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[期刊] 淡水渔业
[作者]
何智 何治德 何亮 阮会斌 李松 严太明
为探究黄鳝(Monopterus albus)Caspase-3在性腺性逆转发育过程中的功能和作用,实验扩增黄鳝caspase-3的部分序列,检测了其在不同发育时期性腺中mRNA表达水平、蛋白相对含量以及表达位置。通过PCR扩增获得黄鳝caspase-3基因cDNA序列,推导的氨基酸序列对比发现,黄鳝caspase-3与大黄鱼(Larimichthys crocea)和鳜(Siniperca chuatsi)亲缘关系最近。实时定量PCR(qRT-PCR)结果显示,caspase-3 mRNA在黄鳝各发育时期性腺中均有表达,在卵黄生成期性腺中表达量最高,并伴随性腺向雄性发育表达量呈下降的趋势;而其蛋白相对含量在性腺性逆转过程中呈现逐渐上升的趋势,间性晚期最高。免疫组织化学染色结果显示,Caspase-3蛋白阳性信号定位于卵黄生成期卵母细胞细胞质、皮质小泡期卵母细胞的细胞核和颗粒细胞,以及各个发育时期性腺中初级生长期卵母细胞的细胞质和细胞核。综上,Caspase-3与黄鳝性逆转过程关系密切,推测其可能参与了性逆转过程中卵母细胞的凋亡过程。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
胡青 杨娇艳 高宇 郭威 李大鹏
采用RT-PCR法从黄鳝(Monopterus albus)性腺mRNA中克隆获得了WT1基因,根据其氨基酸序列有无KTS区将黄鳝WT1基因分为2种类型:WT1(-KTS)为1 236bp,WT1(+KTS)为1 245bp。与NCBI/GenBank上其他物种进行氨基酸序列比对,发现它们与斜带石斑鱼的WT1a相似性最高,分别为93.2%和93.0%,并且它们均在羧基端具有相似性很高的锌指结构区域。系统进化树分析发现,黄鳝WT1基因与斜带石斑鱼WT1a聚类为一支。WT1基因在黄鳝性腺、肾、肠、脾和心脏组织中都有表达,且该基因在黄鳝雌性、间性和雄性性腺中的表达量在各时期都有先升高后降低的表达趋势...
关键词：
黄鳝 WT1 序列分析 基因表达 性逆转
[期刊] 水产学报
[作者]
王莉 孙伟 储经乾 刘颖 史思瑞 葛楚天 钱国英
SOX9基因在脊椎动物性别决定和性腺分化中扮演重要的调控作用。从mRNA和蛋白水平分析中华鳖SOX9基因在不同组织中的差异性表达、在胚胎性腺和成年睾丸中的细胞定位以及在性逆转中的表达变化,研究SOX9基因在中华鳖性别分化中的调控作用。Real-time PCR结果显示,SOX9基因在中华鳖雄性性腺中特异性表达。免疫荧光染色分析显示,SOX9蛋白在雄性18期胚胎性腺中开始表达,随着性腺的发育,SOX9蛋白定位于性腺Sertoli前体细胞细胞核中;而在雌性胚胎性腺并未见其表达。此外,在雌激素诱导的雄性向雌性性逆转胚胎中,SOX9基因显著下调,而在芳香化酶抑制剂诱导的雌性向雄性性逆转胚胎中,SOX9...
关键词：
中华鳖 SOX9基因 性别分化 性逆转
[期刊] 淡水渔业
[作者]
夏雪平 连子童 田海峰 李忠 孙敬锋 胡乔木
利用黄鳝(Monopterus albus)卵巢、间性性腺以及精巢转录组测序数据分析结果，筛选获得表达差异的LncRNA 54770.30。为探究黄鳝LncRNA 54770.30的生物学特性及其在性逆转过程中的功能和作用，本研究分析了黄鳝LncRNA 54770.30在不同组织与不同阶段性腺的表达。结果表明：LncRNA 54770.30在各组织均有表达，在肌肉中表达量最高，精巢与肝脏次之；LncRNA 54770.30在黄鳝卵巢至精巢转变过程中表达量呈上升趋势，卵巢与间性性腺中表达量无显著性差异，但卵巢、间性性腺与精巢中表达量呈显著性差异。利用原位杂交技术对LncRNA 54770.30在不同阶段性腺中表达进行定位分析，结果显示LncRNA 54770.30在黄鳝各阶段性腺中均有阳性信号，卵巢中主要在卵细胞的细胞质与颗粒细胞以及体细胞中表达；精巢中主要在初级精母细胞和次级精母细胞中表达。对黄鳝幼体进行甲基睾酮处理后，实验组卵巢结构出现明显退化，卵泡数量减少，出现中空小叶；荧光定量PCR分析显示，LncRNA 54770.30在实验组退化卵巢中的表达量较对照组显著下降。以上研究表明，LncRNA 54770.30可能参与黄鳝性腺发育过程，并在黄鳝性逆转中发挥重要作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
范小瑞 张禛 席华明 梁亚俊 贺俊平
【目的】环境高温影响猪精子发生和精液品质,但其分子机制尚不清楚。为此探索环境温度升高导致的热应激对猪睾丸细胞凋亡调节蛋白Cyt-C和Caspase-3表达的影响。【方法】性成熟长白公猪9头,对照组3头,饲养在20—27℃的猪舍环境;短期热应激处理组(heat stress 7 d,HS7d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续7 d;一个精子发生周期热应激处理组(heat stress 42 d,HS42d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续42 d;每天于热应激处理后将猪驱赶回20
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张小辉 孟宪亮 高保全 刘萍 王竹青 张杰 蔡影
本研究利用RACE技术克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)Drosha和Exportin 5基因的cDNA全长序列,Drosha基因长度为3443 bp,编码1038个氨基酸,预测蛋白质包含2个相邻的RNA酶Ⅲ结构域(RⅢDa和RⅢDb)和1个双链RNA结合结构域(dsRBD)。Exportin 5基因全长为5000 bp,编码1208个氨基酸,预测蛋白质包含1个Importin-βN-末端结构域(IBN-N)和1个核输出蛋白结构域(XPO-1)。同源分析显示,三疣梭子蟹Drosha氨基酸序列与其他物种高度相似,与日本对虾(Marsupenaeus japonicus)相似度最高,达94%。qRT-PCR分析结果显示,Drosha和Exportin 5基因在三疣梭子蟹各组织中均有表达,其在卵巢和肝胰腺中的表达量最高(P
[期刊] 中国水产科学
[作者]
蔡影 孟宪亮 刘萍 李健 环朋朋 孙东方
本研究采用SMART RACE方法克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)Dnmt2(Pt Dnmt2)基因。该基因c DNA全长为1291 bp,开放阅读框为1203 bp,编码400个氨基酸。结构域分析显示,PtDnmt2基因有典型的C5-DNA甲基化酶结构域。同源分析表明,PtDnmt2氨基酸序列与其他物种有较高的同源性。系统进化分析显示,三疣梭子蟹PtDnmt2氨基酸序列与罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)Dnmt2关系最近。qRT-PCR结果显示,PtDnmt2基因在三疣梭子蟹所有组织中均有表达,在卵巢中表达量显著高于其他组织(P<0.05)。PtDnmt2基因在胚胎和幼体发育过程中的表达量随发育时期而变化,其在受精卵和多细胞时期无表达,从囊胚期开始出现,随着胚胎的发育表达量逐渐上升。在性腺发育不同时期PtDnmt2基因表达量存在显著差异,其在卵巢II期表达量最高,之后逐渐下降;在精巢中该基因的表达量随着精巢的发育逐渐上升,在IV期达到峰值。本研究结果表明,PtDnmt2基因参与了三疣梭子蟹胚胎、幼体和性腺发育调控。
[期刊] 水产学报
[作者]
梁可蓥 张子平 廖佳倩 邹志华 王艺磊
为了解Sox14基因在拟穴青蟹胚胎发育和性腺发育过程中可能起到的调控作用,实验从青蟹性腺转录组数据库中得到全长为2558 bp的Sp-Sox14 c DNA序列,该序列编码一个包含427个氨基酸的蛋白,包含一个HMG-box。进化树分析表明,Sp-Sox14与其他节肢动物的Sox14亲缘关系较近。实时定量PCR结果显示,Sp-Sox14在成蟹雌雄各组织中均有不同程度的表达,其中在卵巢和雄蟹心脏中的表达量最高。在胚胎发育过程中,SpSox14在复眼色素形成期的表达量显著高于其他时期。在性腺不同发育阶段,Sp
[期刊] 中国水产科学
[作者]
戴燕彬 韩坤煌 颜素芬 邹志华 张子平 王艺磊
在实验室所构建的拟穴青蟹(Scylla paramamosain)EST文库基础上筛选出泛素基因(Ubquitin,Sp-Ub)片段,利用RACE技术克隆其全长cDNA序列,并对其结构进行分析;利用实时定量PCR技术检测该基因在雌蟹各组织及性腺不同发育阶段中的表达情况。结果显示,Sp-Ub基因全长555 bp,编码154个氨基酸,其第1~76个氨基酸为高度保守的泛素结构域,第101~147的氨基酸残基为典型的核糖体蛋白S27a的保守区域;预测的泛素结构域二级结构由5个延伸链,1个α-螺旋及其连接的无规卷曲构成,Sp Ub三维结构由1个α-螺旋以及5个β片层。多重比对表明不同物种的泛素结构域和核...
关键词：
拟穴青蟹 泛素基因 组织表达 性腺发育
[期刊] 淡水渔业
[作者]
王文静 吴彪 刘志鸿 孙秀俊 周丽青 徐万栋
为探究性类固醇激素合成相关基因17β-羟类固醇脱氢酶14(17β-hydroxysteroid dehydrogenase 14,17β-HSD14)在魁蚶(Scapharca broughtonii)性腺发育过程中的作用，本研究从魁蚶转录组中筛选并验证了17β-HSD14基因序列，通过原位杂交和实时荧光定量PCR检测了该基因在魁蚶中的组织定位及性腺发育过程中表达变化规律。结果显示：17β-HSD14基因的编码区序列长度为822 bp,编码273个氨基酸；原位杂交实验在魁蚶卵巢的成熟卵细胞、滤泡壁和精巢中的精原细胞、精子以及其他组织的细胞中都检测到了17β-HSD14基因的阳性杂交信号；qRT-PCR结果表明，17β-HSD14基因的表达随其性腺发育而产生变化，在形成期(Ⅰ期)到增殖期(Ⅱ期)的过程中呈上升趋势，成熟期(Ⅲ期)至耗尽期(Ⅴ期)呈下降趋势，且在卵巢组织中的表达量显著高于精巢组织。综上，17β-HSD14基因与魁蚶的性腺发育密切相关，可能对其性腺发育、功能维持和成熟具有重要的作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
王磊 李响 柳峰松 刘利平
为评估不同激素诱导花鳗鲡卵巢发育的效果并探究促性腺激素在花鳗鲡发育过程中的作用,实验比较了不同激素组合处理后花鳗鲡性体指数(gonadosomatic index,GSI)的变化,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对处于不同发育阶段雌鱼脑垂体中促性腺激素基因Gt Hα(促性腺激素亚基),LHβ(促黄体生成素亚基)及FSHβ(卵泡刺激素亚基)的表达进行了定量研究。结果发现,鲤脑垂体萃取液(CPE)与人类绒毛膜促性腺激素(h CG)组合能够有效促使雌性花鳗鲡性腺发育成熟,GSI平均达22.9%,与对照组相比差异显著。单独注射雄烯二酮(ADSD)和注射ADSD、CPE、h CG混合制剂诱导效...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
连子童 夏雪平 李忠 田海峰 蒋钦杨 胡乔木
为解析黄鳝(Monopterus albus)性逆转机制，实验以雌、雄、间性发育黄鳝为研究对象，分析不同组织、不同发育时期性腺、甲基睾丸酮处理性腺及Zebularine处理性腺原代细胞后dynlt3基因表达模式的变化及其在性腺中的表达定位。性腺转录组测序结果显示，基因全长1 082 bp,开放阅读框354 bp,编码117个氨基酸。生物信息学分析显示，dynlt3基因编码蛋白质的二级结构包含37.96%的α-螺旋，29.20%的β-折叠，32.85%的无规则卷曲。系统进化分析结果显示，黄鳝DYNLT3氨基酸序列与硬骨鱼纲中底鳉(Fundulus heteroclitus)同源性最高。实时荧光定量PCR结果表明，dynlt3基因在黄鳝肌肉和脑具有较高表达，心脏次之，在其它各组织表达量较低。在性腺的不同发育时期，在间性后期和雄性中表达量显著性高于雌性与间性早期。甲基睾酮处理后黄鳝卵巢组织结构发生明显退化，卵母细胞退化且数量减少，结缔组织间出现空泡结构；dynlt3基因在卵巢中表达量显著性下调。原位杂交分析dynlt3基因在性腺组织中的表达定位结果显示，在不同性腺发育时期均检测到dynlt3阳性信号，间性性腺组织中dynlt3基因主要在精原细胞和初级精母细胞中表达，精巢组织中dynlt3基因可在精原细胞与初级精母细胞中，卵巢组织阳性信号较弱，主要在II时相卵母细胞细胞质中表达。Zebularine处理性腺原代细胞后，dynlt3基因表达无显著性差异。以上研究表明，dynlt3参与黄鳝性腺发育过程，并在黄鳝性逆转及性腺细胞发育过程中发挥重要作用，但是甲基化可能不参与其基因表达调控。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
范睿 张昱 许家玉 鲁亚平 蔡亚非
为揭示凋亡相关基因和c-kit基因在脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后的相互关系,利用RT-PCR和免疫组化技术,分别检测了caspase-3、bax、bcl-2、c-kit的mRNA和蛋白在小鼠脊髓损伤后的表达。结果显示:在SCI后4 h开始出现大量的神经元和胶质细胞凋亡,其中促凋亡因子表达增加,而抑制凋亡因子表达量减少。caspase-3的mRNA和蛋白的表达在SCI后开始增加,并在72 h时达到峰值,bax表达规律与之基本一致,但是其峰值出现在24 h。随着时间的变化,bcl-2与c-kit的表达均表现为升高—降低—升高的变化趋势,与caspase-3和bax的变...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
黄慧 屈常林 高洪 赵汝 严玉霖 杨建发 陈培富 邹丰才
为研究内毒素(ET)致大鼠肝细胞凋亡变化、对肝脏Caspase-3蛋白表达的影响及阳离子A(CA)的保护效应。将试验动物随机分为3组:对照组(Ⅰ组)、ET组(Ⅱ组)和CA保护组(Ⅲ组)。3组动物经相应处理后分别在3、4、8、12 h采集肝脏检测肝细胞凋亡情况和Caspase-3蛋白的表达情况。结果表明,肝细胞凋亡与Caspase-3蛋白的表达成正相关的关系。ET可上调Caspase-3蛋白在肝脏的表达,诱导肝细胞凋亡,最终导致肝脏受损;而CA则能明显下调Caspase-3在肝脏的表达,抑制肝细胞凋亡,对由ET诱导的肝损伤具有显著的保护效应。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
施力光 荀文娟 岳文斌 张春香 王茜 武晓英 任有蛇 石磊 杨茹洁 雷福林
【目的】研究磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)在山羊各种组织中的表达特点及在性腺中的定位情况。【方法】提取各种组织总RNA,应用实时荧光定量PCR方法检测各种组织PHGPx mRNA表达规律,利用免疫组化技术对睾丸和附睾PHGPx进行定位分析。【结果】PHGPx mRNA在各种组织表达水平由高到低依次为:睾丸>>心>脑>附睾>肾>肝>肺>脾>背最长肌,在性腺和附睾中:睾丸>>附睾尾>附睾头>附睾体;免疫组化结果显示睾丸间质组织、生精细胞均有阳性产物,附睾头部平滑肌纤维表达弱阳性,附睾尾部附睾管中的单层柱状上皮表达呈强阳性。【结论】PHGPx在不同组织广泛表达,发挥重要的生物学功能,免疫组化...
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