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[期刊] 中国农业科学  [作者] 王海波  李璐  苏新国  张昭其  庞学群  
【目的】探讨CBF/DREB(C-REpEat BinDing tRansCRiption FaCtoR/DEhyDRatE REsponsivE ElEmEnt BinDing FaCtoR)冷应答途径在热处理诱导香蕉抗冷性中的作用,为研究香蕉果实中CBF冷应答途径的信号转导过程提供参考依据。【方法】从香蕉基因组数据库(http://Banana-huB.southgREEn.FR/)中挑选CBF冷应答途径的7个基因序列,分别设计特异引物,利用实时荧光定量pCR分析这7个基因在热处理诱导的香蕉抗冷性中的表达模式。【结果】香蕉果实maiCE在7℃处理1 h时,表达迅速升高并达到最大值,DREB...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 王海波  庞学群  黄雪梅  张昭其  
【目的】探讨活性氧在热处理诱导果实耐冷性中的作用。【方法】采用10μmol.L-1的活性氧合成酶NADPH氧化酶的专一性抑制剂二苯基碘(diphenylene iodonium,DPI)预处理香蕉果实,然后于52℃热水处理3 min,之后置于7℃低温贮藏,测定冷害指数、叶绿素光化学效率Fv/Fm、过氧化氢(H2O2)和超氧阴离子()含量、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性及其基因表达。【结果】与单独热水处理香蕉果实相比,热处理前预先用DPI处理的香蕉果实具有较高的冷害指数和较低的Fv/Fm值;在冷藏前3 d减少了由热处理导致的H2O2含量和产生速率的快速积累;降低了CAT和...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 王海波  黄椿颖  庞学群  徐兰英  张昭其  
【目的】探讨茉莉酸甲酯(MeJA)对采后香蕉果实耐冷诱导的效果及其对活性氧代谢、Ca2+-ATPase活性的影响。【方法】香蕉果皮用10μmol·L-1MeJA处理1min,在20℃恒温培养1d(取样作第0天),然后置于7℃下离体培养10d,测定果皮冷害指数、细胞膜透性、过氧化氢和超氧阴离子含量、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、NADPH氧化酶以及Ca2+-ATPase活性的变化。【结果】与对照香蕉果皮相比,10μmol·L-1MeJA处理的冷害指数较低、细胞膜透性增加缓慢;MeJA处理诱导了果皮H2O2含量和产生速率的提高,并维持了前4d的高水平,而MeJA处理降低了CA...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 谭卫萍  庞学群  张昭其  黄雪梅  
【目的】研究β-氨基丁酸(BABA)对采后香蕉果实抗病性的诱导作用和贮藏期果皮活性氧含量、抗病相关酶及基因表达量的变化,为探索抗病保鲜新技术提供理论依据。【方法】香蕉果实经5 g·L-1 BABA溶液低压渗透处理,或预先用3.14 mg·L-1的二苯基碘(活性氧合成酶NADPH氧化酶的专一性抑制剂,diphenylene iodonium,DPI)低压渗透,再做BABA溶液低压渗透处理。处理后0、3、6、12、24、48、72 h分别接种2?105个/mL炭疽病菌孢子于果皮上,并测定接种果实在(20±2)℃、85%—95%湿度(RH)下贮藏5—16 d的病斑直径;测定处理24 h后接种果实在(...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 孔祥佳  林河通  郑俊峰  林艺芬  陈艺晖  
【目的】研究热空气处理对冷藏橄榄果实抗冷性的影响及其与脂氧合酶(LOX)活性和膜脂脂肪酸组分变化的关系。【方法】采后‘檀香’橄榄[Canarium album(Lour.)Raeusch cv.Tanxiang]果实38℃热空气处理30 min,采用0.015 mm厚的聚乙烯薄膜袋密封包装,在(2±1)℃下贮藏。贮藏期间定期测定橄榄果实冷害指数和细胞膜透性,果皮LOX活性和膜脂脂肪酸组分。【结果】与对照果实比,38℃热空气处理30 min降低冷藏橄榄果实冷害指数、细胞膜透性和果皮LOX活性,提高果皮棕榈油酸(C16:1)、亚油酸(C18:2)和亚麻酸(C18:3)等不饱和脂肪酸相对含量,降低肉...
[期刊] 华北农学报  [作者] 杨志如  云锦凤  魏建华  徐春波  
为研究冷诱导转录因子CBF1(C-repeat-binding-factor)基因对我国优良豆科牧草——苜蓿的抗寒性的改良作用,试验从拟南芥(Arabidopsis thaliana)中利用PCR方法分离了CBF1基因及其启动子,分别构建了CaMV 35S启动子和来源于拟南芥的CBF1启动子驱动的农杆菌介导的植物转化表达载体,为下一步研究利用CBF1基因改良苜蓿抗逆性奠定了基础。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 黄永辉  杨媚  权永兵  周而勋  
采用含药培养基生长速率法测定苯并噻二唑(benzothiadiazole,BTH)对香蕉枯萎病菌4号生理小种(Fusarium oxysporumf.sp.cubense race 4,Foc 4)的室内毒力,结果表明BTH对Foc 4的EC50为929.9μg/mL,与杀菌剂多菌灵相比,其作用十分微弱。然后,在温室条件下,采用盆栽试验测定BTH对香蕉枯萎病的防治效果,结果表明BTH质量浓度为50μg/mL时的诱抗效果最好,防治效果可达到66.6%,且随着浓度的升高其防治效果逐渐降低。最后,在温室条件下测定BTH处理香蕉苗后,其体内6种防御酶活性的变化,结果表明BTH可以提高香蕉苗体内多种防御...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 王印庚  毛明光  刘宗柱  张家松  陈贵平  廖梅杰  曲江波  
以PolyI∶C(又称聚肌胞)为诱导剂,分别通过腹腔注射、浸泡和投喂3种途径诱导大菱鲆Scophthalmus maximus体内抗病毒蛋白Mx基因的转录,利用半定量RT-PCR方法检测干扰素下游基因-Mx基因的转录水平来确定该诱导剂的诱导效果。结果显示,以上3种途径都能高效诱导Mx蛋白mRNA的转录,均在48h之后达到高峰,其中以浸泡的方式更容易诱导Mx基因转录,且在120h时仍保持较高水平。Mx基因转录的时相变化证明了国产PolyI∶C可以通过多种途径诱导抗病毒蛋白Mx的表达,为实际应用中确定用药途径提供了理论依据。另外,实验初步建立了半定量RT-PCR方法,为检测鱼体内干扰素的表达提供了...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 何全光  邝健飞  陈建业  陆旺金  
【目的】探讨脂氧合酶(LOX)在香蕉果实成熟过程中的作用。【方法】选取1 000μL.L-1丙烯处理采后不同时间(采后10 h和48 h)的香蕉果实,并分析果皮中MaLOX、MaACS和MaACO等基因表达,LOX活性变化、乙烯释放及其与果实成熟的关系。【结果】采后48 h的香蕉果实,经丙烯处理后果皮中LOX活性及基因表达在成熟前呈先下降后升高的趋势,且先于乙烯高峰、MaACS和MaACO基因表达峰出现。丙烯处理虽能诱导采后10 h的香蕉果实果皮中MaACS和MaACO基因的表达,但不能提高果皮中LOX活性和促进果实成熟。【结论】推测香蕉果实在成熟进程中,果皮中LOX和ACO、ACS协同调控香...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 王海波  龚家建  苏新国  张昭其  
【目的】研究香蕉Ca M在温度胁迫及香蕉果实后熟过程中的表达模式,了解Ca M在增强香蕉果实对温度胁迫的适应性作用,解释Ca M参与调控香蕉果实褪绿转黄的机制。【方法】通过比对NCBI数据库中已有物种的Ca M氨基酸序列,设计兼并引物。采用热硼酸法,从香蕉果皮中提取总RNA,通过RT-PCR与RACE方法扩增目的基因。利用DNAMAN软件和NCBI网站对Ca M的氨基酸序列进行氨基酸比对和同源树分析。利用地高辛探针合成试剂盒(PCR DIG Probe Synthesis Kit)合成特异基因带有DIG标记的探针,使用Northern杂交法对Ma Ca M在采后香蕉果实温度胁迫及后熟中的表达规...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 陆秋萍  季锷  蒋明义  
[目的]本文通过对水稻甘氨酸富集基因OsGRP1的研究,从分子角度及生理遗传角度分析其在ABA诱导的抗氧化防护中的作用,并探究OsGRP1是否影响植物抗氧化防护与植物细胞壁发育。[方法]克隆基因分别构建相应重组质粒,用酵母双杂交试验(yeast two-hybrid, Y2H)研究转录因子ZFP36是否与OsGRP1蛋白水平互作,并通过GST pull-down(glutamine-S-transferase pull-down)、免疫共沉淀Co-IP(coimmunop-recipitation)、双分子荧光互补试验(bimolrcular fluorescence complementation, BiFC)辅证互作的真实性。观察ABA和H_2O_2条件下不同时间处理野生型水稻幼苗后OsGRP1转录水平表达的变化情况,鉴定OsGRP1转基因材料并测定突变体中与抗氧化防护相关的CAT和SOD活性及OsCatB基因和OsSodCc2基因的表达量,利用遗传材料分析在干旱和氧化胁迫下的耐逆性。[结果]OsGRP1基因的CDS序列为642 bp,编码214个氨基酸。通过Y2H、GST pull-down、Co-IP、BiFC证实OsGRP1与ZFP36互作的真实性。ABA和H_2O_2等处理均可诱导OsGRP1基因的表达上调。超表达OsGRP1基因可以提高抗氧化防护酶CAT和SOD活性及诱导OsCatB和OsSodCc2基因上调表达,并且OsGRP1-OE水稻在干旱和氧化胁迫下的存活率明显高于野生型水稻,而OsGRP1-KO水稻在干旱和氧化胁迫下的存活率明显低于野生型水稻,证明超表达OsGRP1基因增强了水稻对干旱胁迫和氧化胁迫的耐受性。[结论]OsGRP1参与ABA诱导的抗氧化防护途径并增强了水稻对干旱和氧化胁迫的耐性。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 刘胜毅  刘仁虎  Akinwunmi O Latunde-Dada  Hans Cools  Bruce D L Fitt  John A Lucas  
[期刊] 中国农业科学  [作者] 王尉  胡玉林  莫亿伟  孙德权  谢江辉  
【目的】研究防御基因表达模式,筛选抗枯萎病候选基因,进一步阐明抗病机制。【方法】以4号枯萎病生理小种诱导的‘农科1号’香蕉为试材,利用DSN(duplex-specific nuclease)均一化酶结合SMART(switching mechanism at 5′end of the RNA transcript)技术构建香蕉根的均一化全长cDNA文库;并用多重半定量RT-PCR技术研究防御基因的表达模式。【结果】经检测,文库滴度为3.1×106 cfu.mL-1,扩增后库容为2.8×108 cfu.mL-1。随机挑选580个克隆进行测序,去除低质量序列后获得421个unigenes,片段分...
[期刊] 北京林业大学学报  [作者] 王艳  尹静  马泓思  詹亚光  苏欣  梁甜  张梦岩  
为探讨Ca2+作为信号分子在水杨酸(SA)诱导白桦悬浮细胞三萜合成中的作用,本文用SA、Ca2+及Ca2+阻断剂对白桦悬浮细胞进行处理,采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定细胞中总三萜及其组分的积累量;同时利用荧光定量PCR方法检测了白桦细胞中三萜合成途径关键酶基因(FPS、SS、SE、BPW、BPY、CAS)和钙调蛋白基因表达变化。结果显示:水杨酸可诱导白桦悬浮细胞三萜物质(总三萜、齐墩果酸、白桦脂醇、白桦脂酸)的合成及相关基因的上调表达,且Ca2+的加入使得这种诱导效应更为显著,暗示白桦细胞中钙信号分子介导了水杨酸诱导三萜物质的合成。而对SA与各种Ca2+阻断剂互作处理结果显示,Ca2+...
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 常新  梁晋军  刘振华  肖坤  王燕  崔海洋  胡建芳  
为探讨葡萄高效再生体系的优化,以黑香蕉葡萄品种叶片、叶柄、茎尖分生组织为外植体,对其再生体系进行了优化,同时比较了不同器官再生的效果。结果显示:适合叶片再生的培养基为:MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,但再生率仅为4.88%;适合叶柄再生的培养基为:NN69+1.33mg/L6-BA+0.02mg/L NAA,再生率为16.92%。说明叶柄的再生率高于叶片但两者都没有超过20%。并且NAA对黑香蕉叶柄的再生效果好于IBA。NN69基本培养基要优于MS。以茎尖为外植体在起始培养基MS+6-BA 1.40mg/L+NAA 0.09mg/L和诱导培养基培养MS+2mg/L 6-BA+0.09mg/L NAA上通过反复损伤芽尖得到茎尖分生组织(Meristematic bulk,MB),其不定芽诱导率高达87.63%。说明利用茎尖分生组织建立的葡萄再生体系更适合葡萄的遗传转化。
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