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[期刊] 华北农学报
[作者]
贾海丽 韩立强 杨国宇 钟凯 郭豫杰 台玉磊 刘涛 李平 王艳玲
基于电子延伸序列,克隆并分析兔CD147基因。采用兔十二指肠黏膜组织提取总RNA,进行RT-PCR反应,测序并进行结构预测。克隆的兔CD147基因包含一个完整的开放阅读框架,全长为810 bp,编码由270个氨基酸残基组成的CD147前体蛋白,推导的氨基酸序列信号肽为1~16个氨基酸。氨基酸序列与牛、人、褐鼠、野猪的同源性分别为62.5%,65.9%,59.5%和66.3%,三级结构预测表明CD147具有2个免疫球蛋白类似区。试验成功克隆了兔CD147基因,注册到GenBank(Accession.EU650668),并预测其三级结构,为进一步研究其生物学功能奠定基础。
关键词：
兔 CD147 克隆 序列分析 结构预测
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王俊丽 郝光 雒燕婷 刘臻 孔祥会 李学军 聂国兴
为揭示Toll样受体家族基因TLR9在鲫(Carassius auratus L.,缩写为Ca)免疫过程中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆获得了鲫TLR9(CaTLR9)基因cDNA,并就注射外源性人绒毛膜促性激素(hCG)和不同性腺周期对该基因在鲫肠道表达的影响进行了分析。结果表明,CaTLR9 cDNA全长3 509 bp,包含3 195 bp的开放阅读框(ORF)、72 bp的5′非编码区和242 bp的3′非编码区。ORF编码1 064个氨基酸组成的蛋白质。该蛋白包含19个氨基酸组成的信号肽,15个富含亮氨酸的重复结构域(LRR),1个跨膜区和1个TIR结构域。系统进化...
[期刊] 水产学报
[作者]
王怡 高银雪 湛垚垚 张向向 杨立猛 常亚青
为了明确仿刺参α－微管蛋白（α－ｔｕｂｕｌｉｎ）基因的序列及结构信息，初步研究该基因在仿刺参肠道再生过程中的生物学功能，本研究利用转录组数据挖掘和ｃ ＤｎＡ末端快速扩增技术（ＲＡｃＥ）首次克隆得到仿刺参α－ｔｕｂｕｌｉｎ基因的全长ｃ ＤｎＡ序列。结果表明，仿刺参α－ｔｕｂｕｌｉｎ基因ｃ ＤｎＡ全长为１６４１ ｂｐ，共编码４５３个氨基酸，经生物信息学分析发现，该基因的５＇端非编码区为１５３ ｂｐ，３＇端非编码区为１２６ ｂｐ，推算该基因所编码的蛋白质分子量为５０．３３ ｋｕ，等电点为４．８９，属于亲水性非跨膜蛋白质，且氨基酸序列中含有微管蛋白特有的信号序列ＧＧＧｔＧＳＧ。通过与１３种已公布物种的．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
景志忠 窦永喜 罗启慧 陈国华 蒙学莲 郑亚东 骆学农 才学鹏
【目的】克隆、表达和预测分析猪白介素家族重要成员的结构与功能。【方法】以猪白介素基因家族为对象,通过对猪PBMC刺激诱导,提取RNA,采用RT-PCR技术克隆IL-4、IL-6、IL-18等重要功能基因,并进行原核表达和结构与功能分析。【结果】成功地克隆和表达了IL-4、IL-6和IL-18基因,序列分析发现,克隆的基因与NCBI/GenBank上登载的参考序列的同源性分别为99.25%、99.21%和100%,与其它各物种的基因及其编码蛋白间具有较大的种属差异性;在大肠杆菌中表达的IL-4和IL-6重组蛋白具有较高的生物活性;结构预测表明,这些蛋白分子均含有较多的磷酸化修饰、糖基化修饰(除I...
关键词：
猪白介素 基因家族 同源性分析 结构预测
[期刊] 草业科学
[作者]
马春娟 杨宇泽 邹爱爱 孙康永杰 万雪瑞 王川 魏亚琴
为提高纤维素的降解效率、构建高效表达的纤维素酶基因工程菌，本研究以牛瘤胃液微生物全基因组为模板，首先通过PCR扩增内切葡聚糖酶eg基因，然后与pET-28a连接获得表达载体pET-28a::eg并转化至大肠杆菌(Escherichia coli)菌株BL21(DE3)中，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达EG蛋白，最后用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定重组内切酶的酶活力，分析其酶学性质。结果表明：成功构建表达载体pET-28a::eg，重组菌株E. coli BL21/pET-28a::eg在28℃用IPTG诱导14 h后纯化得到重组的EG蛋白，EG蛋白大小约为50 kDa，刚果红染色有明显水解圈。用DNS法测得EG的酶活为12.60 U·mL~(-1)，滤纸总酶活为3.53 U·mL~(-1)。重组酶在不同底物的反应中，羧甲基纤维素钠为底物的酶活力最高，脱脂棉最低。重组酶的最适温度为40℃，最适pH为7.0。在此条件下，Ca~(2+)、Mg~(2+)、Fe~(2+)、K~+、Mn~(2+)等离子均可对重组蛋白EG的酶活力具有促进作用，Zn~(2+)可促进但差异不显著，而Hg~(2+)、Cu~(2+)对EG的酶活力具有抑制作用。本研究构建的重组内切酶菌株可以高效水解纤维素，为内切酶的工业应用奠定了基础。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
何洪炳 蔡明成 梁小虎 赖松家
【目的】肠炎是家兔最常见且死亡率最高的消化道代谢疾病,给家兔养殖业带来巨大的经济损失。圆小囊作为家兔特有的免疫器官,在家兔肠炎中起重要的调节作用。本试验通过研究家兔圆小囊中microRNAs(miRNAs)的表达差异,探究miRNAs与家兔肠炎发生和调节的分子机制。【方法】本试验以60只新西兰兔为试验样本,采用低纤维饲料(纤维素CF 9%、木质素ADF 13%)诱导家兔非特异性消化道紊乱型肠炎发生,通过临床症状和切片观察将试验样本分为4组(n=9),即健康对照组、诱导健康组、轻微组、严重组;检测家兔圆小囊中miR-130b以及相关炎症因子白介素-22(IL-22)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-18(IL-18)的表达,通过miRBase、targetscan等预测miR-130b与STAT3的靶向关系,同时利用q PCR检测STAT3的表达量。【结果】圆小囊中,IL-22、TNF-α、IL-18表达量上调,严重组显著高于其他组(P<0.05),miR-130b表达随着炎症程度的加深表达显著下调,2个患病组极显著低于2个健康组(P<0.01);STAT3随着炎症程度加深表达量显著上调,2个患病组极显著高于2个健康组(P<0.01)。【结论】在家兔非特异性消化道紊乱型肠炎发生过程中,圆小囊中的miR-130b通过靶向STAT3参与炎症的发生并发挥作用。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
蔡一龙 庄育彬 周五朵 王全溪 邱晓东 吴宝成
参考Ｇｅｎ Ｂａｎｋ中番鸭呼肠孤病毒（Ｍｕｓｃｏｖｙ ｄｕｃｋ ｒｅｏｖｉｒｕｓ，Ｍｄｒｖ）ｓ４基因序列，设计合成一对非结构蛋白Ｐ１０基因的特异性引物，以Ｍｄｒｖ－ｙＢ株病毒ｒｎａ为模板进行ｒＴ－Ｐｃｒ扩增，并将目的基因克隆到ＰＧｅＭ－Ｔ载体，提取质粒测序．对测序结果进行遗传进化树分析和生物信息学软件预测、分析蛋白质结构和功能．结果表明，Ｍｄｒｖ－ｙＢ株病毒的Ｐ１０蛋白基因开放阅读框（ｏｒＦ）全长为２８８ ＢＰ，编码９５个氨基酸．核苷酸比对结果表明，与标准株法国Ｍｄｒｖ－８９０２６株同源性为９５％，而与ａｒｖ－ｓ１１３３株氨基酸同源性仅为２１．９％．运用ＰｒｏＴ ＰａｒａＭ Ｔｏｏｌ软件对番鸭．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
戴鼎震 郑明球 蔡宝祥 陈溥言
根据人源大肠杆菌 1型菌毛结构基因 (pilA)DNA序列 ,在其保守区设计了 1对带有 BamHI/Hind Ⅲ酶切位点的引物 ,经PCR扩增 ,从 2 4株鸡源大肠杆菌致病株染色体中得到 2 1个大小约 6 5 7bp的阳性产物 ,经酶切、连接、转化及筛选 ,得到 3种来自不同血清型鸡源大肠杆菌 (O1、O78及O88)PCR产物的阳性克隆。经核酸序列测定 ,确认所克隆的外源基因为 1型菌毛pilA基因
关键词：
鸡大肠杆菌 1型菌毛 结构基因 克隆
[期刊] 林业科学研究
[作者]
黄星瑞 杨洁 邹洁 文玺 胡传豪 张佑祥 黄兴龙
[目的 ]揭示杜仲梦尼夜蛾CD36家族同源基因神经元膜蛋白(SNMPs)和b族清道夫受体(SRb)的序列特征和组织分布情况。[方法 ]设计特异性引物克隆杜仲梦尼夜蛾SNMPs和SRb基因，对这些基因编码的蛋白进行同源建模；通过荧光定量PCR分析这些基因在不同组织的表达情况。[结果 ]在杜仲梦尼夜蛾中鉴定得到3个CD36家族同源基因（OsonSNMP1、OsonSNMP2和OsonSRb1）；这些基因编码的蛋白具有2个跨膜区域和1个细胞外结构域。空间结构预测发现，这些蛋白的胞外结构域包含1个主要由反向平行β-折叠构成的桶状核心和1个富含疏水性氨基酸残基的α-螺旋；荧光定量PCR结果表明，OsonSNMP1、OsonSNMP2和OsonSRb1均在触角中大量表达；OsonSNMP1在雄虫触角中的表达水平显著高于雌虫触角，OsonSNMP2在雌虫触角的表达水平显著高于其他组织，OsonSRb1在雄虫触角中大量表达外，还在雌雄虫的口器中大量表达。[结论 ]本研究发现OsonSNMP1、OsonSNMP2和OsonSRb1编码的蛋白具有与脊椎动物CD36家族受体类似的空间结构，与嗅觉器官高度关联的表达模式表明这些基因可能在杜仲梦尼夜蛾嗅觉系统中发挥了功能，以上结果为探究杜仲梦尼夜蛾CD36家族同源基因的嗅觉功能提供了数据。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李卫 白家媛 许媛媛 谷长勤 张万坡 程国富 陈敏 胡薛英
【目的】分析比较中国部分品种鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列,为研究CD3ε链、CD4和CD8α链的结构和功能及其抗体的应用提供依据。【方法】利用RT-PCR,对麻鸭、樱桃谷鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列克隆测定,应用Clustal(X1.83)和DNAstar生物学软件分别与GenBank上公布的北京鸭CD3ε(AF378704)、CD4(AF378701)和CD8α(AF378373)基因ORF序列进行序列分析。【结果】麻鸭、樱桃谷鸭、北京鸭CD3ε和CD4基因ORF序列及所编码的氨基酸同源性为99%;北京鸭和麻鸭CD8α基因ORF序列同源性为99%,与樱桃谷鸭的...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡建和 张彦明 张显升 刘在新 韩雪清 季建莉 刘湘涛 谢庆阁
据已发表的 CSFV C-株序列 ,设计合成了 5′- UTR特异性 PCR引物对 P1- N 1及半套式下游引物N1′。从兔脾组织中提取总 RNA,应用 RT- PCR及 Half- nested PCR成功地扩增出了 CSFV5′- U TR,进一步将该片段克隆到 p MD- 18T载体质粒并进行了序列测定。与 Shimen株、AL D株、GPE-株、Holland C-株和 Russian C-株相应区段的比较分析表明 ,其同源性分别为 96 .2 %,95 .7%,96 .0 %,98.7%和 95 .4 %。 5′- U TR中发现的隐性 AUG起始密码子及茎环二级结构 ,可能在多聚...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈小军 孙志良 崔建国 杨惠麟
为研究阿米卡星脂质体在家兔体内的代谢动力学,给家兔一次静注阿米卡星脂质体(12.5 mg/kg),在 24 h内不同时间点取血样测定血药浓度.结果表明:药-时曲线符合一室开放模型,其主要药代动力学参数分别为:生物半衰期(t1/2β)7.39 h,表观分布容积(V)38.43 mL,药时曲线下面积(AUC)7 487.34 h·μg/mL,清除率(CLB)3.80mL/h.
关键词：
阿米卡星 脂质体 药动学 家兔
[期刊] 中国水产科学
[作者]
闫潇 杨丽萍 郑文佳 孙君君 卢荣华 聂国兴
为从蛋白水平研究小肽转运载体（ＰｅＰＴ１）在鲤（ＣｙＰｒｉｎｕｓ ＣａｒＰｉｏ Ｌ．）不同组织中的表达及分布规律，本研究采用ＰＣｒ法获得ＰｅＰＴ１ ＣＤｎａ片段，并转化至大肠杆菌ｒｏｓｅＴＴａ，对目标多肽进行原核表达，将ＰｅＰ Ｔ１重组蛋白纯化后免疫新西兰长耳兔（ｏｒｙＣＴｏＬａｇｕｓ ＣｕｎｉＣｕＬｕｓ），获取兔抗鲤ＰｅＰＴ１多克隆抗体。采用ｅＬｉｓａ检测抗体效价，免疫组化检测ＰｅＰＴ１的组织表达情况，并用荧光实时定量ＰＣｒ技术检测ＰｅＰＴ１转录水平组织表达情况。结果显示，目标多肽分子量约为２８ ｋＤ；抗体效价达到４×１０～５。ＰｅＰＴ１在鲤的前肠、中肠、后肠、脾、肝胰脏和肾中均有表达。肠道．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
肖正龙 张龚炜 杨宇 王杰 赖松家
为了研究家兔ATG16L1基因对非特异性消化道紊乱的易感性,试验采用PCR-HRM技术,首次对家兔ATG16L1基因进行单核苷酸多态性(SNP)检测,同时结合低纤维群体结肠ATG16L1基因mRNA表达量进行关联分析。结果表明:ATG16L1基因存在1个SNP位点(c.1482 G>A)与NSDD的易感性相关联;c.1482 G>A位点A等位基因能增加NSDD的易感性(OR=1.43,95%置信区间:1.08～1.91,P<0.05);ATG16L1基因在结肠中的mRNA表达...
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