞菌生物被膜的生物学特性及其对厚壳贻贝幼虫附着变态的影响，实验设置海假交替单胞菌(初始细菌密度5×10~8个/m L)分别与浓度为0.02、0.20、2.00、20.00 mg/L的纤维素共孵育形成生物被膜，检测形成的生物被膜对厚壳贻贝幼虫变态的诱导作用变化，比较生物被膜成膜能力、胞外产物等生物学特性变化，并分析其与厚壳贻贝幼虫附着变态的关系。纤维素浓度为2.00或20.00 mg/L时，所形成的生物被膜对幼虫附着变态的诱导活性显著降低。通过分析加入纤维素后海假交替单胞菌形成的生物被膜生物学特性发现，随着纤维素浓度升高，生物被膜中细菌的分布更为分散，细菌密度和膜厚呈逐渐降低趋势，生物被膜胞外产物中α-多糖、β-多糖和脂质的生物量显著降低，而蛋白无明显变化。在海假交替单胞菌生物被膜形成过程中，纤维素主要通过降低胞外α-多糖、β-多糖和脂质的产生，进而间接调控厚壳贻贝幼虫附着变态。研究结果为探究海假交替单胞菌纤维素对生物被膜形成及对厚壳贻贝附着变态调控分子机制提供理论依据，为整治生物污损等实际问题提供新思路。

采用外加人工化学物质检验对僧帽牡蛎眼点幼体的附着和变态诱导活性 ,结果表明 :去甲肾上腺素、肾上腺素和L 多巴可有效诱导幼体不固着变态。在药物持续作用下 ,肾上腺素的最佳诱导浓度为 1 0 -5mol·L-1(变态率 6 7.4% ) ,去甲肾上腺素的最佳诱导浓度为 5× 1 0 -5mol·L-1(变态率 5 2 .2 % ) ,L -多巴的最佳诱导浓度为 1 0 -5mol·L-1(变态率 43.0 % ) ,而对照组变态率为 0。幼体大多在药物作用 1 2～ 2 4h之间完成变态。三种药物诱导的变态个体中有 85 %以上是不固着变态。比较多种附着基和EPI的变态诱导活性 ,显示同种贝壳...

为获得中国西门塔尔牛解偶联蛋白(Uncoupling proteins,UCPs)ucp1、ucp2、ucp3基因的组织表达谱,揭示该基因与能量代谢的关系,探索调控肉牛脂肪沉积的关键基因表达规律,筛选影响肉牛肥育性状的候选基因。以20头中国西门塔尔牛为试验材料,提取其15种组织(肝脏、淋巴、肋间肉、肩肉、脾脏、肾脏、背最长肌、肺、心脏、肠脂、网脂、睾丸、小肠、胰脏、背膘)总RNA,设计合成ucp1、ucp2、ucp3基因的引物,以牛β-actin基因为内参,利用实时荧光定量PCR技术,检测ucp1、ucp2、ucp3基因的mRNA在以上各组织中的表达。结果表明,ucp1、ucp2、ucp3基因...