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[期刊] 中国农业科学
[作者]
张国升 左敬 甘瑞 朱峰伟 孙燕 王鲜忠 张家骅
【目的】确定FSH和雌激素联合作用是否可通过ERK1/2级联调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中Skp2的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用Western blotting和实时荧光定量PCR检测Skp2蛋白、mRNA的表达。【结果】FSH(50 ng.mL-1)和17β-雌二醇(10-9 mol.L-1)联合作用时以时间依赖的方式促进了Skp2蛋白和mRNA的表达(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
左敬 甘瑞 张国升 张姣姣 朱峰伟 孙燕 王鲜忠 张家骅
【目的】确定雌激素是否通过雌激素受体以及在cAMP-细胞外调节的蛋白激酶(ERK1/2)调节培养条件下,未成熟仔猪睾丸支持细胞中cyclinA2 mRNA的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加雌激素受体抑制剂以及各种信号通路的抑制剂,应用实时荧光定量PCR检测cyclinA2 mRNA的相对表达量。【结果】17beta-雌二醇(10-9 mol.L-1)以时间依赖的方式促进了cyclinA2 mRNA的表达(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张姣姣 王怡 张会琼 孙思 孙燕 王鲜忠 张家骅
【目的】确定FSH是否能调节支持细胞cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达及可能的机制。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用实时荧光定量PCR检测cyclinD1 mRNA和cyclin E1 mRNA的相对表达量。【结果】不同浓度的FSH(0—100 ng.mL-1)均可促进cyclin D1 mRNA和cyclin E1 mRNA的表达(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
包图雅 曹贵方 凃勇 杜晨光
【目的】探讨17β-雌二醇(E2)上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2表达的可能信号通路。【方法】分离培养绵羊输卵管上皮细胞,将第2代输卵管上皮细胞分为E2(10-8 mol/L)组、雌激素受体拮抗剂ICI182780(10-7mol/L)组、PKA阻断剂KT-5720(1μmol/L)组、PKC阻断剂H-7(50μmol/L)组、NF-κB阻断剂PDTC(50μmol/L)组及空白对照(Control)组,在不同阻断剂组加入各自阻断剂干预绵羊输卵管上皮细胞1h后,在各阻断剂组和E2组中再加入10-8 mol/L 17β-雌二醇培养6h,然后采用实时荧光定量RT-PCR方法检测各组SBD-2mRN...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王霞 邬静
以原代分离培养仔猪睾丸支持细胞为模型,经含不同浓度(0、2.5、5、10、20、40、80、160μmol/L)乙酸棉酚或40μmol/L乙酸棉酚加800μmol/L的乙酰半胱氨酸(NAC)的培养基培养24 h后,检测细胞增殖率、细胞内活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性、培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活性及细胞凋亡情况,研究棉酚对仔猪睾丸支持细胞的氧化应激及细胞凋亡的影响。结果显示:棉酚呈浓度依赖性抑制仔猪睾丸支持细胞增殖率,棉酚浓度大于等于10μmol/L时,细胞增殖率极显著降低;棉酚造成细胞内ROS水平显著升高、SOD活性显著降低、MDA含量升高及培养基中LDH活性升高;NAC显著抑制棉酚诱导的细胞内ROS水平升高、细胞增殖抑制及细胞凋亡。表明棉酚能诱导仔猪睾丸支持细胞凋亡,这可能与过量ROS生成而造成细胞氧化应激有关。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨桂香 彭险峰 曾振灵 陈杖榴
根据雌激素类化合物在机体内的作用机理,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因构建了4个启动子不同的表达载体(pERE-SV-EGFP,pERE-TA-EGFP,pERE-CMV-EGFP,pERE-TK-EGFP)。以这些表达载体瞬时转染MCF-7细胞,报告基因的基础表达与启动子的强度相关。以17β-雌二醇(E2,10-9mol·L-1)诱导表达载体瞬时转染的MCF-7细胞,发现在表达载体pERE-TA-EGFP、pERE-TK-EGFP、pERE-SV-EGFP转染的MCF-7细胞中,E2能诱导2倍以上的报告基因的表达。这表明在这些瞬时表达系统中报告基因的表达是雌激素依赖性的,因此这...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
上官宵兆 刘美玲 毛颖睿 王晓强 王雅昱 汪桂玲 李家乐
本实验通过RACE技术、实时荧光定量（qRT-PCR）技术，原位杂交和17β-雌二醇注射来探究17β-HSD11基因在三角帆蚌性腺发育和性激素合成中的表达特性和作用。结果显示17β-HSD11基因的cDNA全长为1134 bp， 其中5' UTR 40 bp，开放阅读框（ORF）923 bp，3' UTR 171 bp，编码307个氨基酸。17β-HSD11基因在肝胰腺、性腺中表达量较高，且卵巢极显著高于精巢（P < 0.01）。原位杂交结果显示雌性三角帆蚌卵母细胞、滤泡膜和卵膜上均存在杂交信号。注射不同浓度17β-雌二醇之后发现17β-HSD11基因在雌雄性腺中的相对表达量均被抑制，其中低浓度注射后，17β-HSD11基因的表达量在卵巢中下降33.38%，在精巢中下降37.74%。而高浓度注射后，17β-HSD11基因的表达量在卵巢中下降57.78%，在精巢中下降61.31%。由此推测17β-HSD11可能与三角帆蚌性腺发育和雌激素合成相关。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王继英 王彦平 郭建凤 王怀中 林松 张印 武英
【目的】中国地方猪种在抗病性和免疫力方面优于国外猪种,但是对中外猪种抗病力差异的遗传基础和免疫机理却了解甚少。有推测不同品种猪对疾病的抵抗力不同可能在细胞因子和受体的表达水平上有所反映。本研究以抗病力强的大蒲莲和抗病力相对较弱的长白猪的断奶仔猪为研究对象,对6个具有重要功能的细胞因子(促炎症细胞因子(IL8和TNFα),抗炎症细胞因子(IL10),干扰素调节因子(IRF3)和干扰素(IFNA和IFNG))和1个最具代表性的模式识别受体(TLR4)基因在大蒲莲和长白仔猪群体外周血液中的基因表达量进行检测,并对各基因进行品种和母猪效应分析,为了解中外不同猪种的免疫水平奠定基础。【方法】采集大蒲莲(...
[期刊] 草业科学
[作者]
朱爱文 刘海霞 德庆卓嘎 韩大勇 格桑加措 闫伟 平措班旦 朱戈辉
热休克蛋白A2 (HSPA2)是热休克蛋白HSP70家族重要成员，能够促进睾丸支持细胞增殖；精子发生相关基因6 (SPATA6)能够调控肌球蛋白合成的微丝运输系统，影响精子细胞骨架形成。在雄性哺乳动物生殖过程中，两者均起重要作用。为研究HSPA2和SPATA6在雄性彭波半细毛羊生殖过程中的表达规律和细胞定位，以不同年龄阶段(3月龄、12月龄和3岁龄)彭波半细毛羊睾丸组织为研究对象，运用实时荧光定量PCR (real time quantitative PCR,qRT-PCR)、Western blot和免疫组织化学染色法(IHC)从转录和翻译水平检测了HSPA2和SPATA6在不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的表达水平和分布模式，分析预测HSPA2和SPATA6在彭波半细毛羊睾丸发育和精子发生过程中的调控作用。结果表明：12月龄和3岁龄彭波半细毛羊睾丸组织中HSPA2 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄(P <0.01);12月龄SPATA6 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄(P <0.01)，显著高于3岁龄(P <0.05)。不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的支持细胞和间质细胞中HSPA2和SPATA6蛋白均有分布。初步推断，HSPA2和SPATA6的表达水平变化在调控彭波半细毛羊精子发生过程和促进精子成熟中具有重要作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
刘青 魏华 张高峰 吴楠
研究了环境激素壬基酚(4-NP)在雌鲫体内的对雌激素受体的表达和雌二醇水平的影响。雌鲫腹腔注射1、50、100 mg.kg-1的4-NP或1 mg.kg-1的E2,分别在24 h和48 h提取肝脏RNA用RT-PCR查看α型雌激素受体(ER-α)和CYP1A的表达情况和提取血清用荧光免疫法测定E2浓度。结果表明:1 mg.kg-1E2处理组的ER表达在24 h和48 h有显著性增加(P<0.05),但...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张元鹏 杨占娜 杨利 李兰 于晓明 杜露平 陈瑾 侯立婷 乔绪稳 侯继波 郑其升
[目的]本试验旨在分析乙型脑炎病毒(JEV)感染猪睾丸(ST)细胞和正常ST细胞miRNA差异表达谱,以探索miRNA在JEV感染过程中的作用及其调控机制。[方法]分别提取正常ST细胞和JEV感染8 h后的ST细胞总RNA,利用高通量测序技术检测分析ST细胞中的miRNA表达谱并进行差异分析。使用miRanda软件对表达差异显著miRNA的靶基因进行预测并对靶基因进行GO分析。选取6个显著性差异表达的miRNA通过RT-qPCR进行验证。[结果]与正常ST细胞相比,JEV感染后的ST细胞有112个差异表达miRNA,其中80个miRNA上调表达,32个miRNA下调表达。经RT-qPCR方法验证6个差异表达的miRNA结果与高通量测序结果一致。差异表达miRNA靶基因的生物学功能相对集中在细胞代谢、细胞黏附等生物过程。[结论]检测和分析JEV感染后猪睾丸细胞的miRNA表达谱,获得了大量的与JEV感染相关的miRNA表达谱数据,为揭示JEV感染生殖系统致病机制提供了有效的数据和理论基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
蔡沛蓉 冯楠楠 郑豪 邹辉 顾建红 刘学忠 袁燕 刘宗平 卞建春
[目的]本文旨在探讨玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对睾丸支持细胞(Sertoli cells,SC)乳酸产生的影响,[方法]以Wistar大鼠SC为研究材料,采用不同浓度的ZEA(0、0.1、1、10、20、30μmol·L~(-1))处理24 h,利用乳酸脱氢酶(LDH)释放检测试剂盒检测ZEA对SC的毒性作用;乳酸测试盒检测ZEA对SC内、外乳酸产生的影响;丙酮酸测试盒检测ZEA对SC内丙酮酸产生的影响; Western blot检测SC乳酸代谢通路相关蛋白的表达;免疫荧光法检测乳酸产生关键酶LDH荧光强度的改变。[结果]随着ZEA浓度的增加,ZEA对SC的细胞毒性逐渐增大(P<0.01);与对照组相比,染毒组细胞内、外乳酸含量和细胞内的丙酮酸含量显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01),葡萄跨膜糖转运蛋白1(GLUT1)和乳酸脱氢酶(LDH)在1、10、20、30μmol·L~(-1)ZEA染毒组的蛋白表达量极显著降低(P<0.01);单羧酸转运蛋白4(MCT4)在30μmol·L~(-1)ZEA染毒组的蛋白表达量呈显著降低(P<0.05);免疫荧光检测结果表明,LDH的荧光强度随着染毒浓度增加而降低,与对照组相比,10、20、30μmol·L~(-1)ZEA染毒组细胞内的蛋白表达量均极显著下降(P<0.01)。[结论]ZEA可以抑制SC乳酸产生,干扰SC对生殖细胞的能量供应,进而对雄性生殖功能产生损伤。
关键词：
玉米赤霉烯酮 睾丸支持细胞 乳酸 丙酮酸
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
李惠云 刘鹏威 魏华
运用定量PCR技术和免疫荧光法研究了内分泌干扰物双酚A(BPA)对雌鲫的雌激素效应。以不同浓度的BPA[质量分数分别为1 mg/kg,50 mg/kg,100 mg/kg(注射剂量/鱼体重)]对雌鲫进行腹腔注射,然后分别于24 h和48 h检测肝脏中的α型雌激素受体(ERα)mRNA表达以及血清雌二醇(E2)水平。结果表明1 mg/kg和50 mg/kg BPA处理组ERαmRNA水平与对照组相比在48 h内均没有明显变化;100 mg/kg BPA处理组ERαmRNA水平在注射后24 h显著上调(P
关键词：
内分泌干扰物 双酚A α型雌激素受体
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李发弟 夏东 陈杰 赵茹茜
随机选取0、3、20、30、90、120和180日龄二花脸公猪和大白公猪各4头,用相对定量RT-PCR法研究睾丸组织中生长激素受体(GHR)基因表达的发育性变化。结果表明,二花脸猪与大白猪睾丸GHR mRNA表达的发育模式不同,二花脸猪GHR mRNA相对表达量从0到30日龄逐渐上升,在90和120日龄呈阶段性降低(P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
齐佳欣 钟秋 刘芮伶 郑健 李昱辰 杨倩
[目的] 本研究旨在探究CXC趋化因子配体17（C-X-C motif chemokine ligand 17，CXCL17）对巨噬细胞的趋化作用并解析其涉及的分子机制。[方法] 首先，本研究构建表达猪CXCL17蛋白的重组菌，该菌经IPTG诱导后高效的表达CXCL17蛋白，并主要以包涵体形式存在；包涵体经过变性、纯化和复性获得重组蛋白，利用SDS-PAGE和Western blot对纯化的CXCL17蛋白进行验证。其次，通过CCK-8法筛选CXCL17蛋白的最佳浓度范围，并以该浓度设置浓度梯度处理猪巨噬细胞，通过Transwell试验检测CXCL17对巨噬细胞的趋化活性；最后，通过免疫荧光和Western blot检测细胞微丝骨架的变化及相关通路的激活情况，以揭示CXCL17趋化巨噬细胞迁移的作用机制。[结果] 研究发现，重组菌在IPTG终浓度为1.0 mmol·L~(-1)，37℃诱导表达7 h的条件下，能够获得高表达量的重组猪CXCL17蛋白。该蛋白经纯化后纯度可高达95%。使用该重组猪CXCL17蛋白可以剂量依赖的诱导猪巨噬细胞迁移，其主要的机制为通过激活微丝骨架下游的LIMK/Cofilin信号通路引起细胞微丝骨架重排，促进细胞微丝骨架的解聚、聚合，从而有利于巨噬细胞的迁移。[结论] 本研究制备了重组猪CXCL17蛋白，并探究了CXCL17调控细胞微丝骨架诱导猪巨噬细胞迁移的分子机制，为CXCL17作为黏膜免疫增强剂提供理论依据。
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