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[期刊] 中国水产科学
[作者]
李红霞 俞菊华 李义 徐跑
分别使用5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、75μg/mL和100μg/mL剂量的CpG体外处理中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血细胞,检测了胞内外酚氧化酶(phenoloxidase,PO)活性的相对变化,进一步采用Real Time PCR方法分析了胞内酚氧化酶原(prophenoloxidase,proPO)基因的相对表达情况。结果表明,25μg/mL剂量的CpG ODN-1670可以有效促进酚氧化酶原的表达以及增强胞内外酚氧化酶活性(P<0.05),ODN-1670增强酚氧化酶活性的途径是经由促进胞内酚氧化酶原的表达,合成新的酚氧化酶原颗粒实现的。此外,本研...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李红霞 李义 俞菊华 徐跑
细菌DNA和人工合成的含CpG基序的未甲基化寡脱氧核苷酸(ODNs)均能刺激机体的免疫反应。本研究将鱼的免疫刺激剂寡脱氧核苷酸序列ODN-1670(含1个CpG基序)和ODN-R(含1个反向CpG基序,即GpC)按1μg/kg、5μg/kg、25μg/kg的剂量对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)进行体腔注射,同时以注射0.1mL生理盐水组与未进行任何处理的空白组作为对照。在注射前(0d)和注射后第1天、3天、5天、8天对血细胞呼吸爆发活性(O2-产量)、过氧化物酶(POD)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性进行测定。结果显示,注射25μg/kgODN-1670能显著增强实验蟹...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱鸿飞 朱建中 李光富 卢春 邵国青 范红结 陈溥言
分别用有丝分裂原和CpG寡脱氧核苷酸 (CpGODN)对SPF鸡全血 ,经低速离心分离的外周血单个核细胞(PBMC)和脾脏细胞 ,用淋巴细胞分离液分离的PBMC和脾脏细胞进行刺激 ,用3 H TdR掺入法测定并比较上述鸡免疫细胞在不同培养温度和细胞浓度下的转化效果 ,从而建立了适用于大批量筛选对鸡具有免疫刺激活性CpGODN的淋巴细胞转化方法。进一步用该方法筛选自行设计合成的 38条ODN。结果表明 ,用低速离心法分离的鸡PBMC ,在细胞含量为10 7mL-1、 37℃、 5 %CO2 条件下 ,经CpGODN刺激 6 4～ 6 6h后 ,可以得到稳定的高效转化 ;不含CpG模体的ODN不具...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
荆强 苗晋锋 顾蓓蓓 邓月娥 邹思湘
选择同处于泌乳初期的睢宁白山羊6头,产后第5、8天分别向左、右乳区灌注等体积的灭菌PBS和10μg.kg-1CpG-ODN(cytosine-phosphate-guanosine dinucleotides),第9天于左、右乳区经乳导管灌注大肠杆菌(2×109CFU.mL-1)和金黄色葡萄球菌(2×109CFU.mL-1)混合菌液3 mL。分别于灌注细菌前0 h,灌注后8、16、24、48和72 h采集乳样,动态监测乳中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)和髓过氧化物酶(MPO)的活力及乳铁蛋白含量变化。灌注72 h后处死动物,取乳腺组织进行组织学观察。结果显示:灌注细菌后72 ...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
温建新 李俊 周顺 任慧英 刘文华 邹玲 徐文 牛钟相 王金宝 吴家强
【目的】提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSVORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。【方法】经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSVGP5蛋白。免疫SPF小鼠,检测鼠的特异性抗体滴度、脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。【结果】本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的体液免疫与细胞免疫。【结论】CpG-ODN可提高PRRSV基因疫苗的免疫效果。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
汪龙梅 朱哲坤 王栋 刘玉兰 付书林 邓昌彦 郭玲
以梅山猪-大白猪正反交为模型,以65日龄和100日龄的胚胎心脏组织为研究材料,对MKRN3基因启动子区CpG岛进行预测,根据预测的CpG岛设计引物,采用重亚硫酸盐测序法(BSP法),分析MKRN3基因启动子区CpG岛在胚胎心脏组织的甲基化程度。结果显示:对于65日龄胚胎,猪MKRN3基因启动子区CpG岛在大白×梅山和梅山×大白杂交后代的胚胎心脏组织中均表现高度甲基化(75.6%、76.4%);对于100日龄的胚胎,大白×梅山杂交后代的胚胎心脏组织表现高度甲基化(80%),而梅山×大白杂交后代的胚胎心脏组织呈现低甲基化(35.6%)。由此可见,猪MKRN3基因启动子区CpG岛的甲基化模式随着正反交、胚胎发育时期不同而呈现出一定变化,即在胚胎发育65日龄时,正反交子代均具有高度甲基化;而在胚胎发育至100日龄,正交子代呈现高度甲基化,反交子代呈现低甲基化,说明在胚胎发育晚期父本或母本等位基因可能会发生明显的去甲基化。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
衣启麟 刘瑞 孙瑞 王玲玲 刘聪辉 迟振明 宋林生
用添加CpG寡聚核苷酸(CpG ODN)和表面展示VP28的解脂耶罗维亚酵母(VP28-yl)的饵料投喂凡纳滨对虾,进行田间中试实验。投喂30 d后进行WSSV感染实验,评估其对凡纳滨对虾的免疫保护作用。投喂实验结束后,CpG ODN投喂组对虾的相对增重率达到(65.8±7.8)%(P<0.05)。而在VP...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
衣启麟 刘瑞 孙瑞 王玲玲 刘聪辉 迟振明 宋林生
用添加ＣｐＧ寡聚核苷酸（ＣｐＧ ＯＤＮ）和表面展示Ｖｐ２８的解脂耶罗维亚酵母（Ｖｐ２８－ｙｌ）的饵料投喂凡纳滨对虾，进行田间中试实验。投喂３０ Ｄ后进行ＷＳＳＶ感染实验，评估其对凡纳滨对虾的免疫保护作用。投喂实验结束后，ＣｐＧ ＯＤＮ投喂组对虾的相对增重率达到（６５．８±７．８）％（ｐ＜０．０５）。而在Ｖｐ．．．
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