- 年份
- 2024(8262)
- 2023(11857)
- 2022(10465)
- 2021(9997)
- 2020(8386)
- 2019(19177)
- 2018(19414)
- 2017(36516)
- 2016(20685)
- 2015(23519)
- 2014(23819)
- 2013(23120)
- 2012(21492)
- 2011(19130)
- 2010(18998)
- 2009(17368)
- 2008(17099)
- 2007(15049)
- 2006(13104)
- 2005(11352)
- 学科
- 济(74151)
- 经济(74050)
- 管理(57445)
- 业(51958)
- 企(43964)
- 企业(43964)
- 方法(34530)
- 数学(29196)
- 数学方法(28754)
- 学(21237)
- 农(20233)
- 中国(19987)
- 财(19299)
- 业经(16415)
- 地方(15486)
- 制(15236)
- 理论(14971)
- 和(13100)
- 农业(13098)
- 贸(12713)
- 贸易(12705)
- 易(12305)
- 教育(12258)
- 务(12227)
- 财务(12151)
- 财务管理(12126)
- 技术(11853)
- 银(11852)
- 环境(11841)
- 银行(11786)
- 机构
- 大学(290175)
- 学院(287692)
- 管理(110213)
- 济(102178)
- 经济(99547)
- 研究(99166)
- 理学(95289)
- 理学院(94108)
- 管理学(92138)
- 管理学院(91647)
- 中国(71957)
- 科学(67344)
- 京(63479)
- 农(55059)
- 所(52035)
- 业大(48851)
- 研究所(47784)
- 财(47532)
- 中心(44648)
- 农业(43719)
- 江(42935)
- 北京(39841)
- 范(39440)
- 师范(38890)
- 财经(37861)
- 院(36159)
- 州(34728)
- 技术(34718)
- 经(34292)
- 师范大学(31226)
- 基金
- 项目(200630)
- 科学(154880)
- 基金(142822)
- 研究(142461)
- 家(126682)
- 国家(125611)
- 科学基金(105784)
- 社会(84564)
- 省(80119)
- 社会科(79741)
- 社会科学(79718)
- 基金项目(76190)
- 自然(71999)
- 自然科(70278)
- 自然科学(70258)
- 自然科学基金(68951)
- 划(67905)
- 教育(65832)
- 资助(59032)
- 编号(58696)
- 成果(48676)
- 重点(45094)
- 部(42708)
- 发(42067)
- 课题(41320)
- 创(41253)
- 科研(39077)
- 计划(38754)
- 创新(38466)
- 大学(36730)
- 期刊
- 济(114084)
- 经济(114084)
- 研究(81893)
- 中国(57890)
- 学报(56256)
- 农(50490)
- 科学(47969)
- 大学(40835)
- 管理(40596)
- 学学(38410)
- 教育(37017)
- 财(36258)
- 农业(34917)
- 技术(25041)
- 融(22029)
- 金融(22029)
- 业经(18714)
- 财经(17845)
- 业(17654)
- 图书(17489)
- 经济研究(17134)
- 版(15717)
- 业大(15569)
- 科技(15223)
- 经(15093)
- 问题(14510)
- 理论(14350)
- 实践(13383)
- 践(13383)
- 技术经济(12912)
共检索到421570条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王立勇 刘秀明 张玲 姚娜 王德仲 历雯清 蔡静波 李海燕 姜潮
【目的】研究用红花愈伤组织建立红花悬浮细胞培养体系的条件,并利用红花悬浮细胞通过农杆菌介导转化法表达CD20复合片段抗体。【方法】以红花子叶为外植体,研究不同种类激素组合对愈伤诱导率的影响,筛选优质愈伤组织进行悬浮培养,探索不同初始接种量、蔗糖质量分数、水解酪蛋白质量浓度对红花悬浮细胞生长的影响。将CD20复合片段抗体基因两端引入XmaⅠ/EcoRⅠ酶切位点,并将其与pEASY-T1和pBasta载体相连,构建pEASY-T1-CD20克隆载体和pBasta-CD20表达载体,再将构建的pBasta-CD
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
马骋 宫彩霞
为提高哺乳动物悬浮细胞表达系统用于日常膜蛋白表达制备的实用性、可控性及效率，改善传统工艺缺乏快速检测和质控的方法、缺乏快速且高通量的目的蛋白及融合标签的筛选策略等方面的不足，设计了新的pf系列质粒，优化并建立关联的检测方法，实现了病毒滴度在转染和扩增阶段的随时监测，并缩短了定量测量病毒感染效力的周期；同时设计了新的筛选策略和ESNX质粒系列，实现了目的蛋白和融合标签质粒库的快速构建以及对其表达效果的快速、高通量检测筛选。基于新质粒和对应使用方案的膜蛋白表达制备新体系提高了效率、实用性和可控性，可以简单地再现并用于各实验室，为膜蛋白的结构、功能等各方面研究提供助力。
关键词：
哺乳动物细胞 悬浮培养 膜蛋白 表达制备
[期刊] 中国农业科学
[作者]
蒋细良 朱昌雄 王慧敏 田云龙 王劲波
用白叶枯菌(HB84-17)、10μg·ml-1中生菌素和10μg·ml-1中生菌素+白叶枯菌处理水稻抗、感白叶枯病近等位基因系CBB4和沈农1033悬浮细胞,采用斑点杂交的方法研究了中生菌素对水稻悬浮细胞苯丙氨酸解氨酶基因转录表达的影响。结果表明,白叶枯菌、中生菌素和中生菌素+白叶枯菌处理都能诱导悬浮细胞中苯丙氨酸解氨酶基因的转录表达。对于CBB4,白叶枯菌处理3h时苯丙氨酸解氨酶基因开始诱导转录表达,6h达到高峰,诱导表达时间持续至48h;中生菌素处理3h时开始大量表达,大量表达持续至48h。对于沈农1033,白叶枯菌处理12h时苯丙氨酸解氨酶基因才开始诱导转录表达,诱导表达持续至24h;...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
王彩云 丁友芳 翁慧 史玲玲 闫林林 刘玉军
为了探讨大花红景天悬浮体系中红景天苷含量与其颗粒大小、生长状态的关系及可能机制,以大花红景天叶片为外植体,获得愈伤组织,建立悬浮颗粒体系,并分别通过60、80、100和120目细胞筛筛选进而建立悬浮细胞体系。测定了相同培养条件下悬浮颗粒(平均直径约2.5cm)、悬浮细胞(过80目细胞筛所得)及二者相应培养液中红景天苷的含量。结果表明:经80目细胞筛过滤所得滤液培养一段时间后,可获得大量增殖速度较快、大小均一的悬浮细胞,且这些悬浮细胞中红景天苷含量达0.606mg/g,约为悬浮颗粒中红景天苷含量0.27mg/g的2.2倍。而悬浮颗粒和悬浮细胞相应培养液中则均未检测到红景天苷。悬浮体系中细胞与氧气...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
薛刚 祝长青 郑其升 张雪花 李倬 侯继波
从猪外周血淋巴细胞中克隆猪CD40L基因,构建表达载体pET-CD40L,转化大肠杆菌BL21(DE),表达获得相对分子质量约为48×103的重组融合蛋白。以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗猪CD40L的特异性抗体。间接ELISA检测到多克隆抗体效价达到1:12 800,Western-blot检测结果表明,得到的抗体既可与纯化的CD40L蛋白特异性结合,又可与表达猪CD40L的重组杆状病毒特异性结合。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
唐秀山 王磊 廖定为 蒋一男 夏春
为了获得鸡CD8α/β蛋白及其多克隆抗体,进一步研究其结构与功能,本实验从三黄鸡cDNA文库中克隆了其CD8α/β胞外区片段,构建了pQE30/ChCD8α/β原核表达系统,并经诱导表达、亲和层析纯化,获得了纯化的重组蛋白(rChCD8α/β),然后用rChCD8α/β分别免疫Balb/c小鼠制备了其多克隆抗体。结果表明:本实验克隆的ChCD8α长483 bp、编码161个氨基酸、可在E.coliJM109中高效表达,蛋白质分子质量为24.0 ku,表达量占菌体蛋白量的25.0%,由该蛋白质所制备的多克隆抗体抗rChCD8α的ELISA效价为1∶1 024 000;另外,克隆的ChCD8β长4...
[期刊] 水产学报
[作者]
郭政 聂品
克隆了鳜T细胞表面受体CD4分子的cDNA序列并对其在组织/器官的表达进行了分析。鳜CD4分子的cDNA序列全长为2 356 bp,编码469个氨基酸。该CD4分子由4个免疫球蛋白样结构域(V1-C1-V2-C2)构成的胞外区、一个跨膜区和一个包含保守的CXC基序的胞内区组成。系统进化分析表明,鳜CD4分子与同属于鲈形目的鲈CD4分子聚为一支,与鲈的相似性最高(57%),与鲤的相似性较低(34%)。序列比对分析显示,CD4分子胞外区存在多个保守性位点,如:C1结构域中的WTC基序、V2和C2结构域中的N-糖基化位点等。同鸟类和哺乳类不同的是,鳜CD4分子在V1结构域中缺少由半胱氨酸(Cys)残...
关键词：
鳜 T细胞 CD4 表达
[期刊] 水产学报
[作者]
叶汉梅 魏晓雷 谭肖英
细胞因子信号传导抑制因子(suppressor of cytokine signaling, SOCS)是一类由细胞产生的胞内蛋白,能够反馈性阻断细胞因子信号传导过程的负性调控因子。为深入研究黄颡鱼细胞因子信号传导的发生过程和机制,实验从黄颡鱼cDNA中克隆获得561 bp的黄颡鱼SOCS1(PfSOCS1)基因编码序列,成功构建了重组质粒pET32a(+)-PfSOCS1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行表达,确定最佳表达条件。本实验采用包涵体纯化的方法得到纯度较高的重组SOCS1蛋白;以重组PfSOCS1蛋白免疫Balb/C小鼠,制备多克隆抗体。通过Western blot鉴定了PfSOCS1抗血清可以特异性识别重组PfSOCS1蛋白。蛋白水平的组织分布显示,黄颡鱼SOCS1蛋白在肝脏中表达水平较高。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
缪德年 苏小运 姚惠娟 樊生超 陈溥言
以杂交瘤细胞为模型 ,在培养液中加入不同的信号转导抑制剂和囊素 ,用间接ELISA法测定抗体分泌水平 ,用定量RT PCR法检测抗体mRNA的表达水平。结果表明 ,加入Gα 蛋白选择性抑制剂NF 0 2 3、蛋白激酶C抑制剂GF10 92 0 3X、磷脂酰肌醇 3激酶抑制剂heparin、Ca2 + /calmodulin依赖蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN 6 2、磷脂酶C抑制剂U 7312 2和蛋白激酶G抑制剂后 ,囊素对杂交瘤细胞抗体分泌速度的影响明显 (P
关键词：
杂交瘤细胞 信号转导抑制剂 囊素
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘文婷 田立宁 聂小妮 梁宗锁 何蔚娟
【目的】探讨转基因苜蓿植株根、茎、叶和体细胞胚中外源GUS的表达情况,为外源蛋白在苜蓿体细胞胚中的积累提供理论依据。【方法】以在加拿大广泛种植的N4.4.2紫花苜蓿品种的叶柄为外植体,进行农杆菌GV3101介导的苜蓿遗传转化,将感染的苜蓿叶柄外植体置于不同的转化培养基中培养,获得了适合于农杆菌介导的转基因苜蓿植株,将其用于转基因体细胞胚的诱导。采用PCR方法筛选阳性株系,并对其进行GUS组织化学染色分析,对转基因植株根、茎、叶和体细胞胚进行荧光定量分析。【结果】以苜蓿叶柄为外植体成功获得11株阳性转基因植物,转化效率为30.6%。GUS荧光定量分析结果表明,体细胞胚中GUS外源蛋白的表达量明显...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张永卓 刘雅琳 陆海 李慧
组蛋白去乙酰化酶HDAC具有调节细胞增殖、诱导细胞分化、凋亡的作用,是近年生物学研究热点之一,而在木本植物方面的作用却鲜有报道。【目的】本实验用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)对杨树悬浮细胞进行处理,通过改变细胞的组蛋白乙酰化水平,来探讨其对基因表达谱变化的影响。【方法】用0.5μmol/L的TSA处理悬浮细胞,10 d后收集材料用于RNA-Seq分析,比较经过TSA处理与对照组的悬浮细胞之间转录组表达差异情况。【结果】通过显微镜观察发现,对照组细胞呈均匀椭圆形,而经过TSA处理后的细胞出现圆形及长条形细胞。通过转录组分析得到4 465个差异表达基因(DEGs),其中2 363个基因上调,2 102个基因下调。差异表达基因主要富集在细胞周期、苯丙素生物合成、细胞壁结构成分和乙酰化相关等途径。【结论】通过分析TSA处理和对照组的悬浮细胞基因表达差异,发现TSA通过影响组蛋白乙酰化水平直接或间接影响细胞生长、细胞壁组分和细胞周期的相关基因,为认识组蛋白乙酰化对植物生长发育的影响提供依据。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘田田 蒋向 许晓东
【目的】研究苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)晚期表达因子lef-10在宿主细胞Sf9中的时空表达及定位,为进一步研究lef-10的功能提供理论基础。【方法】利用不同的特异引物,通过PCR方法扩增lef-10及innateP-lef-10目的片段,将目的片段分别克隆到载体pTriEx-SP-GFP上,得到重组质粒pTriEx-lef10-GFP和pTriEx-innateP-lef10-GFP,经过双酶切检测构建载体。将重组质粒分别与Bacmid共转染Sf9细胞,用得到的重组病毒分别于4,8,16,24,36h再次感染宿主细胞;用激光共聚焦显微镜观察lef-10的表达及亚细胞定位情况。...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
黄思颖 赵金良 王燕 赵永华 涂翰卿 赵岩
为从蛋白角度探索红罗非鱼(Oreochromis mossambicus♀×O.niloticus♂)在盐胁迫环境下的调节适应机制,本研究采用蛋白抗体芯片结合串联质谱技术初步筛选了盐胁迫下红罗非鱼鳃组织的差异表达蛋白,并通过免疫组化和免疫印迹技术对候选差异蛋白进行了验证。结果显示,共筛选获得181个表达量有显著差异的蛋白质(变化倍数≥1.5),包含上调蛋白142个,下调蛋白39个。挑选5个蛋白进行质谱鉴定得到3个蛋白质:中间丝蛋白(intermediate filament protein,IF)、转运蛋
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马玉萍 孔宁 王向鹏 高继明 赵钦 王承宝 周恩民
【目的】制备鼠抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)细胞受体CD163SRCR5-SRCR6多克隆抗体。【方法】提取PAM细胞总RNA,通过RT-PCR方法获得CD163SRCR5-SRCR6(第1 417~2 136bp,共720个bp)基因,将其克隆到pET-28a(+)载体上,构建重组表达载体pET-28a(+)-CD163,经酶切、PCR鉴定和测序验证后转化大肠杆菌,在BL21(DE3)中诱导重组目的蛋白表达,然后用Ni-NTA方法纯化目的蛋白,免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接ELISA和IFA方法检测多克隆抗体效价,并初步鉴定多克隆抗体血清结合细胞及阻断PRRSV感染细胞...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马跃 王建珏 黄江涛 张天颖 史怀平
【目的】原核表达奶山羊表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白胞外区25-644位共620个氨基酸序列(ECD序列),纯化蛋白并免疫家兔,制备针对山羊EGFR蛋白的特异性多克隆抗体,为山羊EGFR蛋白功能研究奠定基础。【方法】以pMD19-T-EGFR为模板,采用PCR方法扩增得到EGFR胞外区(ECD)基因序列。将ECD序列连接pET-32a(+)质粒构建pET-32a(+)-ECD原核表达载体,将该重组载体导入大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
