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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
杨笑星 佟广香 闫婷 董乐 孙志鹏 徐欢 唐国盘 匡友谊
为阐明cilp基因在斑马鱼椎骨和肌间骨发育中的作用，利用CRISPR/Cas9建立了斑马鱼cilp基因敲除纯合突变系（cilp~(-/-)），对其进行了骨骼表型的观察，并进一步采用qRT-PCR分析了14个骨骼发育相关基因在突变体胚胎发育阶段和成鱼骨骼中的表达水平变化。结果显示，与野生型斑马鱼相比，90 dph（days post hatched）cilp~(-/-)斑马鱼的肌间骨数量显著减少了10.27%（P<0.05），而肌间骨的长度无明显变化；同时突变体斑马鱼中椎骨发生异常融合及髓棘缺失。qRT-PCR结果显示，与野生型相比，col1a1a、sp7、smad4a和smad5基因在胚胎发育的整个时期都存在显著的差异（P<0.01）；在突变体成鱼尾部骨骼组织中bmp2a、bmp2b、smad5、sp7、runx2a、runx2b和bglap基因的表达量均显著低于野生型，表明cilp基因敲除导致了BMPs和SMADs家族基因的表达水平下降，并下调了下游的成骨细胞发育相关基因的表达量，推测cilp功能缺失可能通过抑制BMPs信号通路，影响成骨细胞分化和骨形成，从而导致了肌间骨数量的减少和脊椎骨异常融合。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄伟卿 宋炜 刘铮 李婷婷 邵逸臻 陈思仪 张艺 杨俊帆
为探究大黄鱼（Larimichthys crocea）仔、稚鱼期的脊椎骨及附肢骨生长发育规律，采用软骨-硬骨双染色法对大黄鱼仔、稚鱼（1～30日龄）各发育时期的脊椎骨及附肢骨进行观察。结果表明：大黄鱼仔、稚鱼脊索呈管状，于2～5日龄仔鱼有明显分节现象，9日龄仔鱼髓弓开始分化发育，13日龄仔鱼鱼脉弓开始分化发育，脊索分节完全，17日龄仔鱼背肋和腹肋变得清晰，髓棘和脉棘也分别由髓弓和脉弓末梢延长完全形成，18日龄稚鱼脊椎骨开始发生骨化，直至27日龄稚鱼骨化完全。大黄鱼仔、稚鱼奇鳍以尾鳍、臀鳍、背鳍的先后顺序形成。尾鳍在7日龄仔鱼开始发育，第1尾下骨形成，直至13日龄仔鱼开始出现尾下骨愈合现象，尾鳍条出现，15日龄仔鱼尾上骨开始发育，直至19日龄稚鱼尾杆骨、尾上骨和尾下骨均已形成，尾鳍鳍条逐渐清晰，第3、4尾下骨之间间隙将尾鳍分为两个部分，尾鳍形态初步发育完全，27～30日龄稚鱼尾杆骨首先发生开始骨化，其次尾下骨及鳍条开始骨化；14日龄仔鱼时出现8个臀鳍支鳍骨，17日龄仔鱼鳍条长出8条，20日龄稚鱼出现硬棘分化，直至25日龄稚鱼臀鳍发育完全，鳍条和硬棘骨化完全；17日龄仔鱼时体背出现支鳍骨1行，背鳍开始发育，至20日龄稚鱼时，第1背鳍10根硬棘均出现，第二背鳍鳍条基本出现，21～25日龄稚鱼期间，硬棘从前向后逐渐骨化，鳍条发育完全。在大黄鱼仔、稚鱼骨骼发育过程中出现了脊骨前凸，椎体融合，脉棘分叉和脉棘冗余等骨骼发育畸形的现象。上述结果为丰富大黄鱼发育生物学理论，为鱼类骨骼异常发育治疗提供理论基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨建 佟广香 郑先虎 孙志鹏 吕伟华 孙效文 匡友谊
为阐明肌间刺缺失对斑马鱼(Danio rerio)胚胎发育时期肌肉发育的影响,采用qRT-PCR的方法,检测分析了斑马鱼不同肌间刺表型间5个肌肉特异性基因(mef2、myf5、myod、myog和sox6)在囊胚期(3hpf,hourspost fertilization)、原肠胚期(6 hpf)、体节期(12 hpf)、咽囊期(24 hpf)和孵化期(72 hpf)5个发育时期的表达情况,对比分析了肌间刺缺失对斑马鱼胚胎发育过程中肌肉发育特异性基因的时序表达差异和肌肉发育的影响,以及对受精率、孵化率和畸形率的影响。结果显示, 5个特异性基因在肌间刺缺失突变型与野生型斑马鱼各发育时期的表达量无显著性差异(P>0.05)。其中,myf5、myod基因在原肠胚期表达量升高,在体节期和咽囊期开始逐步下降;mef2、myog和sox6基因在囊胚期和原肠胚期表达量很低,在体节期和咽囊期表达量迅速升高,并在孵化期开始下降。此外,受精率、孵化率和畸形率的统计结果显示,肌间刺突变型与野生型间亦无显著性差异(P>0.05)。综上,推测肌间刺的缺失对斑马鱼胚胎发育及胚胎发育过程中肌肉的发育没有影响。
关键词：
肌间刺 斑马鱼 胚胎发育 肌肉
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
罗蕾 陈阿琴 吕为群
促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone,CRH)、尾加压素Ⅰ(UrotensinⅠ,UⅠ)和尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)广泛存在于脊椎动物中。在鱼类中,它们在渗透压调节、繁殖、营养代谢以及应激反应中发挥着重要作用。本研究中,通过收集0、1.5、3.7、5.3、8、10、16、24、48、72、96、120和144 hpf(hours post-fertilization)的斑马鱼早期发育样品,运用荧光定量PCR技术进行检测发现CRH、UⅠ、UⅡα和UⅡβmRNA从0 hpf开始存在表达,而且CRH、UⅠ、UⅡα和UⅡβ的表达量随发育...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
顾叶丹 王冰琦 王宏杰 胡沛男 祖尧
斑马鱼转录因子hoxb4a在心脏中的功能未见研究报道，为了阐明hoxb4a在心脏发育中的作用，本文利用基因沉默技术和mRNA基因过表达方法，分别在斑马鱼中敲降和过表达hoxb4a基因，发现抑制或过表达hoxb4a的胚胎在第3天出现心包腔肿大、心脏环化异常的表型。通过原位杂交技术对野生型及hoxb4a敲降胚胎进行心肌特异基因的原位杂交染色比较，测量结果显示hoxb4a敲降胚胎的心脏环化角度增大（P<0.05）。本研究表明斑马鱼hoxb4a沉默会导致心脏结构畸形、环化异常，并且调控了早期心脏发育基因的变化。本研究发现了hoxb4a在斑马鱼早期心脏发育中发挥作用，并通过原位杂交及qPCR结果初步探索了hoxb4a调控心脏腔室的分化及心脏环化过程，深化了人们对心脏发育调控网络的认识。
关键词：
hoxb4a 基因敲降 心脏发育 斑马鱼
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吕海英 杨启文 殷海成 宋平 张训蒲
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
彭家宝 汪紫嫣 杨志刚 陈阿琴
Sirtuins （SIRT）是一类NAD+依赖性Ⅲ类去乙酰化酶家族，广泛参与生物体各项生理活动，特别是在卵巢发育方面发挥着重要作用。本研究运用生物信息学方法系统分析斑马鱼（Danio rerio） SIRT家族基因的染色体分布、基因结构、氨基酸序列、蛋白基序和保守结构域、理化性质、二级结构和三级结构及系统进化关系，并探究在卵泡不同发育时期的表达变化。结果显示，斑马鱼8个SIRT基因分布于斑马鱼的8条染色体上，序列长短不一，最长为SIRT6 （140 265 bp），最短为SIRT4 （7 101 bp），编码区为3～14个不等。斑马鱼SIRT氨基酸序列相似度较低，但都具有Sir2保守结构域和保守基序。斑马鱼SIRT蛋白均为亲水性蛋白，除SIRT3外，均为不稳定蛋白。亚细胞定位预测显示，斑马鱼SIRT家族蛋白主要定位于细胞质和细胞核。系统进化分析表明，斑马鱼SIRT1、SIRT2、SIRT3.2和SIRT4与金鱼（Carassius auratus）、青鳉（Oryzias latipes）具有共线性关系。蛋白互作网络（PPI）预测发现，SIRT蛋白与雌激素受体（ESR1）、叉头盒转录因子家族（FOXOs）、热休克蛋白家族（HSPs）、超氧化物歧化酶家族（SODs）等具有相互作用。实时荧光定量PCR分析显示，在卵泡发育过程中，SIRT1和SIRT2主要在卵黄发生中期（MV）表达；SIRT3和SIRT4主要在充分生长未成熟期（FG）表达；SIRT3.2、SIRT5、SIRT6和SIRT7主要在成熟期（GVBD）表达。本研究阐明了斑马鱼SIRT基因家族进化发育关系、结构功能特征以及在卵泡发育过程中的表达规律，可为进一步研究SIRT家族在鱼类卵泡发育过程中的作用提供参考。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
彭家宝 汪紫嫣 杨志刚 陈阿琴
Sirtuins （SIRT）是一类NAD+依赖性Ⅲ类去乙酰化酶家族，广泛参与生物体各项生理活动，特别是在卵巢发育方面发挥着重要作用。本研究运用生物信息学方法系统分析斑马鱼（Danio rerio） SIRT家族基因的染色体分布、基因结构、氨基酸序列、蛋白基序和保守结构域、理化性质、二级结构和三级结构及系统进化关系，并探究在卵泡不同发育时期的表达变化。结果显示，斑马鱼8个SIRT基因分布于斑马鱼的8条染色体上，序列长短不一，最长为SIRT6 （140 265 bp），最短为SIRT4 （7 101 bp），编码区为3～14个不等。斑马鱼SIRT氨基酸序列相似度较低，但都具有Sir2保守结构域和保守基序。斑马鱼SIRT蛋白均为亲水性蛋白，除SIRT3外，均为不稳定蛋白。亚细胞定位预测显示，斑马鱼SIRT家族蛋白主要定位于细胞质和细胞核。系统进化分析表明，斑马鱼SIRT1、SIRT2、SIRT3.2和SIRT4与金鱼（Carassius auratus）、青鳉（Oryzias latipes）具有共线性关系。蛋白互作网络（PPI）预测发现，SIRT蛋白与雌激素受体（ESR1）、叉头盒转录因子家族（FOXOs）、热休克蛋白家族（HSPs）、超氧化物歧化酶家族（SODs）等具有相互作用。实时荧光定量PCR分析显示，在卵泡发育过程中，SIRT1和SIRT2主要在卵黄发生中期（MV）表达；SIRT3和SIRT4主要在充分生长未成熟期（FG）表达；SIRT3.2、SIRT5、SIRT6和SIRT7主要在成熟期（GVBD）表达。本研究阐明了斑马鱼SIRT基因家族进化发育关系、结构功能特征以及在卵泡发育过程中的表达规律，可为进一步研究SIRT家族在鱼类卵泡发育过程中的作用提供参考。
[期刊] 水产学报
[作者]
陈丽莉 邹立军 熊振 刘姣 廖高鹏 刘文彬 刘少军 肖亚梅 李万程
JNKs是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族重要成员,参与应激反应和动物体轴的构建。为了进一步了解JNK家族在动物发育中的功能,首次分离和克隆了金鱼jnk3基因,研究了jnk3在金鱼和斑马鱼组织特异性和胚胎发育特异性表达状况。金鱼jnk3基因cDNA总长1 794 bp,其中阅读框1 293 bp,编码430个氨基酸。对jnk3基因序列及其推导的氨基酸序列进行同源性分析,结果显示,jnk3基因在脊椎动物较为保守,金鱼jnk3基因核苷酸序列与斑马鱼、人的同源性分别为94.1%和80.7%,金鱼jnk3基因氨基酸序列与斑马鱼、人的同源性分别为99.7%和93.4%。jnk3基因在鱼类成体中的表达存...
关键词：
金鱼 斑马鱼 JNK3 胚胎发育
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
何雪 王雨果 郑奕 黄亚娟 鲍宝龙
电压门控钠离子通道对于脊椎动物脑神经起始、传播动作电位具有重要作用。为了解斑马鱼电压门控钠离子通道基因scn1Laa在脑神经中的作用，通过CRISPR/Cas9基因编辑技术，首次构建了可稳定遗传的生长没有受明显影响的scn1Laa缺陷型（scn1Laa~(-/-)）斑马鱼家系。相比野生型，5dpf（dayspost-fertilization，受精后5天）scn1Laa缺陷型斑马鱼兴奋抑制性神经元（氨基丁酸类神经元）表达相对增加，兴奋类神经元（谷氨酸能类神经元）和成熟神经元显著减少，脑部细胞增殖也显著减少。受精后5d和90d的 scn1Laa缺陷型斑马鱼的运动较同时期野生型斑马鱼更为活跃，受精后90d的 scn1Laa缺陷型斑马鱼的运动具有明显的爆发性。以上结果表明，scn1laa缺失导致兴奋类神经元（谷氨酸能类神经元）以及神经细胞增殖减少，影响脑周围神经放电，导致运动神经调节障碍，出现运动行为异常活跃。即电压门控钠离子通道基因scn1Laa参与斑马鱼脑神经发育和生长，间接参与运动行为调节。同时本文也为进一步探究电压门控钠离子通道在脑神经中的作用奠定基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
梁秋燕 谢勇平 方展强
研究了重金属Zn2+和Cd2+对斑马鱼(Danio rerio)早期胚胎发育阶段的单一与联合毒性效应。分别用不同质量浓度的Zn2+和Cd2+对受精后24 h(24 hpf)的受精卵进行染毒实验,统计了斑马鱼胚胎48 hpf的卵凝结和心律,72hpf的卵凝结、孵化率和畸形率等指标。结果显示,Zn2+和Cd2+对斑马鱼胚胎各不同发育阶段的影响不同,镉的毒性比锌大。斑马鱼胚胎对Zn2+和Cd2+最敏感的毒理学终点均为72 hpf。Zn2+和Cd2+对斑马鱼胚胎72 hpf的发育毒性比48 hpf的发育毒性大。Zn2+和Cd2+在毒性单位配比为1︰1时,对斑马鱼胚胎的联合毒性趋向于毒性剧增的协同作用。...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
闫永健 赵海滨 郭炳冉 王雯雯 刘洁 罗在礼 时永香
为研究UVB辐射对斑马鱼(Danio rerio)早期胚胎发育的影响,采用波长302nm,强度分别为120、240、310、420μW/cm2的UVB照射斑马鱼早期发育阶段的胚胎,照射时间分别为1、3、5、10min,用于研究UVB照射对形态学及DNA损伤的影响;将原肠期、体节期胚胎及孵化后2d仔鱼经UVB照射,设立未经UVB照射组为对照组,观察记录UVB照射后胚胎发育情况,统计死亡率、畸形率;应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术检测不同UVB照射条件对DNA损伤的影响。结果表明:(1)UVB照射对斑马鱼早期胚胎发育形态有明显的影响,能够造成尾部弯曲、围心腔扩大、脊柱扭曲等多种畸形甚至死亡;(2...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
葛玲玲 宋佳坤 范纯新
鱼类侧线系统源自胚胎期的侧线基板,侧线基板的特化受到多种信号的综合作用。利用转基因斑马鱼hsp:wnt8a-egfp和hsp:dkk1-egfp,增强或抑制Wnt信号,通过YO-PRO-1染色和毛细胞计数,研究斑马鱼中Wnt信号对侧线系统发育的影响。热激诱导Dkk1过表达后,斑马鱼侧线系统的神经丘不能形成。碱性磷酸酶染色和整体原位杂交结果表明:Wnt信号是神经丘毛细胞前体细胞以及侧线基板标记基因Eya1和Six2b表达所必需的。综上结果:Wnt信号可能通过调控侧线基板形成影响斑马鱼的侧线发育。
关键词：
斑马鱼 侧线基板 毛细胞 Wnt信号
[期刊] 海洋渔业
[作者]
曹小龙 祖尧 张庆华 贾亮 李伟明
鱼类在遭受捕食后，受损的表皮会释放大量的化学信号物质，同种其它个体嗅到这些化学信号后会作出躲避反应，称为报警反应（ａｌａｒｍ ｒｅｓｐｏｎｓｅ），报警反应通常出现在一定的发育阶段。采用斑马鱼（Ｄｉｎｉｏ ｒｅｒｉｏ）同种碾碎提取物（处理组，质量浓度为１０－６ｇ·ｌ－１）作为报警物质，并设３个对照组：罗非鱼碾碎提取物组、双蒸水组、空白对照组，通过暴露处理实验，检测沉底累积时间（ｔｉｍｅ ｏｆ ｂｏｔｔｏｍ）、呆滞累积时间（ｔｉｍｅ ｏｆ ｆｒｅｅｚｉｎｇ）两项指标，研究了２８ Ｄｐｆ（Ｄａｙｓ ｐｏｓｔ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，受精后天数）、３５ Ｄｐｆ、４２ Ｄｐｆ ３个不同发育时期幼鱼的．．．
关键词：
斑马鱼 报警反应 发育 栖息地
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