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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
周洋 郑文燕 胡帝宇 童智子 蒋松宏 王怡丹
含半胱天冬酶募集结构域的膜相关鸟苷酸激酶蛋白3(caspase recruitment domain and membrane-associated guanylate kinase-like domain protein 3,CARMA3)属于CARMA家族,是一个新型的骨架蛋白。CARMA3通过调控NF-κB信号通路的激活,影响细胞的周期进程、增殖和信号转导,从而影响癌症的发生和细胞应答。论文介绍了NF-κB信号通路的激活过程、G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)的配体、DNA损伤和感染可激活CARMA3介导的NF-κB信号通路、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的活性水平受CARMA3介导的NF-κB信号通路的影响、A20负调控CARMA3介导的NF-κB信号通路,以及CARMA3与癌症发生的关联,旨在为基于NF-κB信号通路的细胞周期进程、增殖和细胞应答方面的研究提供参考。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王华夏 顾峰 廖瑛 茅翔 丁铲 范红结
[目的]本文旨在探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染过程中细胞因子显著上调的机制。[方法]NDV感染He La细胞,用RT-PCR法检测IFN-β、IL-6、IL-8 mRNA水平。Western blot分析和免疫荧光分析检测NDV对双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)与NF-κB信号通路的影响。[结果]与未感染组相比,IFN-β、IL-6、IL-8 mRNA水平显著上调。NF-κB信号通路在感染后1224 h被激活,转录因子p65入核,而使用NF-κB信号通路抑制
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
白贵斌 王媛 燕超 刘晓明 李勇
【目的】探讨在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染小鼠早期,其肺脏上皮细胞中NF-κB和p53信号通路参与机体的免疫调控作用。【方法】将C57BL/6 Cnc小鼠30只(雄、雌各15只),按5只/组设空白对照组、阴性对照组(腹腔注射生理盐水)和MTB感染组(腹腔注射牛结核分枝杆菌减毒株(卡介苗,BCG)),感染4 d后经安乐死处死小鼠,摘取小鼠肺脏和脾脏进行形态学观察;将小鼠肺脏进行冰冻超薄切片,HE染色分析其肺脏病理变化;利用免疫组织荧光技术和激光共聚焦显微镜,标记SP-C阳性肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的位置,观察NF-κB和p53蛋白在肺泡上皮细胞中的表达情况。提取小鼠肺脏组织细胞总蛋白,以β-actin为内参,通过Western blot分析NF-κB和p53信号通路相关因子TLR4、TRAF6、NF-κB、p53、MDM2和CBP在蛋白水平上的变化。【结果】在MTB感染小鼠4 d后,小鼠肺脏形态无明显变化,脾脏1/3尖部瘀血变黑;HE染色发现肺脏组织炎性细胞浸润。在小鼠肺脏上皮细胞中NF-κB与p53蛋白免疫荧光表达较空白对照组和阴性对照组增强。TLR4、NF-κB、p53、MDM2和CBP蛋白在雄性与雌性小鼠中都呈现出显著上调。【结论】当结核分枝杆菌感染小鼠时,小鼠肺脏上皮细胞通过NF-κB和p53信号通路活化来参与宿主抗结核分枝杆菌病感染的免疫调控作用。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
段滇宁 郭华 李晓琳 陈萌萌 张亚群 韩俊源 张书霞
选取8头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗原、抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取其脾脏制成单细胞悬液后,随机分为4组:对照组、NF-κB抑制剂组(抑制剂组)、PCV2组和NF-κB抑制剂-PCV2组(抑制剂-PCV2组),体外培养24 h后收获淋巴细胞及培养上清液。ELISA方法检测培养上清液中IL-4和IL-12的含量;间接免疫荧光定位检测PCV2感染淋巴细胞的情况和核因子κB(NF-κB)蛋白入核情况,Western blot定量检测细胞浆中髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化抑制性核因子кB(p-IкB)及NF-κB/p65和细胞核中NF-κB/p65蛋...
[期刊] 水产学报
[作者]
罗云江 柳盈 姚翠鸾
为研究大黄鱼双免疫球蛋白白细胞介素1受体相关分子(double immunoglobulin interleukin-1 receptor-related molecule, DIGIRR)在免疫反应中的作用，本实验克隆了大黄鱼digirr (Lcdigirr)的编码区序列；采用荧光定量PCR (qPCR)对大黄鱼各组织及免疫刺激后的脾脏、头肾等组织及大黄鱼肾细胞系(LCK)中的Lcdigirr表达情况进行了检测；构建了重组表达质粒pTurboGFP-DIGIRR及pcDNA3.1-DIGIRR，分别以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因及双荧光素酶报告系统，研究了Lc DIGIRR的亚细胞定位及过表达后对NF-κB启动子活性的调控。结果显示，Lcdigirr的开放读码框(ORF)包含1 575 bp核苷酸，编码524个氨基酸，理论分子量为59.4 ku、等电点(pI)为5.76,N端包含2个免疫球蛋白(Ig)结构域、1个跨膜区及1个Toll/白细胞介素-1受体(TIR)结构域，属于保守的硬骨鱼类DIGIRR家族；qPCR结果显示，Lcdigirr在大黄鱼多组织均有表达，其中在肠道中表达量最高；采用变形假单胞菌及脂多糖(LPS)、鞭毛蛋白、多聚肌-胞苷酸[poly (I:C)]等分别进行体内与体外刺激，均可诱导其表达量显著增加；亚细胞定位结果显示，Lc DIGIRR主要存在于细胞的膜质区；过表达Lc DIGIRR能够显著抑制nf-κb及MyD88介导的nf-κb的转录激活。综上表明，Lcdigirr可能通过抑制nf-κb的转录激活，在大黄鱼的免疫反应中发挥负调控作用。对于深入理解大黄鱼的免疫反应机制具有重要意义。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
姜世丹 李璐茜 潘俊 唐美玲 朱泽娇 胡瑜 李益盛 曲媛
【目的】比较6种不同人参属药材提取物的体内外抗炎活性差异，并探讨其抗炎活性机制。【方法】采用CCK-8法检测RAW264.7细胞活力，Griess法检测NO释放，ELISA法检测细胞分泌炎症因子情况，Western blot法检测NF-κB信号通路中关键蛋白表达情况。采用二甲苯所致小鼠耳肿胀模型，检测耳肿胀度及HE染色的病理切片情况。【结果】在给药浓度为0.02、0.20 mg/mL时，6种人参属药材提取物对RAW264.7细胞活力无显著抑制作用(P>0.05)。6种人参属药材提取物在0.2 mg/mL浓度下均显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞上清液中NO含量的升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001),其中屏边三七抑制作用最强。与LPS组相比，6种人参属药材提取物均显著降低细胞分泌的TNF-α含量(P<0.01或P<0.001)。屏边三七组和竹节参组均显著逆转LPS诱导的细胞中p-NF-κB、IκBα蛋白表达量的升高；而珠子参组和竹节参组均显著抑制NF-κB蛋白表达。此外，6种人参属药材提取物对二甲苯所致小鼠耳肿胀具有剂量依赖性抑制作用，其中屏边三七组、三七组、西洋参组及竹节参组对小鼠耳肿胀的抑制率分别为91.11%、68.89%、82.22%、64.44%。小鼠耳组织HE染色结果表明，模型组小鼠耳组织出现明显结缔组织水肿，间隙增加及炎性细胞浸润。6种人参属药材提取物组与模型组相比水肿反应和炎性细胞浸润减少，其中屏边三七改善效果最好。【结论】6种人参属药材具有体内外抗炎作用，且活性存在差异，其机制作用可能与调节NF-κB信号通路相关。
[期刊] 华北农学报
[作者]
殷珂 田文儒 李华涛
热应激(环境高温或热性疾病)致附植前胚胎发育阻滞/死亡是导致家畜(尤其是奶牛)夏季妊娠率低的主要因素,就热应激时附植前胚胎丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路的级联激活调节细胞增殖和分化,阻遏细胞凋亡,促进生长因子表达等研究和热应激时MAPKs信号通路对牛附植前胚胎的信号调控进行综述,重点阐述MAPKs通路对附植前胚胎的重要作用。通过对近年来国内外对附植前胚胎受热损伤和MAPKs信号通路的级联激活以及它们之间关联的研究进展的总结,并结合青岛农业大学产科实验室近年来对降低夏季由热应激引起的细胞凋亡的相关研究,来揭示附植前胚胎耐热应激损伤的MAPKs信号通路调控的研究进展。MAPKs信号通路在附植前胚胎的信号转导通路中占有重要位置。在热应激作用下,附植前胚胎经历氧化、凋亡和合成调节蛋白过程,胚胎能否存活,取决于其自身耐热能力及胚胎生存环境,并需要借助于信号通路的精细调控,不论是内因还是外因都可能通过MAPKs信号通路级联调控胚胎存亡。热应激时,MAPKs信号通路各成员在附植前胚胎中的生物学效应各不相同,并且相互联系,共同调控着附植前胚胎的分化、凋亡等过程,转导刺激信号,参与机体内的反应。热应激后胚胎细胞的生死取决于自身抗热能力(内因)和其在子宫/培养的生存环境(外因),并且内、外因素均与MAPKs信号转导通路有关。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
丁明星 王玉莲 朱惠玲 刘振利 袁宗辉
免疫激活主要通过多种细胞因子影响动物食欲和促进机体蛋白质及糖类分解,降低动物的生长性能。抗菌药物可调节免疫细胞活性,影响机体免疫激活状态。现有的研究提示,在应用抗菌药时除应注意考虑其在体内的药效外,还应考虑其免疫调节作用,以维护动物健康,促进动物生长。
关键词：
免疫激活 抗菌药 免疫调节
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王文静 马浩然 李加纳 张洪博
随着植物基因组测序工作的迅速发展,植物功能基因组学已经成为植物分子生物学研究的重要内容,而大量有表型的突变体是进行功能基因组学研究的重要基础。Ac/Ds转座子激活标签技术(Ac/Ds transposonactivation tagging system)的产生使Ac/Ds转座子标签技术具有了产生显性突变的功能,并可避免在突变体库创建过程中进行大量繁重的人工转基因操作,是比较理想的植物功能基因组学研究工具。本文将对Ac/Ds转座子激活标签技术在发展过程中利用不同激活标签创建植物突变体库的研究进行介绍,并对近二十几年来报道的相关应用研究展开论述,以期对该领域的技术进步和应用研究提供一些有益的启发...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
范彩云 张运海 王菊花 王尚 朱飞 赵男 程建波
为探讨ＨＨ信号通路在脂肪细胞分化过程中的作用机制，以猪脂肪间充质干细胞（ＡＤＳＣＳ）为材料，应用油红Ｏ染色法检测ＡＤＳＣＳ成脂分化过程中的形态变化；采用荧光定量ＰＣＲ及ＷｅＳｔｅＲｎ ＢｌＯｔ的方法检测ＨＨ通路Ｇｌｉ１及脂肪细胞分化转录因子的时序表达。通过嘌呤衍生物２，６，９－三元取代嘌呤（ＰｕＲｍＯＲＰＨＡｍｉｎｅ，Ｐｍ）激活猪ＡＤＳＣＳ细胞中ＨＨ信号通路，探讨体外激活ＨＨ信号通路对猪ＡＤＳＣＳ向脂肪细胞分化的作用及其机制。结果显示，在成脂诱导分化的过程中，经５μｍＯｌ／ｍｌ的Ｐｍ持续处理，细胞中Ｇｌｉ１的ｍＲｎＡ及蛋白表达量增加；猪ＡＤＳＣＳ向脂肪细胞分化的数目减少、细胞内甘油三酯含量降低．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
周泽斌 丁少青 程沛茹 任建峰 李伟明 张庆华
核转录因子NF-κB (nuclear factor kappa B)对机体的免疫反应、炎症反应等起重要的调控作用。为了获得NF-κB基因启动子的活性报告基因，进一步研究原始脊椎动物免疫应答的机制，我们根据此前克隆得到的东北七鳃鳗NF-κB基因的编码序列 (coding sequence，CDS），以与东北七鳃鳗高度同源的日本七鳃鳗同源基因 5’上游启动子特征序列为模板设计引物，克隆获得了东北七鳃鳗NF-κB启动子序列，该序列全长3 169 bp，提交至NCBI 数据库Genbank获得登录号MN368861。经AliBaba2.1软件预测该序列包含CREB (cgtgacttca)、Oct-1 (aatatgaatt)、GATA-1 (gaacctatct)、AP-1 (ggttgagtca)、NF-kappa B (ctttcctgtt)、IRF-1 (tttcctgttc)、Sp-1 (tgtgaggggt)、c-Jun (acgtgacttc)和c-Fos (ggttgagtca) 等多个转录因子结合位点，并包含TATA box转录核心元件。通过MethPrimer软件预测在序列1 207-1 402 bp处存在CG含量大于50%，长196 bp的CpG岛。利用双酶切技术构建了pGL3-NF-κB-pro重组质粒，并将其转染至人胚肾细胞（human embryonal kidney, HEK293T）和鲤上皮瘤细胞（Epithelioma papulosum cyprinid, EPC）中。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示该片段序列在哺乳动物细胞系和鱼类细胞系中均具有启动子活性，同时在HEK293T中经过Toll样受体（Toll-like receptors，TLR）的配体LPS刺激后启动子活性显著上升。本研究成功构建了东北七鳃鳗NF-κB启动子报告基因，并在不同细胞系中证实了其活性。LPS刺激后的检测结果揭示东北七鳃鳗NF-κB参与了TLR信号通路的免疫应答。东北七鳃鳗NF-κB报告基因的构建为探究原始脊椎动物免疫系统信号传导机制奠定了基础。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
宋志琦 王进 朱婷 周向梅 杨利峰 赵德明
为检测以LRP6受体为激活开关的Wnt-β-catenin信号通路与PrP106-126毒性多肽引起的神经元损伤之间的相互关系,并研究该信号通路与神经保护性蛋白REST的相关性,从而进一步阐明Wnt-LRP6-REST对毒性多肽引起的神经元损伤的影响。利用Wnt信号通路的激活剂Licl、抑制剂DKK1或PrP106-126毒性多肽刺激原代神经元,通过免疫印迹检测神经保护性蛋白REST及Wnt信号通路下游相关蛋白的变化情况,通过激光共聚焦观察REST与Wnt信号通路正相关蛋白β-catenin的共定位情况。
[期刊] 华中师范大学学报(自然科学版)
[作者]
尹芬芬 杨帆帆 谢中艺 王雨柔 黄新祥 生秀梅 张盈
为探究伤寒沙门菌对巨噬细胞凋亡及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand, TRAIL)信号通路的影响,对伤寒沙门菌感染THP-1细胞早期和后期提取细胞RNA进行转录组测序(RNA-seq).通过定量PCR(qPCR)技术检测凋亡相关基因的转录水平,对RNA-seq结果进行验证,流式细胞术和蛋白质免疫印迹法检测THP-1细胞的凋亡和凋亡相关蛋白;加入TRAIL抗体结合TRAIL蛋白后,流式细胞术和蛋白质免疫印迹法检测感染早期THP-1细胞凋亡的变化.结果显示,伤寒沙门菌感染THP-1细胞后,凋亡相关基因caspase-3、caspase-8、caspase-9在感染后期转录水平显著增加,Tnfsf10、Tnfrsf10b、Tnf、Fas在感染早期和后期转录均增加,细胞凋亡率明显增加,caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白活化增加,TRAIL、DR5蛋白表达增加;与PBS对照组相比,加入TRAIL抗体后caspase-3蛋白活化明显减弱,细胞凋亡率明显下降.综上,伤寒沙门菌通过部分激活TRAIL信号通路来诱导巨噬细胞凋亡.
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
单建伟 柳俊 索海翠 王丽 安康 刘计涛 景晟林 李成晨 宋波涛 李小波
马铃薯是全球最大的非谷类粮食作物,在全球经济和粮食安全中发挥重要作用。块茎是马铃薯的经济器官和繁殖器官,存储了大量淀粉,其发育过程受糖信号调控。糖信号调控马铃薯块茎形态建成及库源关系。本文概述了植物糖信号途径,糖信号调控马铃薯块茎形态建成、淀粉积累及其与光周期、植物激素等信号途径的关系等方面的研究进展,并在此基础上提出了糖信号调控马铃薯块茎发育的模式,旨在为进一步阐明糖信号调控马铃薯块茎发育的机制提供借鉴。
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