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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张俞 史兴娟
[目的]本试验旨在研究Cep70的细胞定位及其在微管聚合中的调节作用。[方法]利用原核表达质粒p MALp2TCep70,在细菌中诱导表达融合蛋白MBP-Cep70。用融合蛋白免疫小鼠,获得特异性的抗Cep70抗体。首先用该抗体对细胞进行免疫荧光显微分析,检测Cep70在细胞内的定位,再利用荧光标记的微管体外组装试剂盒研究Cep70在体外微管聚合中对微管形态的调节,最后利用微管混浊度试验,验证Cep70对微管聚合的功能影响。[结果]通过从细菌中诱导纯化蛋白,获得了大量高纯度的融合蛋白MBP-Cep70。纯
关键词：
Cep70 抗体 免疫荧光 微管聚合
[期刊] 水产学报
[作者]
孟凡娟 张广成 尹文娟 王丽燕 孙金生
昆虫方面研究提示自噬在病毒侵染增殖中发挥了重要作用,而虾类自噬研究报道极少,了解虾类细胞自噬将为虾病害免疫研究开辟新的思路。自噬相关蛋白LC3是自噬过程的标志性蛋白,存在于自噬体膜上,前期生物信息学分析发现,红螯光壳螯虾自噬相关蛋白LC3(CqLC3)和微管蛋白α-tubulin (Cqα-tubulin)具有互作关系。为深入揭示红螯光壳螯虾细胞自噬体的运输途径,本实验通过体外重组构建了蛋白表达载体pET-HISCqLC3和pET-GST-Cqα-tubulin,并诱导表达,利用亲和层析法分别纯化获得HIS和GST融合表达蛋白HIS-CqLC3和GST-Cqα-tubulin,利用GST pull-down实验验证发现,CqLC3与Cqα-tubulin存在相互作用。微管抑制剂长春新碱解聚微管后,利用MDC染色法检测自噬体发现,红螯光壳螯虾细胞微管解聚破坏后自噬体积累增多,细胞不能正常完成自噬反应,因此可知,红螯光壳螯虾细胞自噬体可通过CqLC3与微管相互作用,微管在红螯光壳螯虾细胞自噬过程中对自噬体的运输具有重要作用。本文首次揭示了虾类细胞自噬反应中自噬体的运输途径,研究结果为虾类细胞自噬的研究奠定了基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张聪 徐建强 于俊杰 陈长军 王建新 周明国
分别扩增了禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)对多菌灵(MBC)敏感菌株(MBCS)的β1-微管蛋白基因(β1-S)和β2-微管蛋白基因(β2-S),及多菌灵中抗菌株(MBCMR)和高抗菌株(MBCHR)的β2-微管蛋白基因(β2-MR和β2-HR),测序正确后连接到pET32a(+)原核表达载体上,转化至大肠杆菌Rosepta感受态中,经IPTG(1 mmol.L-1)诱导,得到了N末端融合6×His纯化标签的表达产物。SDS-PAGE电泳分析表明:在大肠杆菌中表达了相对分子质量约68×103的蛋白,和预测蛋白大小一致,表达的产物主要以包涵体的形式存在。表达的蛋白经HisT...
[期刊] 华北农学报
[作者]
程罗根 施新 彭永康
从细胞毒理学和免疫化学角度对磷酰胺除草剂APM对洋葱根尖细胞有丝分裂和微管功能的影响作了初步探讨 ,结果表明 ,经 10 μmol/LAPM处理 16h后 ,细胞出现多极分裂和不均等分裂现象 ,免疫化学检测表明 ,纺锤丝失去正常向两极辐射状排列的功能 ,而是凝聚成一团 ,故引起细胞的不正常分裂
[期刊] 中国农业科学
[作者]
叶子 黄聪聪 于荣
【目的】探讨在气孔运动的信息传递通路中,保卫细胞微管骨架与蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸化两种因素之间是否存在相互作用,进而深入了解气孔运动机理。【方法】以拟南芥野生型及GFP-α-tubulin-6植株为材料,利用药理学试验、激光共聚焦扫描显微镜观察、免疫印迹等细胞学及生物化学方法研究丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸化对保卫细胞气孔运动及微管骨架的影响。【结果】丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂星型孢菌素(staurosporine,STS)能促进光照下气孔开放,微管特异性抑制剂长春花碱(vinblastine)和微管稳定剂紫杉醇(taxol)分别减弱和增强其作用;1/2A型磷酸酶抑制剂冈田酸(okadaic ac...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
李燕杰 田梦迪 刘燕 张媛 张平冬
减数分裂是植物有性生殖过程中配子形成的必要阶段,是生殖生物学研究领域的热点。本文以银灰杨雄花枝为研究材料,运用醋酸洋红染色法和间接免疫荧光技术,开展银灰杨花粉母细胞减数分裂及其微管骨架动态变化研究。结果表明:1)银灰杨花药颜色变化可作为初步判别其花粉母细胞减数分裂时期的形态学标记,花粉母细胞从减数分裂细线期发育至四分体时期,花药颜色从嫩绿色,经由黄绿色、微红色、浅红色、鲜红色转为深红色。2)银灰杨花粉母细胞减数分裂末期Ⅰ可观察到与着丝粒微管紧密相连的落后染色体,由于染色体两侧着丝粒微管的均衡牵引而致使其停
关键词：
银灰杨 花粉母细胞 微管骨架 胞质分裂
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
刘晓云 张学成 朱清华 谭金山
为进行经济海藻枝管藻细胞壁多糖和胞外多糖的超微定位,本文以钌红电镜细胞化学方法制备枝管藻透射电镜样品。结果表明,钌红染色方法不仅比常规电镜制样方法能够更完整地显示海藻细胞壁的超微结构,而且使枝管藻多糖在细胞壁内、外的分布在透射电镜下直观可见:细胞壁内的多糖物质主要呈多层紧密排列的微纤维状,细胞表面的多糖物质则呈松散的网状。本结果为研究海藻细胞壁的超微结构和海藻吸附重金属的作用部位提供了技术支持。
[期刊] 林业科学
[作者]
顾玉红 程朋军 高述民 胡青 李凤兰
用电镜细胞化学定位的方法,对文冠果种胚诱导体细胞胚发生过程中非胚性愈伤组织、胚性愈伤组织及球形胚、鱼雷胚发育期间Ca2+的分布动态进行超微结构水平上的定位比较研究。结果表明:非胚性细胞Ca2+的含量最少,集中分布在细胞壁和细胞间隙中;胚性愈伤组织的细胞Ca2+的含量明显增加,集中分布在液泡膜、质膜和细胞质中;球形胚时,质膜上Ca2+积累的颗粒较大,但量相对较少;鱼雷胚期Ca2+的含量明显增多,集中分布在胚芽端和胚根端,胚根最外层细胞的外侧的细胞壁明显增厚,其细胞壁的外侧Ca2+分布多。推测Ca2+与文冠果体细胞胚发生过程中细胞的发育时期密切相关。
[期刊] 图书情报工作
[作者]
刘军
针对微内容形式多样、聚合困难的问题,借鉴文献分类的思想,将微内容分成四个层次(零次微内容、一次微内容、二次微内容、三次微内容),基于每个层次探讨微内容的聚合,并采用这种分层聚合的思想探讨微内容聚合应用于数字参考咨询服务的优势和实践,以期提高数字参考咨询服务的质量和效率。
关键词：
微内容 内容聚合 数字参考咨询
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李艳霞 孙鹏 朱果利
为研究保卫细胞液泡(GCV)的pH在气孔保卫细胞渗透调节中的作用及蚕豆(Vicia faba)叶片气孔GCV中的颗粒物的性质,本实验采用激光共聚焦显微术配合pH荧光探针BCECF AM的荧光比值法对ABA诱导的气孔关闭过程进行观测,发现:蚕豆气孔关闭过程中GCV的pH升高约0.5(pH5.3→5.8)。分别用pH5.3和5.8的Mes/Tris缓冲液调控离体开放态GCV的pH,透射电镜(4×104倍)观察负染片说明:pH 5.3对开放态GCV液所含颗粒物的线度及分布密度无实质影响;而pH 5.8的处理使取自开放态GCV液所含颗粒物的线度明显增大、分布密度显著减小;非特异性蛋白酶Proteina...
关键词：
保卫细胞 液泡内含颗粒物 气孔运动 pH
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张丽萌 李闰婷 聂晓宁 李玉华 刘爱菊 邢真真 聂文营 马润林 王林青 陈龙欣
采用TRIzol法提取绵羊卵巢组织总RNA，运用RT–PCR技术扩增绵羊微管解聚蛋白基因(STMN1)的编码区序列；通过同源重组技术构建重组诱饵表达载体p GBKT7–STMN1，鉴定该诱饵蛋白在酵母双杂交系统中的自激活活性、细胞毒性和表达情况；利用诱饵质粒p GBKT7–STMN1从绵羊卵巢组织细胞的酵母双杂交cDNA文库筛选互作的宿主蛋白。结果显示：成功构建重组诱饵质粒p GBKT7–STMN1，并对酵母细胞无自激活活性和细胞毒性作用，且能在酵母细胞中正常表达；筛选获得12个与STMN1相互作用的克隆，经测序比对分析和点对点验证，得到CREB和FOXM1共2个互作的宿主蛋白，这2个蛋白可能参与调控细胞的增殖、周期、凋亡等过程。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张丽萌 李闰婷 聂晓宁 李玉华 刘爱菊 邢真真 聂文营 马润林 王林青 陈龙欣
采用TRIzol法提取绵羊卵巢组织总RNA，运用RT–PCR技术扩增绵羊微管解聚蛋白基因(STMN1)的编码区序列；通过同源重组技术构建重组诱饵表达载体p GBKT7–STMN1，鉴定该诱饵蛋白在酵母双杂交系统中的自激活活性、细胞毒性和表达情况；利用诱饵质粒p GBKT7–STMN1从绵羊卵巢组织细胞的酵母双杂交cDNA文库筛选互作的宿主蛋白。结果显示：成功构建重组诱饵质粒p GBKT7–STMN1，并对酵母细胞无自激活活性和细胞毒性作用，且能在酵母细胞中正常表达；筛选获得12个与STMN1相互作用的克隆，经测序比对分析和点对点验证，得到CREB和FOXM1共2个互作的宿主蛋白，这2个蛋白可能参与调控细胞的增殖、周期、凋亡等过程。
[期刊] 现代管理科学
[作者]
唐震 张阳
回顾战略管理的形成与发展,一些管理先驱、学术机构和实践系统对管理理论和实践所作的贡献在很大程度上推动了战略管理的历史演变。纵观西方战略管理思想发展史,发现推动西方战略管理思想产生和变迁的历史力量主要是由政府、大公司和学术机构共同构成的。本文分别从这3方面分析其在战略管理学科构建中的作用,借此理清战略管理发展的学术源流。
关键词：
战略管理 主体 聚合
[期刊] 情报理论与实践
[作者]
成全 周兰芳
社交媒体的兴起极大地改变了网络用户的信息行为习惯,人们在惊叹信息获取方式便捷、高效、丰富的同时也被社交媒体信息缺乏组织、良莠不齐、检索困难等问题所困扰。与传统的文献型知识体系构成相区别,社交媒体信息的海量化与主题发散性特征尤其明显。文章以新浪微博为例,从微博短文本的内容、时间、空间、人物等多维度实现面向语义关联的多维度主题聚合。从内容特征上,针对微博短文本数据的稀疏特性,选取适用于短文本挖掘的LDA主题模型,实现对微博信息的主题聚类;而针对微博信息的外部特征,利用RDF资源描述框架实现对其语义化描述,并依托语义关联发现组件Silk Workbench从时间、地点、人物维度实现了基于主题的微博信息语义发现与多维主题聚合。研究表明,LDA主题挖掘模型与关联数据技术的结合应用为有效揭示社交媒体信息的主题特征,实现对微博信息的细粒度切分、语义化描述与多维度关联聚合提供了一种有效的解决方案。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张昱 王永录 张永光 潘丽 方玉珍 刘力宽 蒋守田 吕建亮 张中旺 张淑刚 李正丰 杜进鑫
以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增3D聚合酶基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,对经凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对获得AF723D聚合酶的核苷酸序列和推导氨基酸序列,综合分析3D聚合酶的亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数,预测其潜在B细胞抗原表位并人工合成表位肽段,利用间接ELISA对潜在表位进行筛选鉴定,结果显示,表位3D2和3D4为病毒株AF72 3D聚合酶的优势B细胞表位,该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究奠定基础。
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